]三七干浸膏用70%乙醇溶解，浓缩液用石油醚萃取4次脱脂，所得溶液上大孔吸附 树脂，用4倍柱体积60%乙醇洗脱，洗脱液经氧化铝、活性炭吸附脱色后浓缩、干燥，得三七 提取物。以人参皂苷Re作对照品，测得人参皂苷Re的含量为42.71 %。
[0048] 药效学试验：
[0049] 1实验材料 [0050] 1.1实验动物
[00511 SPF级MR/Lpr自发狼疮小鼠20只，雌雄各半，体重18-22g，由上海斯莱克动物有限 公司提供，并饲养于SPF级动物房。
[0052] 1.2受试样品与试剂
[0053]实施例1、实施例4、通脉口服液；
[0054]尿蛋白试剂盒(南京建成）；
[0055] IgG型抗dsDNA抗体试剂盒(南京建成）；
[0056]抗核抗体(ANA)试剂盒(南京建成）；
[0057] 1.3实验仪器
[0058]酶标仪(美国伯腾仪器有限公司）。
[0059] 2实验方法
[0060] 2.1实验分组与给药
[0061]实施例组:实施例1、实施例2药物
[0062] 对比例组:通脉口服液
[0063]每周取尾静脉血检测血清IgG型抗dsDNA抗体、抗核抗体(ANA)水平，提尾反射法收 集尿液检测尿蛋白含量。血清IgG型抗dsDNA抗体、ANA阳性并且尿蛋白2 100mg/dl时提示发 病，开始给予药物治疗。按数字表分组法将动物随机分为模型组和实施例组、对比例组，每 组10只，分别以20ml/kg灌胃给予生理盐水、实施例药物以及对比药物(通脉口服液），每天1 次，连续30d。
[0064] 2.2标本采集与检测
[0065]用药前、用药后15、30d早晨固定时间采用提尾反射法留取尿液，置于-80°C冰箱中 保存，考马斯亮蓝法监测尿蛋白含量，具体步骤按照试剂盒说明操作。
[0066]用药前、用药后15d早晨固定时间尾静脉采血，用药后30d摘眼球取血，离心取血 清，置于-80 °C冰箱中保存，ELISA检测血清IgG型抗dsDNA抗体、ANA水平，具体步骤按照试剂 盒说明操作。
[0067] 3统计学处理
[0068]实验数据采用SPSS进行统计学处理，计量数据以表示，组间比较采用两样本 均数的t检验，多组间样本均数比较采用方差分析;以P<0.05认为有显著性差异。
[0069] 4实验结果
[0070] 4.1尿蛋白含量的检测结果
[0071]结果如表1所示，与模型组比较，实施例组的尿蛋白浓度在给药后15天明显下降(P <0.05)，给药后30天后显著下降(P<0.01)。与实施例组给药前比较，给药15天后实施例组 的尿蛋白浓度出现明显的下降(P<〇.05)，给药30天后显著下降（P<0.01);与对比例组比 较，给药15天后，实施例组的尿蛋白浓度明显低于对比例组(P<0.05)，给药30天后，实施例 组的尿蛋白浓度极显著低于对比例组(P<〇.01)，且实施例4优于实施例1。说明本发明实施 例组治疗效果明显优于现有技术，且人参皂苷Re含量高的三七提取物效果更优。
[0072]表1给药前后对狼疮小鼠尿蛋白浓度的影响
[0073]
[0074] 注：与给药前比较，Δ表示Ρ<〇.〇5, Δ Δ表示Ρ<〇.〇1;与模型组比较，*表示P< 0 · 05，#表示P<0 · 01;与对比例组比较，#表示P<0 · 05，##表示P<0 · 01。
[0075] 4.2血清IgG型抗dsDNA抗体的检测结果
[0076]结果如表2所示，模型组在给药15天后，血清IgG型抗dsDNA抗体水平即显著上升(P <〇.〇1);实施例组在给药前直至给药后30天内，血清IgG型抗dsDNA抗体水平没有产生显著 性的变化(P>〇. 05)。与模型组比较，实施例组的血清IgG型抗dsDNA抗体水平在给药15天后 即出现显著性的下降（P<〇. 01);与对比例组比较，给药15天后，实施例组的血清IgG型抗 dsDNA抗体水平明显低于对比例组(P<0.05)，给药30天后，实施例组的血清IgG型抗dsDNA 抗体水平极显著低于对比例组(P<〇.01)，且实施例4优于实施例1。说明本发明实施例组抗 dsDNA抗体水平明显优于现有技术，且人参皂苷Re含量高的三七提取物效果更优。
[0077]表2给药前后对狼疮小鼠血清I gG型抗dsDNA抗体水平的影响
[0078]
[0079] 注：与给药前比较，Δ表示Ρ<〇.〇5, Δ Δ表示Ρ<〇.〇1;与模型组比较，*表示P< 0 · 05，#表示P<0 · 01;与对比例组比较，#表示P<0 · 05，##表示P<0 · 01。
