. 5g的凝胶装入Franz扩散 池的供体室，并以Parafllm?覆盖池以防止乙醇从凝胶中蒸发。在30,60,120,240和360分 钟时间点取样。Franz池的受体室中使用的介质为5mM磷酸氢二钾缓冲液：乙醇（70:30)。 水浴温度保持在32. 5°C。对每种膜，每种凝胶制剂进行两个平行测定。
[0182] 表5.膜渗透研究和相关HPLC分析的实验参数
[0183]
[0184] 结果：表6显示了膜渗透程度，而图1显示了凝胶制剂中伊马替尼甲磺酸盐的渗透 时间曲线。凝胶制剂中伊马替尼甲磺酸盐的释放对两种膜有很大的区别。
[0185] 表6.膜渗透数据（制品：2%伊马替尼凝胶，批次NB1318-36)
[0186]
[0187] 结论：来自制剂前、原型制剂和体外表现研究的结果表明，所选凝胶制剂适于局部 递送伊马替尼甲磺酸盐。
[0188] 实施例2-动物研究
[0189]C57BL/6 小鼠从JacksonLaboratory(BarHarbor，ME)获得。设计用来递送 1μL/ h的渗透栗（Alzet，型号2001)装填了在添加0.lmg/mL牛血清白蛋白（BSA)的磷酸盐缓 冲液（PBS)中的TGF-i3(1.25yg)。将栗皮下植入8周龄小鼠，其随后以伊马替尼或安慰 剂乳膏治疗。7日后，处死小鼠，在TRIzoUlnvitrogen)中将栗出口周围的皮肤（~lcm2) 勾质化以制备RNA，或在福尔马林中固定。使用nanostring技术分析来自以PBS和TGF-β 治疗的小鼠的皮肤。分析了包括炎症基因、巨噬细胞标志物、TGF-β调苄基因等在内的50 个基因的组。使用每份样品l〇〇ngRNA，并将基因表达对8个持家基因的表达标准化。
[0190]参见例如Christmann,R.B.等人，ArthritisRheum. 2013May;65 (5) : 1335-46 (教 导胸腺基质淋巴生成素在系统性硬化症患者皮肤中上调，并诱导促纤维化基因以及细胞内 信号转导，其与白介素13和转化生长因子β诱导的那些重叠）。
[0191]小鼠：
[0192]C57Bl/6j20g
[0193] 4组：
[0194]η = 1 PBS 栗
[0195]η = 1 TGFβ 栗
[0196]η = 2 PBS 栗+伊马替尼乳膏
[0197]η = 2 TGFP栗+伊马替尼乳膏
[0198]剂量：
[0199] 7 日Alzet栗中 2. 5yg/mLTGF0
[0200] 伊马替尼乳膏局部施用7日（每日两次）
[0201] 处死并收集组织（见图2):
[0202] (1)LS=局部皮肤
[0203] (2)+DS=邻近局部皮肤
[0204] (3)_DS=远离局部皮肤
[0205] * -半皮肤样品用于RNA研究
[0206] * 一半皮肤样品用于组织学研究
[0207] 表7 :硬皮病相关生物标志物
[0267] 表8:小鼠研究结果
[0268]
[0269]
[0270] 体内实验总结
[0271] TGFi3治疗起作用而效果被局部皮肤⑴和DS+皮肤㈠的伊马替尼阻断。
[0272] TGF0激活的基因被上调，而伊马替尼抑制这些基因的激活。
[0273] 以引用的方式纳入
[0274] 本文中引用的所有美国专利和美国公布专利申请以引用的方式纳入本文。
[0275] 等同形式
[0276] 仅仅使用常规实验，本领域技术人员就会认识到或者能确定本文所述发明的具体 实施方案的许多等同形式。这样的等同形式应包含在下列权利要求中。
【主权项】
1. 治疗硬皮病的方法，其包括向有此需要的个体的皮肤患病区域局部施用组合物或制 剂的步骤，所述组合物或制剂包含治疗有效量的酪氨酸激酶抑制剂，以及皮肤可接受的载 体或赋形剂。2. 权利要求1的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂有效抗BCR-ABL酪氨酸激酶，c-Abl 酪氨酸激酶，a-PDGFR，β-PDGFR或KIT受体激酶，或者抑制TGF-β。3. 权利要求1的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为伊马替尼或尼洛替尼。4. 权利要求1的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为伊马替尼。5. 权利要求1的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为AG18，DMPQ，H) 166285，ΡΡΥΑ， SU16f，SU5416,SU6668,或舒尼替尼。6. 权利要求1-5中任一项的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制剂溶于所述载体或赋形剂 中。7. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述组合物或制剂为乳膏，洗剂，溶液，凝胶或 软膏。8. 权利要求1-7中任一项的方法，其中所述载体或赋形剂为凝胶。9. 权利要求8的方法，其中所述载体或赋形剂为无水凝胶。10. 权利要求1-6中任一项的方法，其中所述组合物或制剂为喷雾剂。11. 