睫状充血，虹膜血管扩张，虹膜后粘连甚至瞳孔闭锁，眼内无法窥入，有的大鼠病程中可 见局限性视网膜脱离并迅速发生全视网膜脱离。对于出现明显EAU临床表现的大鼠，10% 水合氯醛过量腹腔注射处死，其它大鼠免疫后第23天同样方法处死。处死后立即摘除眼 球，2. 5%戊二醛固定24h以上，将眼球按子午线方向切开，分成两部分，除去晶状体，常规 梯度酒精固定脱水，石蜡包埋，3~4 μ m切片，HE染色，光学显微镜观察，进行组织学炎症反 应评分。
[0072] 5迟发型变态反应
[0073] 为了评价迟发型变态反应（DTH)，大鼠免疫后第15天，将20yg S-Ag溶于 10 μ 10. 01mol/L磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline, PBS)，注入右耳缘；左耳缘注 入10 μ 1PBS作为对照。分别于注射前和注射后24、48、72、96h，使用微米尺测量双侧耳缘增 厚度。其中每组各有6只大鼠左耳同时在另一部位注射含有20 μ g牛血清白蛋白的10 μ 1 PBS作为对照。耳肿胀反应程度用以下公式计算：注射后24h特异性耳肿胀=(注射后24h 右耳量测值-注射前右耳测量值）八注射后24h左耳测量值-注射前左耳测量值），48、72、 96h特异性耳肿胀测量计算方法类推。
[0074] 6 结果
[0075] 6. 1组织学改变
[0076] S_Ag免疫后，2组大鼠大部分均有光感受器外段（receptor outer segment, R0S) 破坏，正常梳状纹理消失，甚者R0S变薄、消失；此外，炎性细胞浸润的种类、数量和部位、组 织结构改变和破坏程度不等。其中，轻者视网膜内界膜增厚，炎症反应性均质样粉染物质 沉积和（或）伴有局部空泡形成；神经节细胞和视网膜内丛状层空泡样变；视网膜色素上 皮（ret inal pigment epithelium, RPE)细胞肿胀、空泡样变性，结构紊乱；虹膜或睫状体 充血，脉络膜增厚（类上皮细胞浸润），偶见炎性细胞浸润（主要为淋巴细胞）。中度者在 上述改变基础上可见虹膜、睫状体或玻璃体腔内少量炎性细胞浸润；内界膜、内丛状层、内 核层可见局限性炎症灶（炎性细胞聚集）；脉络膜血管管壁增厚，血管炎样反应。重度者在 上述改变基础上，虹膜、睫状体、脉络膜和视网膜各层组织中炎性细胞浸润数量增多，玻璃 体弥漫性炎性细胞渗出；有的眼脉络膜明显炎症性增厚，以淋巴细胞浸润为主；眼组织结 构可见破坏。极重度者眼内大量炎性细胞浸润（中性白细胞为主），浸润部位广泛，甚至累 及结膜、角膜、巩膜、眼肌；眼组织结构完全破坏：尤其视网膜各层组织弥漫性炎性细胞、炎 性渗出物质、坏死组织，可见神经上皮层视网膜脱离、全视网膜脱离或脉络膜脱离。此外，许 多无临床表现者组织学检查可见轻度异常，证明实际发生了 EAU。缓释型他克莫司滴眼剂 组EAU组织学炎症反应评分低于普通型他克莫司滴眼剂组，二者差异具有显著性的意义（P < 0.001)(见下表）。
[0077] 2组大鼠 EAU组织学及DTH评分
[0079] 6. 2 DTH 反应
[0080] 2组大鼠右耳均发生了 S-Ag诱导的DTH反应，全耳明显红肿；左耳没有DTH反应， 局部轻度肿胀，不累及全耳，不发红，且消退迅速。以PBS为对照的2组大鼠特异性耳肿胀 值差异无显著性的意义（P> 0.05)。各时间点比较，24h特异性耳肿胀最明显，48h开始消 退，至96h基本恢复正常。
[0081] 加用牛血清白蛋白作对照者，缓释型他克莫司滴眼剂组特异性耳肿胀值均低于普 通型他克莫司滴眼剂组，但差异无显著性的意义（P > 0. 05)，各时间点耳肿胀规律与PBS作 对照时相同（见下表）。
[0082] 2组大鼠牛血清白蛋白对照DTH评分
[0084] 7 结论
[0085] 在整体水平上，缓释型他克莫司滴眼剂（每天给药1次）和普通型他克莫司滴眼 剂（每天给药3次）均能够抑制大鼠 EAU的发生和减轻EAU的病情，但缓释型他克莫司滴 眼剂每日给药次数较少，而且疗效明显优于普通型他克莫司滴眼剂。
[0086] 本发明人还对他克莫司眼用凝胶和他克莫司眼膏进行了稳定性、释放度、药代动 力学和药效学验证，其稳定性、释放度、在眼部的药代动力学特征和参数，以及对葡萄膜炎 等眼部免疫性疾病的治疗效果与他克莫司滴眼液相比，没有明显差异。
【主权项】
