抑瘤素M在制备促进间充质干细胞体外定向分化为骨细胞的产品中的应用的制作方法

文档序号:11837506阅读:来源:国知局

技术特征:

1.抑瘤素M在制备促进间充质干细胞体外定向分化为骨细胞的产品中的应用。

2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,将体外分离培养得到的间充质干细胞接种到添加有抑瘤素M和化学诱导剂的基础培养基中进行培养得到成骨细胞,所述培养时间6~21天。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,间充质干细胞的接种密度为2×104cells/cm2~5×104cells/cm2

4.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述基础培养基包括胎牛血清和DMEM/F12培养液,其中,所述DMEM/F12培养液占80~90%体积比,胎牛血清占10~20%体积比。

5.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述抑瘤素M在基础培养基中的浓度为0.1~10ng/mL。

6.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述化学诱导剂主要由地塞米松、β-甘油磷酸钠和抗坏血酸2磷酸盐组合形成,其中,所述地塞米松的浓度为90~110nmol/L,所述β-甘油磷酸钠的浓度为9~11mmol/L,所述抗坏血酸2磷酸盐的浓度为40~60mg/L。

7.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。

8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,所述脐带间充质干细胞通过如下步骤制得:(1)将脐带浸泡消毒,随后用缓冲液进行冲洗,将冲洗后的脐带分离脐静脉及脐动脉,然后将脐带剪成脐带组织块;

(2)在剪好的脐带组织块中加入细胞分离液,在37℃、5%CO2和95%空气的条件下分离消化12h;

(3)将分离消化后的脐带组织块离心后弃上清,随后悬浮细胞,分离得到脐带间充质干细胞。

9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述步骤(2)中的细胞分离液按体积百分比计包括:DMEM/F12培养液占80~90%体积比,胎牛血清占10~20%体积比,Ⅱ型胶原酶占0.01%体积比和透明质酸酶占0.05%体积比。

10.抑瘤素M配合间充质干细胞在制备治疗骨损伤药物中的应用。

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