一种小分子抑制剂在抗生育中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物医学领域，更具体地，本发明设及一种小分子抑制剂在抗生育中 的用途。
【背景技术】
[0002] 应用避孕药物是降低非意愿妊娠的重要措施之一。目前临床应用避孕药几乎全部 是女性口服避孕药，它们大多是由孕激素和雌激素配伍而成，能影响生殖过程中的不同环 节，从而达到抗生育的目的。女性口服避孕药虽然避孕成功率很高，但是服用之后会产生很 多副作用包括体重增加、月经量的变化、恶屯、等类早孕反应、点滴出血等；影响女性的生活 质量。另一方面，男性生育调节始终是人口控制的薄弱环节，有效节育方法仅有体外排精、 避孕套和输精管绝育术。目前临床没有安全可用的男性抗生育药物。
[0003] 男性抗生育药物的研究已经有十几年的历史，已经有一些激素类（雄激素灯)、τ+ 孕激素（Ρ)、Τ+抗雄激素（CPA)、Τ+雌激素W及GnRH类似物+Τ)和非激素类（棉酪、雷公 藤、昆明山海棠等）抗生育药物被发现。运类药物一般是通过抑制精子的生成，降低精子 的数量，阻断精子游动达到避孕的目的。但目前除了进入临床研究的药物一睾酬类似物和 gamendazol之外尚无一种可W应用于临床的口服抗生育药物。
[0004] 研究发现，BRDT参与了睾丸中精子生成的染色质重组过程，在粗线期精母细胞、双 线期精母细胞和精子细胞中表达，在减数分裂之后，BRDT通过成对的乙酷基-赖氨酸识别 模块或漠结构域使高度乙酷化的组蛋白重组。BRDT在精子形成过程中发挥作用是通过第一 漠结构域调节的。B畑T1W中等效价（20μπι)与组蛋白H4-4乙酷化氨基酸末端（H4Kac4) 连接。通过对鼠科动物的BRDT蛋白结构研究发现BRDT1通过保守的天冬氨酸残基与二乙酷 基化的组蛋白4肤段（H4K5ac8ac)结合，将BRDT1编码区域选择性删除，足W使亚等位基 因纯合子雄性小鼠不孕。对不孕不育的男性全基因组分析表明BRDT的单核巧酸多态性与 欧洲男子的少精子症和精子缺乏症有很明显的联系。此外，Jones等人通过mRNA检测发现 B畑T的表达只限于正常睾丸组织，并且在10例未经组织学定义的肺癌和8种不同器官的癌 细胞系中也没有检测到BRDT，表明BRDT的表达具有非常严格的组织特异性，WBRDT作为男 性抗生育药物的祀标具有很大的潜在价值，但是国内目前尚无关于BRDT抑制剂的研究。
【发明内容】
阳0化]为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种祀向于BRDT蛋白的小分 子抑制剂在男性抗生育中的应用，为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 本发明提供了一种BRDT蛋白抑制剂在制备抗生育药物组合物中的用途。 阳007] 进一步，所述蛋白抑制剂与BRDT的漠结构域相结合，使得BRDT不能结合染色质组 蛋白册/H4特定的乙酷化赖氨酸，影响染色质的重组。
[0008] 所述蛋白抑制剂为小分子抑制剂。
[0009] 进一步，所述小分子抑制剂为T480。
[0010] 进一步，所述T480四挫环上的两个氮原子和BRDT活性位点的保守氨基酸残基 ASN109酷胺上的氨基形成两个氨键作用；苯基同B畑T活性位点的化e52、Pro51、化p50和 Asp114形成疏水作用键。
[0011] 本发明公开了一种抗生育药物组合物，所述药物组合物包括上述抑制剂。
[0012] 进一步，所述药物组合物包括抑制剂在药学上可接受的盐、其异构体或者其水合 物或溶剂化物。所述药学上可接受的盐包括碱金属盐或碱±金属盐如钢盐、钟盐和巧盐；氨 面酸盐如氨氣酸盐、盐酸盐、氨漠酸盐和氨舰酸盐；无机酸盐如硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐和 憐酸盐；有机酸盐如甲横酸盐、富马酸盐、班巧酸盐、巧樣酸盐、酒石酸盐、草酸盐和马来酸 盐；氨基酸盐如谷氨酸盐和天冬氨酸盐。
[0013] 进一步，所述抗生育药物组合物还包括药学上可接受的载体。所述载体包括（但 并不限于）：稀释剂、赋形剂如乳糖、氯化钢、葡萄糖、尿素、淀粉、水等、填充剂如淀粉、薦糖 等；粘合剂如单糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙締化咯烧 酬；湿润剂如甘油；崩解剂如干淀粉、海藻酸钢、海带多糖粉末、琼脂粉末、碳酸巧和碳酸氨 钢；吸收促进剂季锭化合物、十二烷基硫酸钢等；表面活性剂如聚氧化乙締山梨聚糖脂肪 酸醋、十二烷基硫酸钢、硬脂酸单甘油醋、十六烧醇等；致湿剂如甘油、淀粉等；吸附载体如 淀粉、乳糖、斑脱上、硅胶、高岭±和皂粘±等；润滑剂如滑石粉、硬脂酸巧和儀、聚乙二醇、 棚酸粉末等。
[0014] 所述抗生育药物组合物可W使用不同的添加剂进行制备，例如稳定剂、杀菌剂、缓 冲剂、等渗剂、馨合剂、抑控制剂及表面活性剂。
