1.一种快速鉴定钠离子通道基因突变位点T929V为野生型烟粉虱的引物,其特征在于,该引物为一对,上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.权利要求1所述引物在鉴定钠离子通道基因突变位点T929V为野生型烟粉虱中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,步骤如下:
(1)提取待鉴定样品的基因组DNA,得基因组DNA溶液;
(2)以步骤(1)制得的基因组DNA为模板,利用上述引物对基因组DNA进行PCR扩增,制得PCR扩增产物;
(3)对步骤(2)制得的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,当PCR产物电泳图谱显示被测样品有93bp的一条条带时,则被检测样品钠离子通道基因突变位点T929V为野生型的纯合或杂合烟粉虱;当PCR产物电泳图谱显示无93bp的条带时,则被检测样品钠离子通道基因突变位点T929V为纯合突变型的烟粉虱。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述步骤(2)中PCR扩增的扩增体系为:
基因组DNA溶液2μl,10M上游引物0.5μl,10M下游引物0.5μl,5U/μl rTaq酶0.25μl,10×Taq Buffer 2.5μl,10mM dNTP 2μl,ddH20补至25μl。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述步骤(2)中PCR扩增的扩增条件如下:
94℃预变性2分钟;94℃变性15秒,54℃退火10秒,72℃延伸10秒,进行35个循环;72℃延伸2分钟。
6.一种快速鉴定钠离子通道基因突变位点T929V为突变型烟粉虱的引物,其特征在于,该引物为一对,上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
7.权利要求6所述引物在鉴定钠离子通道基因突变位点T929V为突变型烟粉虱中的应用。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于,步骤如下:
(1)提取待鉴定样品的基因组DNA,得基因组DNA溶液;
(2)以步骤(1)制得的基因组DNA为模板,利用上述引物对基因组DNA进行PCR扩增,制得PCR扩增产物;
(3)对步骤(2)制得的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,当PCR产物电泳图谱显示被测样品有93bp的一条条带时,则被检测样品钠离子通道基因突变位点T929V为突变型的纯合或杂合烟粉虱;当PCR产物电泳图谱显示无93bp的条带时,则被检测样品钠离子通道基因突变位点T929V为纯合野生型的烟粉虱。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述步骤(2)中PCR扩增的扩增体系为:
基因组DNA溶液2μl,10M上游引物0.5μl,10M下游引物0.5μl,5U/μl rTaq酶0.25μl,10×Taq Buffer(缓冲液)2.5μl,10mM dNTP 2μl,ddH20补至25μl。
10.如权利要求8所述的应用,其特征在于,所述步骤(2)中PCR扩增的扩增条件如下:
94℃预变性2分钟;94℃变性15秒,54℃退火10秒,72℃延伸10秒,进行35个循环;72℃延伸2分钟。