只小 鼠。使用下文所述5种配制品中的一种治疗这5组小鼠：
[0198] 组A:通过注射100μ1NaCl(对照Ν° 1)来治疗。
[0199] 组Β:根据小鼠体重通过注射100到150μ1不含化合物4. 2a的配制品2 (对照 N° 2)来治疗。
[0200] 组C:用化合物4. 2a以10mg/kg的比率来治疗，根据小鼠体重使用100到150μ1 体积的配制品2。
[0201 ] 组D:用化合物4. 2a以5mg/kg的比率来治疗，根据小鼠体重使用100到150μ1体 积的配制品2。
[0202] 每一批次是通过向尾静脉中静脉内注射100到150μ1溶液（精密注射器和G25X1 超细壁针，VWR)来治疗。在4周内每周执行3次注射。在每次注射时将小鼠称重。在4周 后杀死小鼠并移除肿瘤和器官（肝、肾、脾、脑、肠、心、肌肉）。对这些器官执行一种组织学 分析。
[0203] 源自一种人类黑色素瘤的MDAMB-435细胞系能在裸鼠中皮下植入乳腺中后转移。 特定来说，对照组（组A和B)中的所有小鼠都在肝和肠中发生转移。经化合物4. 2a治疗 的小鼠（组C和D)经历转移发生（小尺寸转移）的减少和转移数的显著减少。
[0204] 图4显示在对照小鼠（组A和B)的卵巢中存在转移，并且在经化合物4. 2a治疗 的小鼠（组C和D)中不存在转移。
[0205] 图5显示每只小鼠的平均转移数随治疗条件而变。其显示，经化合物4. 2a治疗的 小鼠（组C和D)都未发生两个以上转移。另一方面，对照小鼠（组A和B)大多发生两个 以上转移。
[0206] 图6显示这些继发性肿瘤随治疗条件而变的质量分布。其显示，用化合物4. 2a治 疗减少转移的发生。
[0207] f)活体外抗增殖活性
[0208] 将细胞系MDAMB-435和A431以3000个细胞/孔的密度接种于96-孔板中。在24 小时后，以〇-〇. 001-0. 010-0. 1-1-10-50μΜ的浓度添加再悬浮于100%DMS0中的化合物 4. 2a和5. 6d，以获得0. 3%DMS0的最终恒定量。将培养物再维持72小时，然后执行一种ΜΤΤ 色度法测试。将100μ1MTT于PBS中的5mg/ml溶液添加到培养基中，将其孵育3小时。移 除培养基并通过添加100L的一种4mMHC1溶剂、异丙醇中的0. 1%NondetP-40(NP40)来 裂解这些细胞。在黄色四唑鑰MTT盐（3-(4, 5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑鑰溴 化物）通过活性活细胞的线粒体琥泊酸脱氢酶还原时，其形成一种蓝紫色甲臜（formazan) 产物。然后培养基从黄色变为蓝紫色。在590nm下，这种显色的强度与测试期间存在的活 细胞数成比例，并且指示这些细胞的代谢活性。
[0209] 表1给出化合物4. 2a和5. 6d对衍生自以下癌症的细胞系的50 %增殖抑制的 浓度值（IC5。）：肠癌（bowelcancer) (CaCo2)、皮肤癌（A431、MDAMB-435、B16F10)、乳腺癌 (MDAMB-431)、肠癌（intestinalcancer) (HuH7)、前列腺癌（DU145)和脑癌（SNB75、Gli4、 Gli7)。
[0210] 表1 :化合物4. 2a和5. 6d对各种癌细胞系的抗增殖效应
[0211]
[0212] 表1显示，化合物4. 2a和5. 6d对不同人类和大鼠组织的各种癌症系具有抗增殖 活性。具体来说，化合物4. 2a以0. 66μΜ的IC5。抑制人类黑色素瘤系MDAMB-435的细胞增 殖，并且化合物5. 6d以ΙΟΟηΜ的IC5。抑制A431细胞系（人类表皮样癌）的增殖。
[0213] g)活体外抗迀移活性
[0214] 通过在博伊登室（Boydenchamber)中执行一种标准迀移测试（将这些细胞处理 24小时）来测定化合物3. 48a、4. 2a和5. 6d对癌细胞（一方面，人类胶质母细胞瘤系SNB75 或人类胶质母细胞瘤Gli4Fl的原代培养物，以及另一方面MDAMB435和A431)迀移的效 应。
