血清miR‑630的荧光实时定量PCR检测试剂盒以及miR‑630的应用的制作方法

文档序号:12412843阅读:来源:国知局

技术特征:

1.miR-630在用于获取早期创伤性异位骨化信息的试剂盒中的应用。

2.miR-630作为用于获取早期创伤性异位骨化信息的试剂盒中的检测反应物的应用。

3.一种血清miR-630的荧光实时定量PCR检测试剂盒,其特征在于:包括:miR-630正向引物、miR-630反向引物、内参U6正向引物、内参U6反向引物和qPCR反应液;

miR-630正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;

miR-630反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示;

内参U6正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示;

内参U6反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

4.根据权利要求3所述的miR-630的荧光实时定量PCR检测试剂盒,其特征在于:所述qPCR反应液的最终体积为20μL,包括:终浓度为1×的2xAll in One TM qPCR Mix、终浓度为0.2μM的qPCR Primer、终浓度为0.2μM的Universal Adaptor PCR、2μL的1st strand cDNA、4μLddH2O。

5.根据权利要求4所述的miR-630的荧光实时定量PCR检测试剂盒,其特征在于:在qPCR反应液中,2x All in One TM qPCR Mix的体积为10μL,qPCR Primer的浓度为2μM且其体积为2μL,Universal Adaptor PCR的浓度为2μM且其体积为2μL。

6.根据权利要求4所述的miR-630的荧光实时定量PCR检测试剂盒,其特征在于:所述荧光实时定量PCR体系的反应步骤为:

(1)、按以下条件进行一次循环:先在95℃预变性10分钟再在95℃变性10秒;

(2)、按以下条件依次进行四十次循环:先在57℃退火20秒,再在72℃延伸10秒。

7.根据权利要求4所述的miR-630检测试剂盒,其特征在于:若miR-630的荧光实时定量PCR检测试剂盒所检测出血清中miR-630的相对含量为0.93±0.03,则判定该血清的供体处于异位骨化创伤早期;

若miR-630的荧光实时定量PCR检测试剂盒所检测出血清中miR-630的相对含量为2.49±0.11至2.82±0.16,则判定该血清的供体处于异位骨化创伤后三个月之后的时期。

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