1. OmL/min， 缓冲液A :0. 1 % TFA的去离子水，缓冲液B :0. 1 % TFA的乙腈）。
[0244] 结果表明，木瓜蛋白酶处理的双（吉西他滨-5' -琥珀酰-GFLG)磷脂酰胆碱脂质 体溶液在6小时后释放出的吉西他滨药物达到总量的32%，15小时后释放出的吉西他滨 达到71% ;未经酶处理的脂质体溶液未检测出吉西他滨。木瓜蛋白酶处理的双（吉西他 滨_5'_琥珀酸酯）磷脂酰胆碱脂质体溶液在6小时后未检出吉西他滨，15小时后释放出的 吉西他滨仅1%;未经酶处理的脂质体溶液未检测出吉西他滨。可见，双（吉西他滨_5'_琥 珀酰-GFLG)磷脂酰胆碱脂质体具有酶快速降解性，快速释放出吉西他滨原药。
[0245] 实施例31 :
[0246] 双（吉西他滨_5' -二硫代二乙酸）磷脂酰胆碱脂质体的体外降解试验
[0247] 实施例25制备的0. lmmol双（吉西他滨_5'_二硫代二乙酸）磷脂酰胆碱脂质体 纳米颗粒10mL PBS溶液，实施例23制备的0. lmmol双（吉西他滨-5'-琥珀酸酯）磷脂酰 胆碱脂质体纳米颗粒10mL PBS溶液，分别分成2份，其中一份加入谷胱甘肽（GSH)的PBS 缓冲液〇. 5mL(GSH浓度50mmol)，另一份加入PBS缓冲液，放置与培养箱中37°C下孵育，用 高效液相色谱检测吉西他滨含量（Agilent 1100LC，Zorbax反相C18柱，150X4. 6mm，5 μ m， 进样量20 μ L，柱温25°C，检测波长λ = 254nm ;梯度淋洗：2-90%缓冲液B/A，流速1. OmL/ min，缓冲液A :0. 1 % TFA的去离子水，缓冲液B :0. 1 % TFA的乙腈）。
[0248] 结果表明，GSH处理的双（吉西他滨-5'-二硫代二乙酸）磷脂酰胆碱脂质体溶液 在3小时后释放出的吉西他滨药物达到总量的94%;未经GSH处理的双（吉西他滨-5'-二 硫代二乙酸）磷脂酰胆碱脂质体溶液3小时后未检测出吉西他滨；GSH处理的双（吉西他 滨-5' -琥珀酸酯）磷脂酰胆碱脂质体溶液和未经GSH处理的双（吉西他滨-5' -琥珀酸 酯）磷脂酰胆碱脂质体溶液在3小时后未检测出吉西他滨。
[0249] 所以，双（吉西他滨-5' -二硫代二乙酸）磷脂酰胆碱脂质体具有GSH敏感性，可 由GSH控制快速释放吉西他滨原药。双（吉西他滨-5' -琥珀酸酯）磷脂酰胆碱脂质体不 能被GSH降解，难以快速释放药物。
[0250] 药理实验
[0251] 实验例32 :
[0252] MTT法人癌细胞杀伤试验：双（吉西他滨_5'_二硫代二乙酸）磷脂酰胆碱药物脂 质体的抗肿瘤活性
[0253] MCF-7人乳腺癌细胞以8X 103个/孔的接种量接种于96孔培养板，5% CO 2、37°C 培养箱中培养24h后，每孔加入不同浓度的实施例25的双（吉西他滨-5' -二硫代二乙 酸）磷脂酰胆碱脂质体微球溶液和对照吉西他滨药物溶液（吉西他滨溶于生理盐水）各 100 μ L，使最终筛选的药物终浓度分别为5、25、100、250、500 μ g/mL，继续培养24h后；分别 加入50 μ LMTT温育4h，弃去培养基，加入150 μ LDMSO,在平板摇床上摇匀，酶标仪495nm读 板，根据测得的吸光度值计算细胞抑制率。数据表示为平均数土SD(η = 6)。
[0254] 结果显示，对肿瘤细胞，脂质体的致死率高于对照吉西他滨原药，显示前者优异的 抗肿瘤活性。其中药物脂质体的IC50大约为500微克/毫升，原药的IC50大约4000微克 /毫升。
