植物体系表达人源化抗AGR2单克隆抗体18A4的质粒构建的制作方法

文档序号:11095905阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种T-DNA元件,所述T-DNA元件包括从5’端到3’端方向排列的抗体轻链克隆位点、IRES序列、抗体重链克隆位点。

2.根据权利要求1所述的T-DNA元件,其特征在于,所述IRES序列如SEQ ID NO.8所示。

3.根据权利要求1所述的T-DNA元件,其特征在于,所述T-DNA元件包括从5’端到3’端方向排列的CPMV5’UTR序列、抗体轻链克隆位点、3’UTR+Tnos+CAMV-CPMV序列、抗体重链克隆位点。

4.根据权利要求3所述的T-DNA元件,其特征在于,所述CPMV5’UTR序列SEQ ID NO.20所示;所述3’UTR+Tnos+CAMV-CPMV序列如SEQ ID NO.23所示。

5.一种用于转染植物细胞的抗体表达载体,所述表达载体包括抗体基因表达单元,所述表达单元包括从5’端到3’端方向排列的启动子序列、如权利要求1~4任一项所述T-DNA元件序列和终止子序列。

6.根据权利要求5所述的表达载体,其特征在于,还包括以下特征的任一项或多项:(1)所述启动子序列如SEQ ID NO.5所示;(2)所述终止子序列如SEQ ID NO.6所示:(3)所述表达载体中还包括抗性基因;(4)所述表达载体中还包括选择性标记基因;(5)所述表达载体中还包括引物的结合位点。

7.根据权利要求1所述的表达载体,其特征在于,所述表达载体是由pGreenII0800质粒改造获得,所述表达载体是在pGreenII0800质粒的左border位点和右border位点之间插入如权利要求1~4任一项所述T-DNA元件序列,构建获得。

8.如权利要求6~7任一项所述表达载体在植物体系表达人源抗体中的用途。

9.一种人源抗体表达试剂盒,所述试剂盒包括用于转染植物细胞的双元载体,所述双元载体包括如权利要求6~7任一项所述转染植物细胞的抗体表达载体和辅助质粒。

10.一种表达人源抗体的方法,包括如下步骤:

(1)重组载体构建:将抗体轻链序列和抗体重链序列分别插入至如权利要求6~8任一项转染植物细胞的抗体表达载体的T-DNA元件中,构建获得重组载体;

(2)转化与表达:将步骤(1)所得重组载体和辅助质粒转化感受态细胞,再将感受态细胞注射入植物叶子中,培养表达,获得人源抗体。

11.一种人源化抗体,由采用如权利要求10所述表达人源抗体的方法获得。

12.如权利要求11所述的人源化抗体,其特征在于,所述人源化抗体为人源化抗AGR2单克隆抗体。

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