利用生物酶制备薯蓣皂苷元的方法及其所用生物材料与流程

文档序号:20207286发布日期:2020-03-31 10:23阅读:来源:国知局

技术特征:

1.c和d在制备薯蓣皂苷元中的应用,所述c为fbg1或与fbg1相关的生物材料;所述d为frg1或与frg1相关的生物材料;

所述fbg1为a1)或a2)或a3)或a4)的蛋白质:

a1)氨基酸序列是seqidno.2的蛋白质;

a2)氨基酸序列是seqidno.2的第19-621位的蛋白质;

a3)在a1)或a2)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白;

a4)将a1)或a2)所示的蛋白质经过一个以上氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与a1)或a2)所示的蛋白质具有90%以上的同一性且具有糖基水解酶活性的蛋白质;

所述与fbg1相关的生物材料为下述b1)至b16)中的任一种:

b1)编码所述fbg1的核酸分子;

b2)含有b1)所述核酸分子的表达盒;

b3)含有b1)所述核酸分子的重组载体;

b4)含有b2)所述表达盒的重组载体;

b5)含有b1)所述核酸分子的重组微生物;

b6)含有b2)所述表达盒的重组微生物;

b7)含有b3)所述重组载体的重组微生物;

b8)含有b4)所述重组载体的重组微生物;

b9)含有b1)所述核酸分子的转基因动物细胞系;

b10)含有b2)所述表达盒的转基因动物细胞系;

b11)含有b3)所述重组载体的转基因动物细胞系;

b12)含有b4)所述重组载体的转基因动物细胞系;

b13)含有b1)所述核酸分子的转基因植物细胞系;

b14)含有b2)所述表达盒的转基因植物细胞系;

b15)含有b3)所述重组载体的转基因植物细胞系;

b16)含有b4)所述重组载体的转基因植物细胞系。

所述frg1为r1)或r2)或r3)或r4)的蛋白质:

r1)氨基酸序列是seqidno.4的蛋白质;

r2)氨基酸序列是seqidno.4的第24-670位的蛋白质;

r3)在r1)或r2)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白;

r4)将r1)或r2)所示的蛋白质经过一个以上氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与r1)或r2)所示的蛋白质具有90%以上的同一性且具有糖基水解酶活性的蛋白质;

所述与frg1相关的生物材料为下述s1)至s16)中的任一种:

s1)编码所述frg1的核酸分子;

s2)含有s1)所述核酸分子的表达盒;

s3)含有s1)所述核酸分子的重组载体;

s4)含有s2)所述表达盒的重组载体;

s5)含有s1)所述核酸分子的重组微生物;

s6)含有s2)所述表达盒的重组微生物;

s7)含有s3)所述重组载体的重组微生物;

s8)含有s4)所述重组载体的重组微生物;

s9)含有s1)所述核酸分子的转基因动物细胞系;

s10)含有s2)所述表达盒的转基因动物细胞系;

s11)含有s3)所述重组载体的转基因动物细胞系;

s12)含有s4)所述重组载体的转基因动物细胞系;

s13)含有s1)所述核酸分子的转基因植物细胞系;

s14)含有s2)所述表达盒的转基因植物细胞系;

s15)含有s3)所述重组载体的转基因植物细胞系;

s16)含有s4)所述重组载体的转基因植物细胞系。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:b1)中编码所述fbg1的核酸分子为fbg1基因,所述fbg1基因为如下c1)-c3)中任一所述的dna分子:

c1)编码序列是seqidno.1的dna分子;

c2)编码序列是seqidno.1的第55-1866位核苷酸的dna分子;

c3)与c1)或c2)限定的dna分子具有90%以上的同一性且编码所述fbg1的dna分子;

s1)中编码所述frg1的核酸分子为frg1基因;所述frg1基因为如下d1)-d3)中任一所述的dna分子:

d1)编码序列是seqidno.3的dna分子;

d2)编码序列是seqidno.3的第70-2013位核苷酸的dna分子;

d3)与d1)或d2)限定的dna分子具有90%以上的同一性且编码所述frg1的dna分子;

b3)或b4)所述的重组载体为将ppiczαa的ecori和noti识别位点间的片段替换为seqidno.1的第1-1863位所示的fbg1基因,保持ppiczαa的其它序列不变得到的重组表达载体,命名为ppiczαa-fbg1;

b5)至b8)的重组微生物为将ppiczαa-fbg1导入酵母中得到的表达氨基酸序列是seqidno.2的蛋白质的重组酵母;

s3)或s4)所述的重组载体为将ppic9k的ecori和noti识别位点间的片段替换为seqidno.3的第1-2010位所示的frg1基因,保持ppic9k的其它序列不变得到的重组表达载体,命名为ppic9k-frg1;

s5)至s8)的重组微生物为将ppic9k-frg1导入酵母中得到的表达氨基酸序列是seqidno.4的蛋白质的重组酵母。

3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于:所述应用中利用酶制备薯蓣皂苷元,所述酶为所述fbg1和所述frg1,或所述酶包括所述fbg1和所述frg1。

4.根据权利要求1-3中任一权利要求所述的应用,其特征在于:所述应用包括:

1)用所述frg1将盾叶新苷转化为延龄草苷;

2)用所述fbg1将延龄草苷转化为薯蓣皂苷元。

5.权利要求1中所述的fbg1。

6.权利要求1或2中所述的与fbg1相关的生物材料。

7.权利要求5所述的fbg1或权利要求6所述的生物材料在制备薯蓣皂苷元中的应用。

8.y1或y2的应用:

y1、权利要求5所述的fbg1或权利要求6所述的生物材料在将延龄草苷转化为薯蓣皂苷元中的应用;

y2、权利要求5所述的fbg1在作为糖基水解酶中的应用。

9.制备权利要求5所述fbg1的方法,包括使权利要求5所述fbg1的编码基因在生物中进行表达得到所述fbg1的步骤;所述生物为微生物、植物或非人动物。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:所述表达包括将所述fbg1的编码基因导入受体微生物,得到表达所述fbg1的重组微生物,培养所述重组微生物,表达得到所述fbg1。

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