一种以4-（4-甲基哌啶）-3-缩氨基硫脲为配体的金配合物及其合成方法和应用与流程

本发明涉及金属配合物的合成，具体是一种以4-(4-甲基哌啶)-3-缩氨基硫脲为配体的金配合物及其合成方法和应用。

背景技术：

金属配合物的抗肿瘤生物活性研究起始于20世纪60年代，起初源于铂配合物的良好抗肿瘤活性，这一研究发现引起人们对金属配合物抗肿瘤研究的重视。近年来，人们大量地合成有机金属配合物，其中就有研究发现金配合物具有很好的抗肿瘤活性，而且相对于铂配合物，其毒性相对较低。金配合物能够促进线粒体活性氧显著释放，进而调控肿瘤相关凋亡因子及蛋白的表达。

α-n-缩氨基硫脲作为抗肿瘤化合物的研究已有半个多世纪，其研究领域主要是围绕着缩氨基硫脲-金属配合物进行。4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲作为一种新型杂环氨基硫脲，目前尚未发现关于4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲与“金”及其他金属配合物的抗肿瘤研究报导，本研究合成了系列全新的4-(4-甲基哌啶)-3-缩氨基硫脲配体及其金配合物，并对其抗肿瘤活性进行了研究。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，而提供一种以4-(4-甲基哌啶)-3-缩氨基硫脲为配体的金配合物及其合成方法和应用，这些金配合物具有比顺铂更好的体外抗肿瘤活性，能抑制肿瘤细胞迁移和繁殖，具有高活性低毒性的特点。

实现本发明目的的技术方案是：

一种以4-(4-甲基哌啶)-3-缩氨基硫脲为配体的金配合物，所述金配合物的结构式如下c1-c6所示：

上述式c1-c6所示金配合物的合成路线为：

上述式c1-c6所示的金配合物的合成方法，包括如下步骤：

1)将醛类衍生物溶于甲醇，溶解后，加入4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲混合均匀，得到混合溶液，将混合溶液回流、过滤，滤饼用甲醇洗涤2-3次，得化合物；

2)将步骤1)得到的化合物溶于甲醇后，再加入na[aucl4].2h2o，室温下搅拌12h，过滤，得黄绿色固体，将固体用正己烷洗涤2-3次，真空干燥，再用二氯甲烷和正己烷混合液重新结晶得黑色晶体，即为目标配合物。

所述的醛类衍生物，为2-羟基-1-奈甲醛、水杨醛、5-氯水杨醛、6-乙氧基水杨醛、3-甲氧基水杨醛和3-甲氧基-5-烯丙基-水杨醛中的一种。

步骤1)中，所述的醛类衍生物与4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲的物质的量之比为1：1；醛类衍生物与甲醇的物质之比为3：5000。

步骤1)中，所述的回流，回流温度为65℃，回流时间为4h。

步骤2)中，所述的化合物与na[aucl4].2h2o的物质的量之比为1：1；化合物与甲醇的物质的量之比为1：2500。

本发明进一步包括以金配合物c1-c6为活性成分制备的抗肿瘤药物。

有益效果：本发明提供的一种以4-(4-甲基哌啶)-3-缩氨基硫脲为配体的金配合物及其合成方法和应用，与现有技术相比，该配合物结构新颖，三齿配位增强了金配合物的稳定性，对肿瘤细胞抑制效果明显，细胞毒性较低。

附图说明

图1为实施例1合成的c1配合物的单晶结构图；

图2为实施例2合成的c2配合物的单晶结构图；

图3为实施例3合成的c3配合物的单晶结构图；

图4为实施例4合成的c4配合物的单晶结构图；

图5为实施例5合成的c5配合物的单晶结构图；

图6为实施例6合成的c6配合物的单晶结构图.

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做进一步阐述，但不是对本发明的限定。

实施例1：

c1配合物的合成方法为：

1)将3mmol(516mg)2-羟基-1-奈甲醛溶于20ml甲醇，溶解后，加入3mmol(519mg)4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲混合均匀，得到混合溶液，将混合溶液65℃回流4h、过滤，滤饼用甲醇洗涤2-3次，得化合物1，

yield:0.71g,72.5％,lightyellowsolid；rf＝0.424(petroleumether:etoac＝2:1).m.p.113-115℃.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.88(s,1h),11.42(s,1h),9.40(s,1h),8.08(d,j＝8.5hz,1h),7.90-7.88(m,2h),7.61-7.57(m,1h),7.41-7.37(m,1h),7.21-7.19(m,1h),4.74(d,j＝13.1hz,2h),3.18-3.11(m,2h),1.74-1.72(m,3h),1.26-1.08(m,2h),0.94(d,j＝6.1hz,3h).¹³cnmr(100mhz,dmso-d6)δ178.05,156.97,143.68,131.84,131.50,128.88,127.64,127.40,123.27,120.13,119.13,108.59,48.60,33.56,30.22,21.34.esi⁺m/z:calcdforc18h20n3os，326[m-h]^-。