[0255] 实验例33 :
[0256] 亲水药物磷脂脂质体小鼠体内毒性试验
[0257] 动物：ICR小鼠，雄性，18_22g，购自维通利华实验动物技术有限责任公司。
[0258] 实施例25的双（吉西他滨_5'_二硫代二乙酸）磷脂酰胆碱吉西他滨脂质体的体 内毒性试验的结果（表2)表明，其最大耐受剂量大于850mg/kg，表明其毒性远小于吉西他 滨原药。
[0259] 表2小鼠体内毒性试验结果
[0261] 实验例34 :
[0262] 脂质体体内药效和毒性实验
[0263] 裸鼠模型的制备：收集培养的MCF-7细胞悬液，浓度为1X107个/ml，以每只0. 1ml 接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。分组与给药：裸鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，肿瘤生 长至75_3时将动物随机分组。同时，各组裸鼠开始给药，给药方案见组别与给药方案，使 用测量瘤径的方法，动态观察受试样品的抗肿瘤效应。肿瘤体积（TV)的计算公式为：TV = l/2XaXb2 (式3-2)，其中a、b分别表示长宽。
[0264] 组别及给药方案：空白组：生理盐水，静脉注射，每三天注射一次，体积为0. 2ml， 连续3周。对照组：吉西他滨溶于生理盐水（给药量30mg/kg)，静脉注射，每三天注射一次， 体积为0. 2ml，连续3周。药物组：实施例25的双（吉西他滨-5' -二硫代二乙酸）磷脂 酰胆碱脂质体溶液（给药量相当于吉西他滨30mg/kg)，静脉注射，每三天注射一次，体积为 0.2ml，连续3周。期间，测量体重变化。
[0265] 抗肿瘤活性和体重变化结果见图24。从抗肿瘤活性（图24a)来看，本发明药物磷 脂脂质体具有良好的抑制肿瘤生长作用，且动物体重没有下降（图24b)，显示无毒性。
[0266] 上述实施例仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和等同替换，这些对本发明 权利要求进行改进和等同替换后的技术方案，均落入本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种亲水性药物的磷脂化合物，其特征在于，该磷脂化合物具有亲脂性，为下列通式 (1)的化合物或所述通式（1)的化合物与抗衡离子所形成的在药学上可接受的盐：式⑴中，&、&是间隔臂，为以下任意一种：碳原子数为2~30的含有醚键的亚烷烃 基、碳原子数为2~30的含有双硫键-S-S-的亚烷烃基、碳原子数为2~80的含有肽键的 亚烷烃基、碳原子数为2~30的含有酯键的亚烷烃基、碳原子数为2~30的含有腙键的亚 烷烃基或碳原子数为2~30不含杂原子的亚烷烃基/亚烯烃基； L是2-氨基-2-羧基乙基、2-氨基乙基、2-三甲基胺基乙基阳离子、2、3_二羟基丙基、 分子量为200-4000的无靶向端基的N-聚乙二醇-氨基乙基或分子量为200-4000的端基 为靶向基团的N-聚乙二醇-氨基乙基； Υ:是通过酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、腙键或原酸酯键与Xi相连的亲水性药物，Y2是 通过酯键、酰胺键、氨基甲酸酯键、腙键或原酸酯键与X2相连的亲水性药物，Yi、Y2为以下 任意一种：吉西他滨、。