1. 一种缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于以他克莫司为药效原料，以黄芪和/或 三七作为粘膜粘附性聚合物释药系统，并配以眼局部可以接受的药剂学上所说的制剂辅料 所制备成的缓释型制剂，其中每100重量份药剂中他克莫司的含量为0. 01~1. 0重量份， 他克莫司与黄芪以及三七按其重量比表示为：他克莫司：黄芪和/或三七=1 : 0.5~ 5. 0〇2. 根据权利要求1所述的缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于，其剂型为滴眼液、眼 用凝胶、眼药膏或药剂学上所说的任何一种适于眼局部外用的剂型。3. 根据权利要求1所述的缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于，黄芪和/或三七粘膜 粘附性聚合物释药系统，黄芪和三七的重量比为：黄芪：三七=1 : 3,或者黄芪和三七中 的任一种。4. 根据权利要求2所述的缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于，当所制作的剂型为 滴眼液或眼用凝胶时，原料组分还包括抑菌剂；所述抑菌剂为硫柳汞、季铵盐类、杜米芬、冼 必泰、三氯叔丁醇、尼泊金类、三梨酸中任何一种或所述品种的任意组合；抑菌剂的用量以 与他克莫司的重量比表示为，他克莫司：抑菌剂=1.0 : 0.002~0.5。5. 根据权利要求2所述的缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于，当所制作的剂型为 滴眼液时，原料组分还包括增稠剂；所述增稠剂为羟丙甲纤维素、甲基纤维素、玻璃酸钠、聚 乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚卡波非中的任何一种或所述品种的任意组合；增稠剂的用量以 与他克莫司的重量比表示为，他克莫司：增稠剂=1. 〇 : 〇. 1~1. 0。6. 根据权利要求2所述的缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于，当所制作的剂型为 眼用凝胶时，原料组分还包括增稠剂；所述增稠剂选自羟丙甲纤维素、甲基纤维素、玻璃酸 钠、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、卡波姆、硫酸软骨素、聚卡波非中的一种或 所述品种的任意组合；增稠剂的用量以与他克莫司的重量比表示为，他克莫司：增稠剂= 1. 0 : 0· 5 ~5. 0〇7. 根据权利要求3或4或5所述的缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于，当所制作 的剂型为滴眼液或眼用凝胶时，使用pH调节剂调节成品药剂的pH值为5. 5~7. 5 ;所述pH 调节剂为氢氧化钠、盐酸、枸橼酸钠、枸掾酸、硼酸、硼砂中的任何一种或所述品种的任意组 合。8. 根据权利要求3或4所述的缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于，当所制作的剂型 为滴眼液时，使用渗透压调节剂调节滴眼液的渗透压摩尔浓度为250~350m0sm〇l/kg;所 述渗透压调节剂为氯化钠、甘露醇的一种或两品种的任意组合。9. 根据权利要求3或4或5所述的缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于，当所制作的 剂型为滴眼液或眼用凝胶时，使用助溶剂促进西莫罗司溶解，所述助溶剂为聚山梨酯-80、 氢化蓖麻油的一种或两品种的任意组合。10. 根据权利要求2所述的缓释型他克莫司眼用制剂，其特征在于，当所制作的剂型为 眼药膏时，原料组分与辅料用量重量比例为：他克莫司：无水羊毛脂：液状石蜡：黄凡士 林=1 : 8 ~15 : 2 ~10 : 75 ~95。
【专利摘要】本发明涉及一种缓释型他克莫司眼用制剂，其特征是以他克莫司为药效原料，以黄芪和/或三七作为粘膜粘附性聚合物释药系统，配以眼局部可以接受的药剂学上所说的制剂辅料所制备成的缓释型制剂，其中每100重量份药剂中他克莫司的含量为0.01～1.0重量份，他克莫司与黄芪以及三七的用量按其重量比表示为：他克莫司∶黄芪和/或三七＝1∶0.5～5.0，其中黄芪和三七的重量比为：黄芪∶三七＝1∶3。按本发明方法制备的他克莫司滴眼剂眼局部外用具有良好的眼内穿透性，眼内生物利用度较高，毒副作用小，治疗及预防自身免疫性葡萄膜视网膜炎等眼部免疫相关性疾病。
【IPC分类】A61K36/481, A61P27/02, A61K31/436, A61K47/46, A61P27/14, A61P37/06, A61K36/258
【公开号】CN105288641
【申请号】CN201410369160
【发明人】姚向超, 王海英, 王延东, 李晓纯, 吴绮峰, 曹琛
【申请人】广东宏盈科技有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2014年7月30日