[0080] 4.3血清ANA水平的检测结果
[0081] 结果如表3所示，模型组在给药15天后，血清ANA水平虽然有所上升，但未出现显著 性差异(P>〇.05)。与模型组比较，实施例组给药15天后血清ANA水平显著下降（P<0.01); 与实施组给药前比较，实施例组给药15天后血清ANA水平明显下降(P<0.05)，给药30天后 血清ANA水平显著下降（P<0.01);与对比例组比较，给药15天后，实施例组的血清ANA水平 明显低于对比例组(P<〇. 05)，给药30天后，实施例组的血清ANA水平极显著低于对比例组 (P<0.01)，且实施例4优于实施例1。说明本发明实施例组血清ANA水平明显优于现有技术， 且人参皂苷Re含量高的三七提取物效果更优。
[0082]表3给药前后对狼疮小鼠血清ANA水平的影响
[0083]
[0084] 注：与给药前比较，Δ表示Ρ<〇.〇5, Δ Δ表示Ρ<〇.〇1;与模型组比较，*表示P< 0 · 05，#表示P<0 · 01;与对比例组比较，#表示P<0 · 05，##表示P<0 · 01。
[0085] 5.讨论
[0086] 狼疮性肾炎患者多数存在肾脏病理损伤，临床表现为轻中度蛋白尿，所以严格控 制或减少尿蛋白的排出，是临床上延缓肾脏病进展的主要措施之一。ANA存在于多数的狼疮 性肾炎患者体内，为自身免疫性疾病的初筛指标，对于狼疮性肾炎的诊断有重要意义，但其 并不能作为狼疮性肾炎的特异性诊断指标。抗dsDNA抗体是狼疮性肾炎的标志性抗体，特别 是高亲和力的IgG型抗dsDNA抗体在狼疮性肾炎的发病机制中发挥重要作用。实验结果表 明，本实施例药物能显著降低小鼠狼疮性肾炎发展过程中尿蛋白的浓度(P<〇.01)，并且使 血清中IgG型抗dsDNA抗体以及ANA的水平显著下降(P<0.01 )，且药效与人参皂苷Re含量成 正比关系，提取三七提取物特别是人参皂苷Re含量不低于40 %的三七提取物对狼疮性肾炎 体现出有益且明显的治疗效果。
[0087]虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描 述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见 的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。
【主权项】
1. 三七及其提取物在制备治疗狼疮性肾炎药物方面的新用途。2. 根据权利要求1所述的新用途，其特征在于所述三七提取物中人参皂苷Re含量不低 于 40%。3. 根据权利要求2所述的新用途，其特征在于所述三七提取物由如下方法制备而成:取 三七药材，粉碎成粗粉，加入12-40倍体积百分比浓度为60~80%乙醇加热提取3次，每次提 取时间为2_8h，合并提取液，过滤，滤液浓缩，干燥，即得。4. 根据权利要求3所述的新用途，其特征在于其活性成分的制备方法为：取三七药材， 粉碎成粗粉，加入12-40倍体积百分比浓度为70%的乙醇加热震荡提取2-3次，每次提取时间 为6-8h，合并提取液，过滤，浓缩，干燥，干浸膏用70%乙醇溶解，所得溶液用石油醚萃取3-5 次脱脂，萃取液上大孔吸附树脂柱，用4-8倍柱体积30-80%乙醇洗脱，洗脱液经氧化铝、活性 炭吸附脱色后浓缩、干燥，即得。5. 根据权利要求4所述的新用途，其特征在于，所述上大孔吸附树脂柱后用来洗脱的乙 醇的浓度为50-60%。6. 根据权利要求1或2任一项所述的新用途，其特征在于，所述的三七提取物与医药学 上可接受的载体配合制成在制备治疗和/或预防狼疮性肾炎药物方面的新用途。
【专利摘要】本发明涉及三七、三七提取物的新用途，即三七、三七提取物，特别是三七提取物中人参皂苷Re含量不低于40%的药物在制备治疗狼疮性肾炎药物方面的新用途。
【IPC分类】A61K31/704, A61P13/12, A61K36/258, A61P37/02, A61K125/00
【公开号】CN105726596
【申请号】CN201610098658
【发明人】谭喜梅, 邱丹兰, 邓裕彦, 黄源春, 陈建惠, 林艳英, 杨北妮
【申请人】广西梧州制药（集团）股份有限公司
【公开日】2016年7月6日
【申请日】2016年2月23日