酰胺基吉西他滨、氟铁龙、奈拉宾、克拉屈滨、氯法拉滨、氟达 拉滨、氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟、双呋氟尿嘧啶、去氧氟尿苷、艾西拉滨、卡培他滨、5' -脱 氧-5-氟胞苷、5' -脱氧-5-氟尿苷、2' -脱氧-5-氟尿苷、阿糖胞苷、环胞苷、曲沙他滨、 沙帕他滨、阿扎胞苷、地西他滨、阿卡地新、代号为CYC682的脱氧胞苷酸类似物、齐多夫定、 代号为MB07133的化合物、代号为BCX-1777的化合物、代号为CP-4126的化合物、代号为 SGI-11的化合物、代号为TAS-106的化合物、代号为VQD-002的化合物、代号为LY-2334737 的化合物、4' -硫代-B-D阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶、6-巯嘌呤、甲氨蝶呤、氨蝶呤、羟基脲、 肌苷二醛、腺苷二醛、胍唑、阿德福韦、替诺福韦、氨多索韦、瑞西佛、代号为SPD754的化合 物、氟胞嘧啶类似物Reverset、艾夫他滨、曼巴韦、溴呋啶、洛布卡韦、西多福韦、拉米夫定、 阿德福韦、恩替卡韦、阿糖腺苷、表柔比星、阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、柔红霉素、去甲 氧基柔红霉素、吡柔比星、洋红霉素、脱氧吡咯霉素、佐柔比星、8-氟-伊达比星、制霉菌素、 两性霉素、米托蒽醌、匹杉琼、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、顺铂、螺铂、卡铂、奥沙利铂、丝 裂霉素、白消安、美法仑、巯基嘌呤、米托坦、放线菌素D、雷帕霉素、光神霉素、氟他胺、乙酸 亮丙立德、乙酸甲地孕酮、他莫昔芬、博来霉素、秋水仙碱、全反式维甲酸、恩替诺特、西达苯 胺、苦参碱、羊毛留醇、桦木酸、维生素E琥珀酸单酯、姜黄素、他克林、普罗瑞林、他替瑞林、 酪丝亮肽、来那度胺、烟曲霉醇、甲基泼尼松龙、姜黄素、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春 地辛、足叶乙苷、三尖杉酯碱、异三尖杉酯碱、去氧三尖杉酯碱、假去氧三尖杉酯碱、高三尖 杉酯碱、大花旋覆花内酯、蓓萨罗丁、苯达莫司汀、阿曲生坦、9-顺式维甲酸、反式维甲酸、 灯盏花素、氯尼达明、曲贝替定、夫拉平度、土槿皮乙酸、大戟科植物二萜、舒林砜、化合物代 号为E7974 的抗肿瘤药物、美法仑、2,5-己酮可可碱、灵芝酸、化合物代号为TSU-68的抗 肿瘤药物、化合物代号为CPI-613的抗肿瘤药物、齐墩果酸、苦参碱、伊沙匹隆、化合物代号 为AKR501的抗肿瘤药物、乌苯美司、秋水仙碱、风车子抑素A4、埃坡霉素、高喜树碱类化合 物、氟替康、培美曲塞、赛特铂、依马替尼、吉非替尼、替匹法尼、化合物代号为SCH-66336的 抗肿瘤药物、马立马司他、化合物代号为TNP-470的抗肿瘤药物、化合物代号为SU5416的 抗肿瘤药物、化合物代号为SU6668的抗肿瘤药物、氟维司群、依西美坦、二溴卫矛醇、卡莫 司汀、尼莫司汀、羟基脲、肌苷二醛、腺苷二醛、胍唑、平阳霉素、甲羟孕酮、曲普瑞林、更昔洛 韦、泛昔洛韦、利巴韦林、美替沙腙、齐多夫定、司他夫定、拉米夫定、奈韦拉平、沙奎那韦、氮 甲、纳多洛尔、吲哚洛尔、（S)-噻吗洛尔、索他洛尔、醋丁洛尔、倍他洛尔、艾司洛尔、美托洛 尔、比索洛尔、硝苯地平、氨氯地平、尼莫地平、尼卡地平、尼索地平、地尔硫卓、维拉帕米、氟 桂利嗪、桂利嗪、利多氟嗪、卡托普利、依那普利、西拉普利、奎那普利、雷米普利、苯那普利、 