单链VH-L1-Cκ-L2-CH1-抗体的制作方法

文档序号:20513900发布日期:2020-04-24 18:51阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种单链vh抗体(scvhab),按照从n末端到c末端:vh-l1-cl-l2-ch1的顺序包含由vh结构域及免疫球蛋白恒定结构域cl和ch1所组成的抗原结合部分,

其中l1和l2各自独立地是肽接头;并且

其中cl通过β片层接触与ch1配对,从而获得cl/ch1二聚体。

2.根据权利要求1所述的scvhab,其中所述cl是cκ或者cλ,优选地其中cλ选自由cλ1、cλ2和cλ3组成的组。

3.根据权利要求1或2所述的scvhab,

其中l1是长度为3-40个氨基酸的氨基酸序列,优选由下列所组成

a)任意组合的甘氨酸和/或丝氨酸的序列;或

b)vh框架序列;

和/或

其中l2是长度为25-50个氨基酸的氨基酸序列,优选地由任意组合的甘氨酸和/或丝氨酸的序列所组成。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的scvhab,其中所述抗原结合部分的c末端融合到铰链区和其他的免疫球蛋白恒定结构域,所述免疫球蛋白恒定结构域以按照从n末端到c末端的顺序至少包含ch2-ch3。

5.一种包含根据权利要求4所述的两个scvhab的重链抗体(hcab),其中使第一scvhab的ch2-ch3结构域与第二scvhab的ch2-ch3结构域配对,从而获得fc区。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的scvhab或者根据权利要求5所述的hcab,其用于医学用途。

7.一种核酸分子,其编码根据权利要求1至4中任一项所述的scvhab。

8.一种核酸分子,其编码根据权利要求5所述的hcab。

9.一种包含根据权利要求1至4中任一项所述的scvhab或者根据权利要求5所述的hcab的抗体库,包含至少102种抗体的多样性,各自以不同的抗原结合位点为特征。

10.根据权利要求9所述的抗体库,其中

a)编码所述抗体的基因来源于非免疫或免疫小鼠的b细胞,或者

b)所述抗体是由哺乳动物浆细胞分泌。

11.根据权利要求10所述的抗体库,其中所述浆细胞具有啮齿动物来源。

12.根据权利要求11所述的抗体库,其中所述浆细胞具有小鼠来源。

13.一种免疫球蛋白重链基因座,包含:

a)可变重链区,其包含每个vh、dh和jh基因片段中的一个或多个,

b)恒定重链区,包含编码所述cl和ch1结构域的恒定外显子,任选地进一步包含编码ch2和ch3结构域的外显子,和

c)连接区,

对这些区域进行工程化并定位成表达根据权利要求1至4中任一项所述的scvhab或根据权利要求5所述的hcab。

14.一种转基因非人动物,包含根据权利要求11所述的基因座。

15.根据权利要求14所述的转基因非人动物,其是小鼠、大鼠、兔或鸡。

16.根据权利要求14或15所述的转基因非人动物,其包含在任何内源性轻链基因座κ或λ或两者中的功能失去突变或缺失。

17.一种用于形成转基因非人动物的方法,包括:

a)提供非人动物细胞;

b)提供一种或多种包含编码根据权利要求1至4中任一项所述的scvhab或者根据权利要求5所述的hcab的外显子的载体;

c)将所述一种或多种载体导入所述非人动物细胞中;

d)将所述外显子整合到所述非人动物细胞的基因组中,并选择转基因细胞,其中所述外显子已在靶位点处被整合到所述非人动物细胞的细胞基因组中,所述靶位点是在内源性免疫球蛋白重链基因座中,即在所述内源性免疫球蛋白重链基因座中的第一ch1外显子的5’;和

e)利用所述转基因细胞形成包含所述转基因细胞的转基因非人动物。

18.根据权利要求17所述的方法,其中所述非人动物细胞是胚胎干细胞。

19.一种产生抗体的方法,包含:

a)在非人动物中表达异源免疫球蛋白重链基因座,该基因座包含

i)可变重链区,其包含每个vh、dh和jh基因片段中的一个或多个基因片段,

ii)恒定重链区,其包含编码所述cl和ch1结构域的恒定外显子,和

iii)连接区,

对这些区域进行工程化并定位成表达根据权利要求1至4中任一项所述的scvhab或根据权利要求5所述的hcab,

其中所述非人动物不表达内源性κ和/或λ基因座;和

b)产生抗体,其是根据权利要求1至4中任一项所述的scvhab或根据权利要求5所述的hcab,或者其至少包含所述scvhab或所述hcab的vh结构域。

20.根据权利要求14至16中任一项所述的转基因非人动物的用途,

a)用于产生scvhab或hcab抗体或者其包括所述vh结构域的片段;或者

b)用于产生scvhab或hcab抗体、或者其包含vh结构域的片段的天然文库、或者编码或表达所述天然文库的核酸序列的文库。

21.根据权利要求20所述的用途,其进一步包含产生抗体或其片段,所述抗体包含包括在所述scvhab或hcab抗体中的所述vh结构域。

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