1.在酵母菌中实现高准确率定点基因敲除的方法，其特征在于，采用聚合酶链式反应或全基因合成的方法获得目标敲除基因上下游序列后，将上下游序列按与原基因相反方向连接，并插入到载体质粒上构建环状克隆载体，对环状克隆载体进行线性化处理得到线型双链DNA，将线型双链DNA经由5’→3’核酸外切酶处理，形成线型3’突出长粘端双链DNA后转化酵母菌细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述线型3’突出长粘端双链DNA两端各携带1段与目标敲除基因上游或下游序列相同的同源序列。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述线型3’突出长粘端双链DNA由线型双链DNA经由5’→3’核酸外切酶处理形成，酶用量为50-5000U/nmol线型双链DNA载体，处理温度25-60℃，处理时间为1min-1h。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述线型3’突出长粘端双链DNA的两个3’突出粘端的延伸方向均指向目标基因的编码区，即两个3’突出粘端相向而行共同指向目标敲除基因区段。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述同源序列的长度为100-1000bp，经核酸酶处理后3’端单链粘端长度为100-1000nt。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述5’→3’核酸外切酶是T5核酸外切酶、T7核酸外切酶或λ核酸外切酶。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，线型3’突出长粘端双链DNA转化酵母菌细胞的方法是电击介导法、聚乙二醇介导法、氯化锂介导法、醋酸锂介导法、或原生质体介导法。