[0117] 在视图窗口中，受体原子与配体对接状态间的氨键通过绿线显示出来；
[0118] 在表格浏览器中，继续点击剩下的配体对接姿态，运样对接姿态将被添加到系统 视图中并逐一在图形视图中显示出来；
[0119] 4FLP_resl参数识别出的氨基酸残基侧链构象将随着配体姿态的变化而变化。
[0120] 5、分析配体对接结果 阳121] 在窗口中打开4FLP配体的晶体构象，按CT化+1使DiscoveryStudio浏览器恢复 通常状态。在档浏览器中找到A链的Site1，右键点击，选择化enWithI3DWindow, 4FLP 配体的晶体构象将在一个新的Ξ维窗口中打开。
[0122] 在DSS维窗口中打开所有对接产生的对接构象，在档浏览器中，打开对接作业 输出文件夹。将晶体构象定义为结构比较的参考构象，在系统视图中，点击第一个配体构 象（4FLP配体）选择它，运个构象即对应晶体构象。从菜单中选择Structure|RMSD|Set Reference,将4FLP晶体构象设置为RMSD计算的参考构象。
[0123] 在菜单中选择StructureIRMSDIHeavyAtoms,逐个排查和计算对接产生的姿态与 晶体姿态的差异。 阳124] 6、结果 阳125] B畑T蛋白的活性位点如图3所示，JQ1与B畑T的活性口袋按照libdock模块进行 对接如图4所示，得分值为118. 924,W此分值作为确定阳性化合物的标准。将初筛得到的 270个化合物与BRDT的活性口袋按照libdock对接方式进行虚拟对接，筛选出打分值高于 阳性对照的化合物为125个。
[0126] 实施例5JQ1与抓DT的量效关系
[0127] 1、将JQ1化合物进行3倍倍比的稀释； 阳12引 2、将5μ1样品与10μ1B畑T漠结构域館馨合物混合，室溫下解育15min进行预 平衡；
[0129] 3、加入5μ1的B畑T漠结构域配体/APC受体混合物引发反应；
[0130] 4、将板子用侣锥密封在室溫解育比，检测620nm和670nm发射光的数值。 阳131] 5、结果
[0132] 实验结果如图5所示，随着JQ1浓度的增大，JQ1对人BRDT蛋白结合的抑制作用 增加，其ICs。为133nM。
[0133] 实施例6化合物蛋白水平筛选
[0134] 1、待测样品预处理 阳135] (1)取5mg纯品化合物溶到500μ1DMS0中；
[0136] (2)筛选的化合物样品用1XTR-FRETAssayBuffer稀释10倍。
[0137] (3)将初始浓度为40μM阳性化合物JQl用lXTR-FRETAssayBuffer稀释四倍。 阳13引 2、化合物的检测
[0139] (1)将5μ1样品与10μ1B畑T漠结构域館馨合物混合，室溫下解育15min进行预 平衡；
[0140] 似加入5μ1的抓DT漠结构域配体/APC受体混合物引发反应，反应体系如下面 表1所不； 阳141] 表1筛选模型检测体系阳142]
[0143] (3)将板子用侣锥密封在室溫解育比，检测620nm和670nm发射光的数值。
[0144] 3、数据分析
[0145] WTR-FRET比值化70皿发射光/620皿发射光）计算样品与抓DT蛋白的亲和力， TR-FRET比值越低，样品与BRDT蛋白的亲和力越强。 阳146] 4、结果 阳147] 化合物浓度为100μΜ时抑制率大于30%的定为阳性样品，经过筛选，得到一抑制 率为65. 53%的化合物Τ480,结构式如图6所示。
[0148] 实施例7Τ480与Β畑Τ蛋白的量效关系
[0149] 实验方法如实施例5,Τ480进行2倍倍比稀释。 阳150] 实验结果如图7所示，随着Τ480浓度的增大，Τ480对人BRDT蛋白结合的抑制作 用增加，其ICs。为 9. 02 + 0. 45μΜ。 阳151] 实施例8Τ480与BRDT活性位点的分子对接和药效团匹配 阳152] 按照实施例3和4所述的方法，进行T480与BRDT蛋白活性位点的分子对接与药 效团匹配。 阳153] 实验结果如图8所示，图A显示了T480四挫环上的两个氮原子和BRDT活性位点 的保守氨基酸残基ASN109酷胺上的氨基形成两个氨键作用；T480的苯基同BRDT活性位点 的化e52，Pro51，T巧50andAspll4形成疏水作用键，虚拟对接分数为109. 518。图B显示了 T480的四挫环和两个苯基分别同药效团模型的氨键受体特征和两个疏水作用特征匹配，另 夕F，甲氨基上的氮原子和活性中屯、的化e52、化p50形成cation-π键相互作用。
[0154] 实施例9Τ480的ADMET性质预测 阳1巧]1、导入Τ480化合物文件 阳156] 在文件菜单中新建m?DT_inhibitors.sd文件，使用DS3. 0的"构建与编辑"模块 构画2个已知结构的B畑T抑制齐U，构画完成后显不在roDT_inhibitorsMoleculeWindow中。
[0157] 2、选择计算性质，运行计算流程