2)将步骤1)得到的0.1mmol(32.7mg)化合物1溶于10ml甲醛后，再加入0.1mmol(39.7mg)na[aucl4].2h2o，室温下搅拌12h，过滤，得黄绿色固体，将固体用正己烷洗涤2-3次，真空干燥，再用二氯甲烷和正己烷混合液重新结晶得黑色晶体，即为目标配合物c1，其单晶结构如图1所示。

yield：0.04g,71.5％,ir,cm^-1:ir,cm^-1:3434(s,amide),2926(m,aromatichydrogen),1616(s),1524(s,-c＝c-),1384(s),1262(s,thioamide),1186(s),823(s),743(s,ph-h).esi⁺m/z:calcdforc18h20aucln3os,558[m+h]⁺。

实施例2：

c2配合物的合成方法为：

1)将3mmol(366mg)水杨醛溶于20ml甲醇，溶解后，加入3mmol(519mg)4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲混合均匀，得到混合溶液，将混合溶液65℃回流4h、过滤，滤饼用甲醇洗涤2-3次，得化合物2，

yield:0.76g,91.4％,lightyellowsolid；rf＝0.324(petroleumether:etoac＝2:1).m.p.130-132℃.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.61(s,1h),11.36(s,1h),8.45(s,1h),7.38(dd,j＝7.9,1.7hz,1h),7.28-7.24(m,1h),6.91-6.87(m,2h),4.69(d,j＝13.2hz,2h),3.13-3.06(m,2h),1.74-1.66(m,3h),1.17-1.07(m,2h),0.92(d,j＝6.1hz,3h).¹³cnmr(100mhz,dmso-d6)δ178.60,157.00,145.82,130.63,129.85,118.95,118.50,116.44,48.80,33.57,30.19,21.33.esi⁺m/z:calcdforc14h18n3os，276[m-h]^-。

2)将步骤1)得到的0.1mmol(27.7mg)化合物2溶于10ml甲醛后，再加入0.1mmol(39.7mg)na[aucl4].2h2o，室温下搅拌12h，过滤，得黄绿色固体，将固体用正己烷洗涤2-3次，真空干燥，再用二氯甲烷和正己烷混合液重新结晶得黑色晶体，即为目标配合物c2，其单晶结构如图2所示。

yield：0.035g,68.7％,ir,cm^-1:ir,cm^-1:3435(s,amide),2927(m,aromatichydrogen),1627(s),1596(s),1525(s,-c＝c-),1384(s),1265(s,thioamide),1061(s),847(s),749(s,ph-h),.esi⁺m/z:calcdforc14h18aucln3os,508[m+h]⁺。

实施例3：

c3配合物的合成方法为：

1)将3mmol(465mg)5-氯水杨醛溶于20ml甲醇，溶解后，加入3mmol(519mg)4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲混合均匀，得到混合溶液，将混合溶液65℃回流4h、过滤，滤饼用甲醇洗涤2-3次，得化合物3，

yield:0.85g,91.1％,lightyellowsolid；rf＝0.356(petroleumether:etoac＝2:1).m.p.120-122℃.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.70(s,1h),11.50(s,1h),8.40(s,1h),7.52(d,j＝2.7hz,1h),7.27(dd,j＝8.8,2.7hz,1h),6.91(d,j＝8.8hz,1h),4.69(d,j＝13.1hz,2h),3.22-2.93(m,2h),1.69(d,j＝10.2hz,3h),1.16-1.07(m,2h),0.92(d,j＝6.1hz,3h).¹³cnmr(100mhz,dmso-d6)δ178.70,155.67,143.83,130.03,128.47,122.47,120.19,118.27,48.94,33.58,30.17,21.31.esi⁺m/z:calcdforc14h17n3os，310[m-h]^-。