培哚普利、螺普利、福辛普利、妥拉喹啉、酚妥拉明、酚苄明、哌唑嗪、坦洛新、吲哚拉明、育享 宾、去氧肾上腺素、甲氧明、间羟胺、可乐定、溴莫尼定、盐酸多巴酚丁胺、普瑞特罗、沙丁胺 醇、克伦特罗、异丙肾上腺素、肼屈嗪、米诺地尔、吡那地尔、美卡拉明、潘必定、前列地尔、米 索前列醇、地诺前列酮、卡前列素、拉坦前列素、前列环素、奎尼丁、普鲁卡因胺、丙吡胺、利 多卡因、美西律、普罗帕酮、普纳洛尔、胺碘酮、索他洛尔、维拉帕米、地尔硫卓、地高辛、洋地 黄毒苷、多巴胺、多巴酚丁胺、吡丁醇、柳丁氨醇、氨利酮、咪利酮、双香豆素、华法林、醋硝香 豆素、氯吡格雷、阿司匹林、潘生丁、西洛他唑、考来烯胺、洛伐他丁、氟伐他丁、吉非贝齐、氯 贝丁酯、甲状腺素、卡非佐米、艾沙康唑鑰硫酸盐、恩格列净、帕布昔利布、替比嘧啶、乐伐替 尼、尼达尼布、卡博替尼、三氟胸苷、色瑞替尼、瑞戈非尼、阿法替尼、吉非替尼、索拉非尼、洛 铂、沃诺拉赞、艾普拉唑钠、泊沙康唑、米卡芬净钠、奥贝胆酸、地拉罗司、苯达莫司汀、卡巴 他赛、厄洛替尼、舒尼替尼、拉帕替尼、克唑替尼、伊马替尼、范得它尼、奥拉帕尼、达拉非尼、 维罗非尼、培美曲塞、异环磷酰胺、依托泊苷、沙利度胺、氟喹诺酮、依维莫司、普拉曲沙、帕 唑帕尼、伏立诺他、艾瑞布林、阿比特龙、瓦他拉尼碱、西达本胺、阿帕替尼、硼替佐米、双氢 青蒿素、代号为Carbazitaxel的化合物、埃罗替尼、伊马替尼、氢化泼尼松、地塞米松、戈舍 瑞林、他莫昔芬、氟维司群、氟他胺、比卡鲁胺、阿那曲唑、布舍瑞林、曲普瑞林、依西美坦、来 曲唑、维甲酰酚胺、拉帕替尼、卡奈替尼、代号为BMS-275183的化合物、埃博霉素B、安沙霉 素、苔藓抑素、替西罗莫司、依维莫司、替匹法尼、洛那法尼、代号为SU14813的化合物、代号 为CP-868-596的化合物、伐他拉尼、西地尼布、凡德他尼、代号为ABT869的化合物、阿西替 尼，莫替沙尼、帕唑帕尼、考布他汀、代号为LY317615的化合物、代号为BMS-275291的化合 物、西仑吉肽、代号为MK0429的化合物、代号为ATN-224的化合物、代号为ABT-510的化合 物、代号为Aplidine的化合物、代号为C0L-3的化合物、普马司他、代号为CGS27023A的化 合物、代号为IDN-6556的化合物、西他列汀、利拉利汀、阿格列汀、安瑞那韦、替拉那韦、茚 地那韦、利托那韦、洛匹那韦、阿扎那韦、奈非那韦、阿加曲班、达比加群、巴马司他、代号为 R0 32-3555的化合物、代号为NPI-0052的化合物、代号为BAY12-9566的化合物、槲皮素、黄 酮类药物、青蒿琥酯、多肽药物、拟肽药物、克里唑替尼、瑞格非尼。2. 根据权利要求1所述的亲水性药物的磷脂化合物，其特征在于，所述靶向基团是叶 酸、半乳糖、多肽、抗体、抗体片段、透明质酸、无唾液酸糖蛋白、多糖、核酸或拟肽。3. 根据权利要求1或2所述的亲水性药物的磷脂化合物，其特征在于，所述结构式（1) 中L是不带电荷的基团时，所述抗衡离子是氢离子、钠离子、钾离子、钙离子、铁离子、镁离 子、铵尚子、锌尚子的任一种；结构式（1)中L是带正电荷的基团时，所述抗衡尚子是一种阳 离子和一种阴离子的组合，所述阳离子为氢离子、钠离子、钾离子、钙离子、铁离子、镁离子、 铵离子、锌离子中的任一种，所述阴离子为氯离子、硫酸根离子、硫酸根离子、硝酸根离子、 羧酸根离子、碳酸根离子、溴离子、磷酸根离子、甲酸根、乙酸根、柠檬酸根、乳酸根、富马酸 根、酒石酸根、葡萄糖酸根离子中的任一种。4. 