嵌合抗原受体介导的细胞靶向的制作方法

文档序号:20841866发布日期:2020-05-22 17:36阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种分离的遗传修饰的t细胞,其包含:编码嵌合抗原受体(car)的第一多核苷酸和包含编码融合蛋白的序列的第二多核苷酸,所述融合蛋白包含β-2-微球蛋白(b2m)蛋白和hla-e和/或hla-g蛋白,其中所述第一和第二多核苷酸被整合到t细胞受体中-α(tcra)基因中。

2.如权利要求1所述的遗传修饰的t细胞,其中,内源性b2m基因在所述t细胞中失活。

3.如权利要求1或2所述的遗传修饰的t细胞,其中,免疫检查点基因在所述t细胞中失活。

4.如权利要求1-3中任一项所述的遗传修饰的t细胞,其中,所述第一和第二多核苷酸通过自切割p2a肽连接。

5.如权利要求1-4中任一项所述的遗传修饰的t细胞,其中,所述第二多核苷酸还包含编码所述b2m和hla-e-或hla-g-编码序列之间的接头的序列。

6.如权利要求4所述的遗传修饰的t细胞,其中,所述接头包含1、2、3、4、5或6个拷贝的g4s。

7.一种制备权利要求1-6中任一项所述的遗传修饰的t细胞的方法,所述方法包括:

使用核酸酶切割分离的t细胞中的tcr-α基因,所述核酸酶包含结合所述tcr-α基因中靶位点的dna结合结构域;和

将包含第一和第二多核苷酸的一种或多种供体引入所述t细胞,从而使所述第一和第二多核苷酸整合到被切割的tcr-α基因中。

8.如权利要求7所述的方法,其中,所述供体还包含tcr-α基因的同源臂,所述同源臂侧接所述第一和第二多核苷酸。

9.如权利要求7或8所述的方法,其中,所述供体还包含驱动所述第一和/或第二多核苷酸表达的启动子。

10.如权利要求7-9中任一项所述的方法,其中,所述供体还包含tcr-α增强子序列。

11.如权利要求7-10中任一项所述的方法,其中,所述供体还包含3'非翻译区(3’utr)和5'非翻译区(5’utr)。

12.如权利要求11所述的方法,其中,所述3’utr还包含wpre序列。

13.如权利要求11或12所述的方法,其中,所述5’utr还包含来自非洲爪蟾蜍β球蛋白基因的序列。


技术总结
本文公开了使用含至少一个DNA结合结构域和切割结构域或切割半结构域的经工程改造的核酸酶在能够保持细胞活力的条件下工程改造细胞以表达CAR的组合物和方法,其中所述细胞还具有失活的TCR、HPRT、PD1、CISH和/或HLA基因。还提供了编码核酸酶的多核苷酸,包含编码核酸酶的多核苷酸的载体,包含编码核酸酶的多核苷酸的细胞和/或包含核酸酶的细胞。

技术研发人员:A·康韦;S·贾殷;G·K·李;A·雷克;L·N·特鲁翁
受保护的技术使用者:桑格摩生物治疗股份有限公司
技术研发日:2018.08.08
技术公布日:2020.05.22
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