2)将步骤1)得到的0.1mmol(31.1mg)化合物3溶于10ml甲醛后，再加入0.1mmol(39.7mg)na[aucl4].2h2o，室温下搅拌12h，过滤，得黄绿色固体，将固体用正己烷洗涤2-3次，真空干燥，再用二氯甲烷和正己烷混合液重新结晶得黑色晶体，即为目标配合物c3，其单晶结构如图3所示。

yield：0.038g,70.1％,ir,cm^-1:ir,cm^-1:3435(s,amide),2948(m,aromatichydrogen),1627(s),1596(s),1525(s,-c＝c-),1450(s,-c＝c-),1266(s,thioamide),1176(s),982(s),827(s),732(s,ph-h).esi⁺m/z:calcdforc14h17aucl2n3o2s,542[m+h]⁺。

实施例4：

c4配合物的合成方法为：

1)将3mmol(498mg)6-乙氧基水杨醛溶于20ml甲醇，溶解后，加入3mmol(519mg)4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲混合均匀，得到混合溶液，将混合溶液65℃回流4h、过滤，滤饼用甲醇洗涤2-3次，得化合物4，

yield:0.74g,76.8％,lightyellowsolid；rf＝0.302(petroleumether:etoac＝2:1).m.p.145-147℃.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.55(s,1h),11.35(s,1h),8.44(s,1h),6.98(s,1h),6.96(s,1h),6.83-6.79(m,1h),4.69(d,j＝13.1hz,2h),4.03(q,j＝7.0hz,2h),3.13-3.06(m,2h),1.73-1.66(m,3h),1.34(t,j＝7.0hz,3h),1.18-1.07(m,2h),0.92(d,j＝6.1hz,3h).¹³cnmr(100mhz,dmso-d6)δ178.59,147.18,147.07,145.91,121.63,118.66,118.56,114.95,64.00,48.81,33.57,30.19,21.33,14.77.esi⁺m/z:calcdforc16h22n3o2s，320[m-h]^-。

2)将步骤1)得到的0.1mmol(30.7mg)化合物4溶于10ml甲醛后，再加入0.1mmol(39.7mg)na[aucl4].2h2o，室温下搅拌12h，过滤，得黄绿色固体，将固体用正己烷洗涤2-3次，真空干燥，再用二氯甲烷和正己烷混合液重新结晶得黑色晶体，即为目标配合物c4，其单晶结构如图4所示。

yield：0.03g,55.6％,ir,cm^-1:ir,cm^-1:3435(s,amide),2934(m,aromatichydrogen),1638(s),1593(s),1529(s,-c＝c-),1438(s,-c＝c-),1263(s,thioamide),1246(s,ethoxy),968(s),726(s,ph-h).esi⁺m/z:calcdforc16h22aucln3o2s,552[m+h]⁺。

实施例5：

c5配合物的合成方法为：

1)将3mmol(465mg)3-甲氧基水杨醛溶于20ml甲醇，溶解后，加入3mmol(519mg)4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲混合均匀，得到混合溶液，将混合溶液65℃回流4h、过滤，滤饼用甲醇洗涤2-3次，得化合物5，

yield:0.69g,74.9％,lightyellowsolid；rf＝0.302(petroleumether:etoac＝2:1).m.p.117-119℃.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.52(s,1h),11.21(s,1h),8.44(s,1h),7.00-6.97(m,2h),6.84-6.80(m,1h),4.69(d,j＝11.9hz,2h),3.79(s,3h),3.17-3.05(m,2h),1.71-1.67(m,3h),1.17-1.07(m,2h),0.92(d,j＝6.1hz,3h).¹³cnmr(100mhz,dmso-d6)δ178.67,147.97,146.92,145.71,121.43,118.62,118.56,113.55,55.80,48.85,33.60,30.22,21.35.esi⁺m/z:calcdforc15h20n3o2s，306[m-h]^-。

2)将步骤1)得到的0.1mmol(32.1mg)化合物5溶于10ml甲醛后，再加入0.1mmol(39.7mg)na[aucl4].2h2o，室温下搅拌12h，过滤，得黄绿色固体，将固体用正己烷洗涤2-3次，真空干燥，再用二氯甲烷和正己烷混合液重新结晶得黑色晶体，即为目标配合物c5，其单晶结构如图5所示。

yield：0.033g,59.6％,ir,cm^-1:ir,cm^-1:3453(s,amide),2930(m,aromatichydrogen),1638(s),1592(s),1517(s,-c＝c-),1439(s,-c＝c-),1264(s,thioamide),1246(s,methoxy),971(s),729(s,ph-h).esi⁺m/z:calcdforc15h20aucln3o2s,538[m+h]⁺。