[0158] 在protocolS浏览器中，打开ADMET文件夹，双击ADMETDescriptors,打开参数浏 览器。在"I吨utLigands"右边的栅格中，选择"BWT_inhibitors"，选择T480化合物。在 "ADMETDescriptors"右边栅格中勾选所有性质，此操作将计算T480化合物的所有ADMET 性质。 阳159] 3、运行预测 阳160]点击Protocolstoo化ar中的运行按钮开始预测，等待运行完成后，双击任务浏览 器中刚完成的作业，打开Repcxrt.htm，点击该档中Ou化ut部分的ViewResults连结，打开 计算的结果。 阳161] 4、分析预测结果 阳162] 结果档中包含了预测的6种ADMET性质（25°C下水溶解度、血脑屏障通透性、细胞 色素P4502D6抑制性、肝毒性、人类肠道吸收性和血浆蛋白结合率）的数值和该数值所对应 的级别。 阳16引 5、结果
[0164]实验结果如图9所示，化合物T480血脑屏障通透性度BB)相对较差，人类肠道吸 收性化IA)较好，在25°C水溶解度（SOL)适中，无细胞色素P4502D6抑制性。
[01化]上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核屯、思想。应当指出，对于本 领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可W对本发明进行若干改进 和修饰，运些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
【主权项】
1. 一种BRDT蛋白抑制剂在制备抗生育药物组合物中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述蛋白抑制剂与BRDT的溴结构域相结 合。3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述BRDT蛋白抑制剂为小分子抑制 剂。4. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述小分子抑制剂为T480。5. -种抗生育药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1-4任一项所 述的抑制剂。6. 根据权利要求5所述的药物组合物，药物组合物包括抑制剂在药学上可接受的盐、 其异构体或者其水合物或溶剂化物。7. 根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可 接受的载体。8. 根据权利要求5-7任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的受体 是男性。9. 一种筛选权利要求1-4任一项所述BDRT蛋白抑制剂的方法，其特征在于，筛选步骤 如下： (1) 构建人BRDT小分子抑制剂药效团模型 从PDB数据库下载人BRDT与JQ1共结晶活性构象的三维立体结构文件，输入到 Discovery Studio 3. O的药效团构建模块，利用Discovery Studio 3. O对BRDT活性构象 立体结构进行加氢和加水分子的处理，设置各参数，去除那些离PTP-loop及特异性深穴较 远的作用位点，仅保留和关键性氨基酸残基相互作用的作用位点，然后依据和受体的相互 作用模式对所有的作用位点进行聚类，得到可用于虚拟筛选的药效团模型； (2) 基于药效团模型对化合物进行虚拟筛选 将构建好的药效团模型作为3D定位输入对大型化合物数据库进行高通量虚拟筛选， 以期得到靶向BRDT活性位点的小分子抑制剂；保留匹配一半以上药效特征元素的化合 物，然后再次通过利平斯基五规则进行过滤； (3) 基于分子对接对化合物进行虚拟筛选 利用Libdock进行对接，在对接研究中，采用相同的BRDT的活性构象的三维结构和 Charmm力场，对接位点定义为一个以活性位点为中心的直径9A的球形，这个球形足以覆盖 BRDT与JQl结合位点的关键氨基酸残基，将JQl对接到BRDT活性位点，以对接构象是否满 足催化机制为依据进行打分函数的选择和参数优化。 (4) 体外蛋白水平的筛选 使用BRDT Bromodomain TR-FRET Assay试剂盒进行化合物的体外检测； (5) 阳性化合物的性质研究。10. 根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤（1)中的参数设置为：最小结构特 征的参数设置为4,最大参数特征设置为6 ;亲脂性位点密度参数设为15,极性位点参数设 置为20。
【专利摘要】本发明公开了一种小分子抑制剂在抗生育中的用途，该小分子抑制剂为T480，靶向于BRDT蛋白，同时本发明提供了一种用于理性化筛选男性抗生育药物的平台。
【IPC分类】A61P15/16, G06F19/00, A61K45/00, A61K31/4985
【公开号】CN105412931
【申请号】CN201610009987
【发明人】王慧萍
【申请人】国家卫生计生委科学技术研究所
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2016年1月7日