[0215] 对于这种测试，在活体外溶解这些化合物并用于0. 3%DMS0中的培养物中。用所 研究的细胞外基质蛋白质（层粘连蛋白-1、玻连蛋白或纤连蛋白）覆盖插入物的内部。将 以各种浓度预处理和未经处理（对照）的细胞以50000个细胞/500μ1/插入物的比率沉 积于经所述蛋白质覆盖的插入物中的一种含有0. 1%BSA(牛血清白蛋白）的培养基中。
[0216] 然后将500μ1含有10%胎牛血清的培养基置于一个配套板（Companionplate) 的每个孔中，以容许横跨多孔膜形成趋化性梯度。在孵育器中在37°C下迀移24小时后，移 除上清液并用PBS在每个面上冲洗插入物。用显微镜（ZeissAxiophot，放大X200)计数 细胞。得出相对于未经处理细胞的迀移百分比。
[0217] 下表2给出在博伊登室中在各种细胞外基质蛋白质支撑物上，化合物3. 48a针对 一种人类GBM系（SNB75)、GBM干细胞系（Gli4、Gli7)和一种乳腺癌系MDAMB231的迀移的 抑制常数（Ki)值。下表3和4给出在博伊登室中在各种细胞外基质蛋白质支撑物上，化合 物4. 2a和5.6d针对一种黑色素瘤系（MDAMB-435)或一种表皮样癌系（A431)的迀移的抑 制常数（Ki)值。该抑制效应取决于所用的细胞系和干细胞，但也取决于所用的细胞外基质 蛋白质支撑物。
[0218] 表2 :化合物3. 48a对多形性胶质母细胞瘤的各种细胞系和干细胞的抗迀移效应
[0220] 表3 :化合物4. 2a对黑色素瘤系MDAMB-435的抗迀移效应
[0221]
[0222] 表4 :化合物5. 6d对表皮样癌系A431的抗迀移效应
[0223]
[0224] 图2和3和表2显示，化合物3. 48a在多种细胞外基质上以取决于所用基质（玻 连蛋白、纤连蛋白或层粘连蛋白-1)的剂量效应抑制GBM系SNB75和C6以及GBM干细胞 (Gli4和Gli7)的细胞迀移。特定来说，这些癌细胞迀移的50%降低是在纤连蛋白或玻连 蛋白上用浓度低到1到100nM(SNB75系）的化合物3. 48a来获得。
[0225] 表3和4显示，化合物4. 2a和5. 6d分别以取决于所用基质（玻连蛋白、纤连蛋白 或层粘连蛋白-1)的剂量效应抑制细胞系MDAMB-435和A431的细胞迀移。这些癌细胞迀 移的50 %降低尤其是在纤连蛋白或玻连蛋白上用浓度低到10到ΙΟΟηΜ的化合物4. 2a和 5. 6d来获得。
[0226] 根据本发明的化合物（1)的作用模式与假定抗转移的在售化合物的作用模式不 同。不希望受限于一种理论，诸位发明者认为，这些化合物（1)通过抑制催化在α-1，6键结 的甘露糖基团上的β-1，6位置中加成Ν-乙酰基葡糖胺的糖基转移酶来靶向细胞糖基化。 这些修饰的后果是在各种细胞外基质支撑物（例如纤连蛋白或玻连蛋白）上抑制这些细胞 的迀移潜力。
【主权项】
1. 一种用于在患有癌症的患者中减少或预防转移出现的目的的化合物，该化合物对应 于以下通式：其中： Y代表氧、硫或硒原子，优选地氧原子， Z代表0、S、Se、NH或基团NR6,其中R6是任选地经取代的芳基或烷基，优选地氧原子， R1代表氢原子、任选地经取代的烷基或环烷基，或芳基或杂芳基， R2a代表氢或卤素原子、叠氮基团（N3)、碳酸酯或二硫代碳酸酯基团、1H-[1，2,3]三唑 基或基团-X-R2,X代表氧、硫或硒原子、基团NH或NR7,其中R7是任选地经取代的芳基、杂 芳基、烷基或环烷基，X优选地代表0或NH，并且R2代表任选地经取代的芳基、杂芳基、烷基 或环烷基、氢原子、三氯乙酰亚胺酯基团（-C( =NH)CC13)、酰基、甲酰基、磺酰基、亚磺酰基、 叔丁基二苯基甲硅烷基、烯丙基、糖基、酯、酰胺、硫代酰胺或磺酰胺基团，或X-R2代表基团 P(0)R2'R6'，其中R2'和R6'彼此独立地表示任选地经取代的芳基、杂芳基、烷基或环烷基、0H、 烷氧基或芳氧基， R3和R4彼此独立地代表任选地经取代的芳基、杂芳基、烷基或环烷基、氢原子、三氯乙 酰亚胺酯、酰基、甲酰基、磺酰基、亚磺酰基、叔丁基二苯基甲硅烷基、烯丙基、酯、酰胺、硫代 酰胺、磺酰胺或糖基，或替代地R3和R4-起形成式-R3-R4-二价基团，其中-R3-R4-优选地代 表任选地经取代的亚异丙基、苯亚甲基、二苯基亚甲基、环己基亚甲基，优选地4-甲氧基苯 亚甲基，或直链亚烷基，优选地亚乙基， R5代表氢原子或基于烃的基团，该基团包含一个或多个优选地选自氧、硫和氮的杂原 子，更好地是氧。