权利要求1-10中任一项的方法，其中所述组合物或制剂为非刺激性的。12. 权利要求1-11中任一项的方法，其中所述组合物或制剂为耐受良好的。13. 权利要求1-12中任一项的方法，其中所述组合物或制剂减轻炎症。14. 权利要求1-13中任一项的方法，其中所述组合物或制剂为非细胞毒性的。15. 权利要求1-14中任一项的方法，其中所述组合物或制剂不产生水肿或红斑。16. 权利要求1-15中任一项的方法，其中所述个体为人。17. 权利要求1-16中任一项的方法，其中所述组合物或制剂每日施用一次。18. 权利要求1-16中任一项的方法，其中所述组合物或制剂每日施用二次。19. 权利要求1-16中任一项的方法，其中所述组合物或制剂每日施用三次。20. 权利要求1-19中任一项的方法，其中所述硬皮病为局限性的。21. 权利要求1-20中任一项的方法，其中所述硬皮病与炎症或硬化相关。22. 权利要求1-21中任一项的方法，其中所述硬皮病与萎缩相关。23. 权利要求1-22中任一项的方法，其中所述硬皮病为进展性的。24. 权利要求1-22中任一项的方法，其中所述硬皮病在缓解中。25. 权利要求1-24中任一项的方法，其中所述组合物或制剂降低选自下列的生物标志 物的表达：AXIN2,Acta2,Adaml2,Angpt2,Argl，CCL2,CCL4,CCL5,CD14,CD163,CXCL10， CXCL2,CXCL5,CXCL9,Chi311，Chi313,Collal，Cspg4,Ednl，Fmod，GREM2,ILlb，IL33,IL6， IRF5,IRF7,Icaml，I113ral，Itgam，LOX，MX2,Mcam，Mfge8,Mmpl2,Mmpl3,Ngfr，Nos2, 0AS1， Retnla，Rgs5,SPP1，Serpinel，Sfrp2,TNF，Thbsl，Timpl，Vwf，WISP1，Actb，Api5,Eeflal， Ndufc2,Rnf44,Rpl36al，Rpl9,Rps7,Rwddl，Sf3b2,Tubalb。26. 权利要求1-24中任一项的方法，其中所述组合物或制剂降低选自下列的生物标 志物的表达：Acta2,Adaml2,Angpt2,Collal，Fmod，LOX，SPP1，Serpinel，Sfrp2,Thbsl和 WISPl〇27. 权利要求25或26的方法，其中第一皮肤样本中所述生物标志物的表达降低，其中 所述组合物或制剂施用到所述第一皮肤样本。28. 权利要求25-27中任一项的方法，其中第二皮肤样本中所述生物标志物的表达降 低，其中所述组合物或制剂没有施用到所述第二皮肤样本。29. 权利要求25-28中任一项的方法，其中所述生物标志物的表达相比未治疗皮肤细 胞中所述生物标志物的表达降低。30. 组合物或制剂，其包含治疗有效量的酪氨酸激酶抑制剂，以及皮肤可接受的载体或 赋形剂。31. 权利要求30的组合物或制剂，其中所述酪氨酸激酶抑制剂有效抗BCR-ABL酪氨酸 激酶，c-Abl酪氨酸激酶，a-PDGFR，β-PDGFR或KIT受体激酶，或者抑制TGF-β。32. 权利要求30的组合物或制剂，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为伊马替尼或尼洛替 尼。33. 权利要求30的组合物或制剂，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为伊马替尼。34. 权利要求30的组合物或制剂，其中所述酪氨酸激酶抑制剂为AG18,DMPQ，Η) 166285,PPYA，SU16f，SU5416,SU6668 或舒尼替尼。35. 权利要求30-34中任一项的组合物或制剂，其中所述酪氨酸激酶抑制剂溶于所述 载体中。36. 权利要求30-35中任一项的组合物或制剂，其中所述组合物或制剂为乳膏，洗剂， 溶液，凝胶或软膏。37. 权利要求30-36中任一项的组合物或制剂，其中所述载体或赋形剂为凝胶。38. 权利要求37的组合物或制剂，其中所述载体或赋形剂为无水凝胶。39. 权利要求30-35中任一项的组合物或制剂，其中所述组合物或制剂为喷雾剂。40. 权利要求30-38中任一项的组合物或制剂，其中当从气溶胶容器中喷出时，所述组 合物或制剂形成泡沫。41. 权利要求30-40中任一项的组合物或制剂，其中储存所述组合物或制剂约二周后， 所述组合物或制剂中酪氨酸激酶抑制剂量的测定显示大于约70%的酪氨酸激酶抑制剂初 始量。
【专利摘要】公开了包含酪氨酸激酶抑制剂，如伊马替尼或尼洛替尼的用于局部施用的组合物和制剂。所述局部组合物或制剂可用于治疗硬皮病。
【IPC分类】A61K31/505, A61P17/00, A61K31/506
【公开号】CN105377262
【申请号】CN201480039505
【发明人】M·W·特朗博, M·P·雷德蒙, R·A·拉夫亚迪斯, P·R·马吉
【申请人】普雷西恩护肤公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2014年5月30日
【公告号】EP3019170A1, US20160120865, WO2015005985A1