聚糖样品制备的制作方法

文档序号:12284466阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种纯化聚糖的方法,所述方法包含:

使含有一或多种糖结合物的样品与去糖基化试剂反应,从所述糖结合物释放聚糖;

使所述释放的聚糖与多个磁性粒子关联;

施加磁场以使关联有所述释放的聚糖的所述多个磁性粒子下移;

从所述下移的磁性粒子去除上清液,从而去除所述去糖基化试剂和去糖基化的样品;以及

从所述磁性粒子洗脱所述聚糖。

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述磁性粒子是羧基包经的磁性珠粒。

3.根据权利要求1所述的方法,其中所述糖结合物包含糖蛋白或糖肽或抗体。

4.根据权利要求3所述的方法,其中所述糖结合物包含蛋白聚糖、鞘糖脂、硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、透明质酸、糖脂或糖胺聚糖、融合糖蛋白或抗体-药物结合物。

5.根据权利要求1所述的方法,其中所述去糖基化试剂是去糖基化酶。

6.根据权利要求1所述的方法,其进一步包含通过CE、LC、MS和NMR和其组合中的一者来分析所述洗脱的聚糖。

7.根据权利要求1所述的方法,其中所述去糖基化试剂包含内切糖苷酶,并且任选地其中所述内切糖苷酶包含PNGase F。

8.一种分析一或多种糖结合物的方法,所述方法包含:

使含有一或多种糖结合物的样品与去糖基化试剂反应,从所述糖结合物释放聚糖;

使所述聚糖与多个磁性粒子关联;

施加磁场以使关联有所述聚糖的所述多个磁性粒子下移;

从所述下移的磁性粒子去除上清液,从而去除所述去糖基化试剂和去糖基化的样品;

使所述聚糖与标记试剂反应,从而形成经标记的聚糖;

分析所述经标记的聚糖。

9.根据权利要求8所述的方法,其中所述磁性粒子是羧基包经的磁性珠粒。

10.根据权利要求8所述的方法,其中所述糖结合物包含糖蛋白或糖肽,并且任选地其中所述糖蛋白或糖肽是抗体。

11.根据权利要求8所述的方法,其中所述聚糖通过添加乙腈与所述多个磁性粒子关联。

12.根据权利要求8所述的方法,其进一步包含从所述磁性粒子洗脱所述聚糖,随后使所述聚糖与所述标记试剂反应。

13.根据权利要求12所述的方法,其中所述聚糖通过添加包含所述标记试剂和酸催化剂的混合物从所述磁性珠粒洗脱,并且任选地其中所述酸催化剂是乙酸。

14.根据权利要求12所述的方法,其中使所述聚糖与所述标记试剂反应从而形成经标记的聚糖包含添加还原剂以引发所述聚糖与所述标记试剂的所述反应。

15.根据权利要求8所述的方法,其进一步包含纯化所述经标记的聚糖。

16.根据权利要求15所述的方法,其进一步包含:

使所述经标记的聚糖与所述多个磁性粒子关联;

施加磁场以使关联有所述经标记的聚糖的所述多个磁性粒子下移;

从关联有所述经标记的聚糖的所述下移的复数个磁性粒子去除上清液,从而去除过量标记试剂;以及

从所述多个磁性粒子洗脱所述经标记的聚糖。

17.根据权利要求16所述的方法,其中所述经标记的聚糖通过添加水性介质从所述多个磁性粒子洗脱,并且任选地其中所述水性介质是水。

18.根据权利要求8所述的方法,其中所述经标记聚糖通过毛细管电泳、具有荧光检测的毛细管电泳、液相色谱、具有荧光检测的液相色谱MS或NMR进行分析。

19.根据权利要求8所述的方法,其中所述标记试剂包含以下中的一者:APTS、ANTS、2-AB和2-AA。

20.根据权利要求8所述的方法,其中使所述聚糖与标记试剂反应进一步包含添加还原剂,并且任选地其中所述还原剂包含NaBH3CN。

21.一种用于纯化聚糖的试剂盒,所述试剂盒包含:

多个羧基包经的磁性粒子;

用于从糖结合物释放聚糖的去糖基化试剂;以及

用于使所述聚糖与所述多个羧基包经的磁性粒子关联的试剂。

22.一种用于使用毛细管电泳分离聚糖的组合物,所述组合物包含乙酸锂缓冲剂、聚氧化乙烯、乙二醇和直链聚丙烯酰胺。

23.根据权利要求22所述的组合物,其包含:

乙酸锂缓冲剂,其在所述组合物中的浓度在25与30mM之间,pH是约4.75;

聚氧化乙烯,其分子量是约900kDa,在所述组合物中的浓度是约1%;

乙二醇,其在所述组合物中的浓度是约20%;

直链聚丙烯酰胺,其分子量是约10kDa,在所述组合物中的浓度是约3%。

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