1.一种分离的遗传修饰的t细胞,其包含:编码嵌合抗原受体(car)的第一多核苷酸和包含编码融合蛋白的序列的第二多核苷酸,所述融合蛋白包含β-2-微球蛋白(b2m)蛋白和hla-e和/或hla-g蛋白,其中所述第一和第二多核苷酸被整合到t细胞受体中-α(tcra)基因中。
2.如权利要求1所述的遗传修饰的t细胞,其中,内源性b2m基因在所述t细胞中失活。
3.如权利要求1或2所述的遗传修饰的t细胞,其中,免疫检查点基因在所述t细胞中失活。
4.如权利要求1-3中任一项所述的遗传修饰的t细胞,其中,所述第一和第二多核苷酸通过自切割p2a肽连接。
5.如权利要求1-4中任一项所述的遗传修饰的t细胞,其中,所述第二多核苷酸还包含编码所述b2m和hla-e-或hla-g-编码序列之间的接头的序列。
6.如权利要求4所述的遗传修饰的t细胞,其中,所述接头包含1、2、3、4、5或6个拷贝的g4s。
7.一种制备权利要求1-6中任一项所述的遗传修饰的t细胞的方法,所述方法包括:
使用核酸酶切割分离的t细胞中的tcr-α基因,所述核酸酶包含结合所述tcr-α基因中靶位点的dna结合结构域;和
将包含第一和第二多核苷酸的一种或多种供体引入所述t细胞,从而使所述第一和第二多核苷酸整合到被切割的tcr-α基因中。
8.如权利要求7所述的方法,其中,所述供体还包含tcr-α基因的同源臂,所述同源臂侧接所述第一和第二多核苷酸。
9.如权利要求7或8所述的方法,其中,所述供体还包含驱动所述第一和/或第二多核苷酸表达的启动子。
10.如权利要求7-9中任一项所述的方法,其中,所述供体还包含tcr-α增强子序列。
11.如权利要求7-10中任一项所述的方法,其中,所述供体还包含3'非翻译区(3’utr)和5'非翻译区(5’utr)。
12.如权利要求11所述的方法,其中,所述3’utr还包含wpre序列。
13.如权利要求11或12所述的方法,其中,所述5’utr还包含来自非洲爪蟾蜍β球蛋白基因的序列。