实施例6：

c6配合物的合成方法为：

1)将3mmol(576mg)3-甲氧基水杨醛溶于20ml甲醇，溶解后，加入3mmol(519mg)4-(4-甲基哌啶)-3-氨基硫脲混合均匀，得到混合溶液，将混合溶液65℃回流4h、过滤，滤饼用甲醇洗涤2-3次，得化合物6，

yield:0.73g,70.1％,lightyellowsolid；rf＝0.322(petroleumether:etoac＝2:1).m.p.121-122℃.¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.31(s,1h),11.23(s,1h),8.39(s,1h),6.87-6.76(m,2h),5.96(d,j＝40.4hz,1h),5.02(s,2h),4.68(d,j＝15.8hz,2h),3.78(s,3h),3.30(d,j＝6.7hz,2h),3.09(td,j＝12.9,2.3hz,2h),1.70(d,j＝17.8hz,3h),1.13(d,j＝41.3hz,2h),0.93(d,j＝6.1hz,3h).¹³cnmr(100mhz,dmso-d6)δ178.70,147.85,145.41,145.12,137.79,129.92,120.51,118.39,115.61,113.94,55.80,48.97,33.63,30.23,21.37.esi⁺m/z:calcdforc18h24n3o2s，346[m-h]^-。

2)将步骤1)得到的0.1mmol(34.7mg)化合物6溶于10ml甲醛后，再加入0.1mmol(39.7mg)na[aucl4].2h2o，室温下搅拌12h，过滤，得黄绿色固体，将固体用正己烷洗涤2-3次，真空干燥，再用二氯甲烷和正己烷混合液重新结晶得黑色晶体，即为目标配合物c6，其单晶结构如图6所示。

yield：0.031g,55.6％,ir,cm^-1:ir,cm^-1:3468(s,amide),2925(m,aromatichydrogen),1639(s),1592(s),1521(s,-c＝c-),1443(s,-c＝c-),1264(s,thioamide),1248(m,methoxy),999(s),717(m,ph-h),652(m,ph-h).esi⁺m/z:calcdforc18h24aucln3o2s,578[m+h]⁺。

体外活性测试

对人宫颈癌细胞(hela)、人膀胱癌细胞(t24)、人非小肺癌细胞(a549)、人胃癌细胞(mgc-803)、人正常肝细胞(hl-7702)进行了增殖抑制活性实验：

1、细胞株与细胞培养

本实验选用人宫颈癌细胞、人膀胱癌细胞、人非小肺癌细胞、人胃癌细胞、人肝癌细胞、人正常肝细胞等人类细胞株。

所有细胞株均培养在含10％小牛血清、100u/ml链霉素的rpmi-1640/dmem培养液内，置37℃含体积浓度5％co2孵箱中培养。

2、待测化合物的配制所用的受试药物的纯度≥95％，将其dmso储液用生理缓冲液稀释后配置成5mmol/l的终溶液，其中助溶剂dmso的浓度≤1％，测试该浓度下化合物对各种肿瘤细胞生长得抑制程度。

3、细胞生长抑制实验(mtt法)

(1)取对数生长期的肿瘤细胞，经胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培养液配置成浓度为5000个/ml的细胞悬液，以没孔180μl接种于96孔培养板中，使待测细胞浓度至每孔1000～10000/孔(边缘孔用无菌pbs填充)；

(2)5％co2，37℃孵育24h，至细胞单层铺满孔底，每孔加入一定浓度梯度的药物20μl，每个浓度梯度设3-5个复孔；

(3)5％co2，37℃孵育48h，至倒置显微镜下观察；

(4)每孔加入10μl的mtt溶液(5mg/mlpbs，即0.5％mtt)，继续培养4h-6h；

(5)终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入100-130μl的dmso充分溶解甲瓒沉淀，振荡器混匀后，在酶标仪用波长为570nm，参比波长为450nm测定各孔的光密度值；

(6)同时设置调零孔(培养基、mtt、dmso)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、mtt、dmso)。

(7)根据测得的光密度值(od值)，来判断活细胞数量，od值越大，细胞活性越强。利用公式：

肿瘤细胞生长抑制率(％)＝[(1-实验组平均od值)/(对照组平均od值)]×％；

ic50测定：利用以上方法，每种化合物须设置浓度梯度，其中含多个(一般5～8个)浓度，每个浓度也须设置3～5个副孔，实验得到每个不同浓度的抑制率，然后在spss软件中计算化合物的ic50值。

表1各化合物对不同细胞株的ic50值(μm)

由表1中可以看出，氨基硫脲-金配合物对各株肿瘤细胞表现出较好的抑制活性，相比顺铂的ic50值要低。