2. 如权利要求1所要求的化合物，其特征在于Y=Z= 0。3. 如权利要求1和2中任一项所要求的化合物，其特征在于基团R5选自以下组：其中R14、R15和R16彼此独立地代表氢原子、任选地经取代的芳基、杂芳基、烷基或环烷 基、三氯乙酰亚胺酯、酰基、甲酰基、磺酰基、亚磺酰基、叔丁基二苯基甲硅烷基、烯丙基、酯、 酰胺、磺酰胺或糖基，或替代地R15和R16-起形成式-R15-R16-二价基团，其中-R15-R16-优选 地代表任选地经取代的亚异丙基、苯亚甲基、二苯基亚甲基或环己基亚甲基，例如4-甲氧 基苯亚甲基，或者直链亚烷基，例如亚乙基。4. 如前述权利要求中任一项所要求的化合物，其特征在于其选自以下式（2)或（3)化 合物：其中R^R'R'R'Y和Z是如权利要求1中所定义，R14、R15和R16彼此独立地代表氢原 子、芳基或杂芳基、任选地经取代的烷基或环烷基、三氯乙酰亚胺酯基、酰基、甲酰基、磺酰 基、亚磺酰基、叔丁基二苯基甲硅烷基、烯丙基、酯、酰胺、硫代酰胺、磺酰胺或糖基，或替代 地R15和R16-起形成式-R15-R16-二价基团。5. 如前述权利要求中任一项所要求的化合物，其特征在于该化合物选自下式的化合 物：其中R1和R2a是如权利要求1中所定义，并且Bn代表苄基。6. 如前述权利要求中任一项所要求的化合物，其特征在于该化合物选自下式的化合 物：其中R1是如权利要求1中所定义，Bn代表苄基，R19和R32彼此独立地代表氢原子、芳基 或杂芳基、任选地经取代的烷基或环烷基、酰基。7. 如权利要求1到5中任一项所要求的化合物，其特征在于1?23代表基团-X-R2,其中X =NH〇8. 如权利要求7所要求的化合物，其特征在于X-R2是NHC(0)R12,其中R12代表芳基或 杂芳基、任选地经取代的烷基或环烷基。9. 如权利要求1到5中任一项所要求的化合物，其特征在于1?23代表基团-X-R2,其中 R2是芳基或杂芳基，优选地杂芳基。10. -种用于在患有癌症的患者中减少或预防转移出现的目的的医药组合物，其特征 在于该医药组合物包含与一种或多种医药上可接受的赋形剂和/或媒剂相组合的至少一 种如前述权利要求中任一项所定义的式（1)化合物。11. 根据权利要求10所述的医药组合物，其特征在于该患者患有一种选自以下的癌 症：多形性胶质母细胞瘤、乳腺癌和非小细胞肺癌，优选地多形性胶质母细胞瘤。12. 如权利要求10和11中任一项所要求的医药组合物，其特征在于该医药组合物包含 至少一种有机溶剂和至少一种表面活性剂。13. -种用于在治疗癌症中使用的组合产物，其特征在于该组合产物包含： i) 至少一种细胞毒性化合物，和 ii) 至少一种如权利要求1到9中任一项所定义的式（1)化合物，该组合产物用于减少 或预防转移出现的目的。
【专利摘要】本发明涉及如说明书中所定义的式(1)化合物的用途，用于在患有癌症的患者中减少或预防转移的发作。本发明还涉及用于在人类或兽医医学中使用的医药组合物，这些医药组合物包含至少一种式(1)化合物。
【IPC分类】A61K31/665, A61P35/00
【公开号】CN105263501
【申请号】CN201480010238
【发明人】N·巴卡拉尔, M·德拉福尔热, M·勒库夫, J-P·于尼奥, P·勒格朗, J-L·皮拉, D·维里厄, J-N·沃勒
【申请人】科学研究国家中心, 国立蒙彼利埃高等化学学院, 蒙彼利埃大学, 巴黎第十三大学, 巴黎南大学-巴黎十一大
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2014年2月25日
【公告号】CA2902276A1, EP2958569A1, US20150376216, WO2014128429A1