根据权利要求1或2所述的亲水性药物的磷脂化合物，其特征在于，所述Yl、Y2 采用的多肽药物是以下任一种：格拉替雷、帕斯瑞肽、芦西纳坦、奥曲肽、兰瑞肽、伐普肽、 司格列肽、替度鲁肽、卡非佐米、利那洛肽、西那普肽、帕瑞肽、替度鲁肽、替莫瑞林、利拉鲁 肽、艾替班特、地加瑞克、齐考诺肽、恩夫韦肽、阿巴瑞克、索马杜林、诺雷德、促胰液素、亮 丙瑞林、雨蛙素、比伐卢定、加压素、伐普肽、普兰林肽、促肾上腺皮质激素、杆菌肽、特立帕 肽、戈舍瑞林、艾塞那肽、安替安吉肽、西他列汀、利拉鲁肽、特立帕肽、艾塞那肽、米伐木肽、 罗米地辛、酪丝缴肽、西夫韦肽、艾博卫泰、酪丝亮肽、名称为Afamelanotide的化合物、名 称为Telavancin的化合物、名称为Ecallantide的化合物、名称为Mifamurtide的化合 物、名称为Romidepsin的化合物、名称为Liraglutide的化合物、名称为Cerebroprotein hydrolysate的化合物、名称为Tesamorelin的化合物、名称为Boceprevir的化合物、名称 为Telaprevir的化合物、名称为Icatibant的化合物、名称为Exenatide德尔化合物、名称 为Lucinactant的化合物、名称为Peginesatide的化合物、名称为Linaclotide的化合物、 名称为Pasireotide的化合物、名称为Teduglutide的化合物、名称为Teduglutide的化合 物、名称为Carfilzomib的化合物、名称为Lixisenatide的化合物、去氨加压素、后叶催产 素、血管加压素、环孢菌素、那法瑞林、布舍瑞林、组氨瑞林、戈那瑞林、色氨瑞林、生长抑素、 降（血）钙素、升血糖激素、分泌素、胰岛素。5. 根据权利要求1或2所述的亲水性药物的磷脂化合物，其特征在于，所述Yl、Y2采 用的拟肽药物是以下任一种：维格列汀、沙格列汀、西鲁瑞韦、特拉匹伟、博赛泼维、抑肽素。6. -种药物组合物，其特征在于，该组合物包括权利要求1、2、3、4或5所述的亲水性药 物的磷脂化合物，或者包括所述的亲水性药物的磷脂化合物与药效学上可接受的载体。7. 根据权利要求6的药物组合物，其特征在于，该组合物是液体制剂、固体制剂、半固 体制剂、胶囊剂、颗粒剂、凝胶剂、注射剂、缓释制剂或控释制剂。8. 根据权利要求6的药物组合物，其特征在于，该组合物为粒径10-1000纳米的脂质体 纳米颗粒，该药物组合物中还包括助剂。9. 根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的助剂是磷脂或胆固醇。
【专利摘要】本发明公开了一种亲水性药物的磷脂化合物、其药物组合物及应用。药物组合物为亲水性药物的磷脂化合物或亲水性药物的磷脂化合物和药效学上可接受的载体的组合药物组合物，是液体制剂、固体制剂、半固体制剂、胶囊剂、颗粒剂、凝胶剂、注射剂。该药物组合物是亲水性药物的磷脂化合物或亲水性药物的磷脂化合物和助剂制成的脂质体纳米颗粒，粒径10-1000纳米。该亲水性药物的磷脂化合物及其脂质体纳米颗粒可用作液体制剂、固体制剂、半固体制剂、灭菌制剂和无菌制剂，毒性低，可用于各种肿瘤等的高效治疗。
【IPC分类】A61K47/48, A61K9/127, A61P35/00, A61K9/14
【公开号】CN105288648
【申请号】CN201510661316
【发明人】李新松, 徐晨, 杜亚伟, 凌龙兵, 侯永鹏
【申请人】东南大学
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年10月14日