[0015] 稳定剂包括人类血清蛋白、k氨基酸、糖及纤维素衍生物。k氨基酸还可W包括 甘氨酸、半脫氨酸及谷氨酸中的任意一个。糖类包括单糖，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果 糖等；糖醇，例如甘露醇、纤维醇、木糖醇等；二糖，例如薦糖、麦芽糖、乳糖等；多聚糖，例如 葡聚糖、径丙基淀粉、硫化软骨素、透明质酸等及它们的衍生物。纤维素衍生物包括甲基纤 维素、乙基纤维素、径乙基纤维素、径丙基纤维素、径丙甲基纤维素及径甲基纤维素钢。
[0016] 表面活性剂包括离子或非离子表面活性剂，例如聚氧化乙締烷基醋、山梨聚糖单 酷基醋、脂肪酸甘油醋。
[0017] 添加剂缓冲剂可W包括棚酸、憐酸、乙酸、巧樣酸、谷氨酸及相应的盐（它们的碱 金属或碱性稀±金属盐，例如钢盐、钟盐、巧盐及儀盐）。等渗剂包括氯化钟、氯化钢、糖及甘 油。馨合剂包括乙二胺四乙酸钢及巧樣酸。
[0018] 进一步，所述抗生育药物组合物的接受体为男性。
[0019] 所述抗生育药物组合物可W通过任何途径给予受体，所述途径包括（但不限于） 口腔的、经皮的、粘膜的（例如阴道、直肠、口腔或鼻粘膜），通过注射（例如皮下的、静脉内、 肠胃外的、腹膜内的、銷内的），或通过吸入（例如口腔的或鼻的）。
[0020] 优选的，所述抗生育药物组合物的给药方式为口服。
[0021] 本发明抗生育药物组合物的单位剂型可W使用多种形式，代表性的剂型包括固体 剂型如片剂、丸剂、粉剂、干粉剂、颗粒、胶囊等；液态剂型如溶液、悬浮液、乳状液、糖浆、馳 剂等。
[0022] 本发明提供了一种筛选上述抓RT蛋白抑制剂的方法，其特征在于，筛选步骤如 下：
[0023] (1)构建人B畑Τ小分子抑制剂药效团模型
[0024] 从PDB数据库下载人Β畑Τ与JQ1共结晶活性构象的Ξ维立体结构文件，输入到 Discovery Sl:udio 3. 0的药效团构建模块，利用Discovery Sl:udio 3. 0对Β畑Τ活性构象 立体结构进行加氨和加水分子的处理，设置各参数，去除那些离PTP-loop及特异性深穴较 远的作用位点，仅保留和关键性氨基酸残基相互作用的作用位点，然后依据和受体的相互 作用模式对所有的作用位点进行聚类，得到可用于虚拟筛选的药效团模型；
[00巧](2)基于药效团模型对化合物进行虚拟筛选
[00%] 将构建好的药效团模型作为3D定位输入对大型化合物数据库进行高通量虚拟筛 选，W期得到祀向BRDT活性位点的小分子抑制剂；保留匹配一半W上药效特征元素的化合 物，然后再次通过利平斯基五规则进行过滤；
[0027] (3)基于分子对接对化合物进行虚拟筛选
[00測利用Libdock进行对接，在对接研究中，采用相同的BRDT的活性构象的立维结构 和化armm力场，对接位点定义为一个W活性位点为中屯、的直径9A的球开多，运个球形足W 覆盖BRDT与JQ1结合位点的关键氨基酸残基，将JQ1对接到BRDT活性位点，W对接构象是 否满足催化机制为依据进行打分函数的选择和参数优化。
[0029] (4)体外蛋白水平的筛选
[0030] 使用抓DTBromodomainTR-FRETAssay试剂盒进行化合物的体外检测；
[0031] (5)阳性化合物的性质研究
[0032] 进一步，步骤（1)所述的参数设置为：最小结构特征的参数设置为4,最大参数特 征设置为6 ;亲脂性位点密度参数设为15,极性位点参数设置为20。
[0033] 进一步，步骤（5)所述的阳性化合物的性质研究包括化合物与BRDT的量效关系研 究、阳性化合物的分子对接和药效团匹配检测W及阳性化合物的ADMET性质预测。
[0034] 本发明的优点和有益效果：
[0035] 本发明首次建立了一种W人BRDT为祀点的男性抗生育药物筛选平台，将祀向药 物筛选、计算机辅助虚拟筛选等现代技术综合运用于抗生育药物研究领域，克服了物力、人 力耗费大，实验周期长的缺点。
[0036] 本发明首次发现了针对于BRDT的一种小分子抑制剂，所述小分子抑制剂能特异 的结合BRDT的漠结构域，安全、有效、可逆的实现男性抗生育的目的。
[0037] 本发明为男性抗生育药物的研究提供了一种先导化合物，有助于开发结构新颖、 活性好、毒副作用低的新型男性抗生育药物。
【附图说明】
[003引图1显示了BRDT抑制剂的最终药效团模型，其中，图A显示了实验计算得到的最 佳药效团模型；图B显示了药效团模型的3D空间关系和几何参数。
[0039]图2显示了药效团模型的结构特征，其中，图A显示了药效团模型和起作用的氨基 酸残基，图B显示了药效团模型与JQ1的匹配结果；图C显示了药效团模型同BRDT-JQ1晶 体复合物的匹配结果。 W40] 图3显示了B畑T的活性位点，其中条带代表B畑T蛋白链。
[0041] 图4显示了JQ1和BRDT的对接图，其中条带代表BRDT蛋白链，棒状结构代表JQ1。
[0042] 图5显示了JQl与B畑Τ蛋白的量效关系。
[0043] 图