1.一种用于自动产生基因修饰的免疫细胞培养物的方法,所述方法包括:
(a)用活化剂活化免疫细胞培养物以产生活化的免疫细胞培养物;
(b)用载体转导活化的免疫细胞培养物,以产生转导的免疫细胞培养物;
(c)扩增转导的免疫细胞培养物;
(d)浓缩(c)中的扩增的免疫细胞培养物;和
(e)收获(d)中的浓缩免疫细胞培养物以产生基因修饰的免疫细胞培养物,
还包括洗涤扩增的免疫细胞培养物和浓缩的免疫细胞培养物之一或两者,
其中(a)至(e)由完全封闭的细胞工程系统进行,并且(a)至(e)通过产生基因修饰的免疫细胞培养物的过程进行优化。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述过程是自我调节过程,并且包括:
(a)用温度传感器、ph传感器、葡萄糖传感器、氧气传感器、二氧化碳传感器和光密度传感器中的一者或多者进行监测;和
(b)基于所述监测,调节转导的t细胞培养物的温度、ph值水平、葡萄糖水平、氧气水平、二氧化碳水平和光密度中的一者或多者。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法,其中所述方法产生至少约1亿个存活的基因修饰的免疫细胞。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述方法产生至少约20亿个存活的基因修饰的免疫细胞。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物是t细胞培养物。
6.根据权利要求5所述的方法,其中t细胞培养物是嵌合抗原受体t(cart)细胞培养物。
7.根据权利要求6所述的方法,其中所述载体对嵌合抗原受体进行编码。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物包括外周血单核细胞和/或纯化的t细胞。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物包含至少一个佐细胞。
10.根据权利要求9所述的方法,其中所述佐细胞包括单核细胞或单核细胞衍生的细胞。
11.根据权利要求9所述的方法,其中所述佐细胞包含t细胞受体的抗原,包括cd28、cd40、cd2、cd40l和/或icos。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法,其中,所述活化剂包括抗体或树突细胞。
13.根据权利要求12所述的方法,其中所述抗体被固定在表面上。
14.根据权利要求13所述的方法,其中,所述表面是珠的表面。
15.根据权利要求12所述的方法,其中所述抗体是可溶性抗体。
16.根据权利要求12-15中任一项所述的方法,其中所述抗体包含抗cd3抗体和抗cd28抗体中的至少一种。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法,其中所述转导包括病毒感染、电穿孔、膜破坏或其组合。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法,其中所述载体是慢病毒载体或逆转录病毒。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法,其中所述转导包括将所述载体在细胞培养基中混合并将所述培养基中的所述载体均匀地递送至所述活化的免疫细胞培养物。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法,其中,所述扩增包括饲喂、洗涤和监测所转导的免疫细胞培养物中的至少一种或多种。
21.根据权利要求2-20中任一项所述的方法,其中针对所述免疫细胞培养物,优化转导的免疫细胞培养物中的氧水平。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在步骤(a)至(e)中的一个或多个期间,通过氧合组分再循环细胞培养基。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在步骤(a)至(e)期间再循环营养物、废物、释放的细胞因子和/或溶解的气体。
24.根据权利要求2-23中任一项所述的方法,其中由所述细胞工程系统提供的二氧化碳水平在步骤(c)期间降低。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法,其中,所述细胞工程系统配置为执行几轮转导免疫细胞培养物的饲喂、洗涤、监测和选择中的一个或多个。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法,其中所述浓缩包括离心、沉降之后去除上清液或过滤。
27.根据权利要求26所述的方法,其中,所述过程还包括调整所述离心或过滤的参数。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统包括多个室,并且其中步骤(a)至(e)中的每个步骤在所述细胞工程系统的所述多个室中的不同室中进行。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法,其进一步包括在步骤(a)之后从所述活化的免疫细胞培养物中除去所述活化剂。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在开始所述方法之前包含(a)的细胞培养物、所述活化剂、所述载体和细胞培养基。
31.一种用于促进基因修饰的免疫细胞培养物的优选表型的方法,所述方法包括:
(a)用活化剂活化免疫细胞培养物以产生活化的免疫细胞培养物,其中所述活化剂和活化条件促进基因修饰的免疫细胞培养物的表型;
(b)用载体转导活化的免疫细胞培养物,以产生转导的免疫细胞培养物;
(c)扩增转导的免疫细胞培养物;
(d)浓缩(c)中的扩增的免疫细胞培养物;和
(e)收获(d)中的浓缩免疫细胞培养物以产生基因修饰的的免疫细胞培养物,
其中(a)至(e)由完全封闭的自动化细胞工程系统进行。
32.根据权利要求31中的一项所述的方法,其中,所述活化剂包括抗体或树突细胞。
33.根据权利要求32所述的方法,其中所述抗体被固定在表面上。
34.根据权利要求33所述的方法,其中,所述表面是珠的表面。
35.根据权利要求32所述的方法,其中所述抗体是可溶性抗体。
36.根据权利要求32-35中任一项所述的方法,其中所述抗体包括抗cd3抗体、抗cd28抗体和抗cd2抗体中的至少一种。
37.根据权利要求36所述的方法,其中所述可溶性抗体是okt3。
38.根据权利要求31-37中任一项所述的方法,其中活化条件提供了基本上不受干扰的免疫细胞培养物,从而允许所述活化剂与所述免疫细胞培养物之间的稳定接触。
39.根据权利要求31-38中任一项所述的方法,其中所述方法产生至少约1亿个存活的基因修饰的免疫细胞。
40.根据权利要求39所述的方法,其中所述方法产生至少约20亿个存活的基因修饰的免疫细胞。
41.根据权利要求31-40中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物是t细胞培养物。
42.根据权利要求41所述的方法,其中,t细胞培养物是嵌合抗原受体t(cart)细胞培养物。
43.根据权利要求42所述的方法,其中,所述载体编码嵌合抗原受体。
44.根据权利要求31-43中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物包括外周血单核细胞和/或纯化的t细胞。
45.根据权利要求31-44中任一项所述的方法,其中所述细胞培养物包含至少一个佐细胞。
46.根据权利要求45所述的方法,其中所述佐细胞包括单核细胞或单核细胞衍生的细胞。
47.根据权利要求45所述的方法,其中所述佐细胞包含t细胞受体的抗原,包括cd28、cd40、cd2、cd40l和/或icos。
48.根据权利要求41-47中任一项所述的方法,其中所述t细胞培养物的表型具有的cd8+细胞与cd4+的比率为约0.1∶1至约10∶1。
49.根据权利要求31-48中任一项所述的方法,其中所述转导包括病毒感染、电穿孔、膜破坏或其组合。
50.根据权利要求31-49中任一项所述的方法,其中所述载体是慢病毒载体或逆转录病毒。
51.根据权利要求31-50中任一项所述的方法,其中所述转导包括将所述载体在细胞培养基中混合并将所述培养基中的所述载体均匀地递送至所述活化的免疫细胞培养物。
52.根据权利要求31-51中任一项所述的方法,其中所述扩增包括饲喂,洗涤和监测所转导的免疫细胞培养物中的至少一种或多种。
53.根据权利要求31-52中任一项所述的方法,其中针对所述促进的表型优化所述转导的免疫细胞培养物的氧水平。
54.根据权利要求31-53中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在步骤(a)至(e)中的一个或多个期间,通过氧合组分再循环细胞培养基。
55.根据权利要求31-54中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在步骤(a)至(e)期间再循环营养物、废物、释放的细胞因子和/或溶解的气体。
56.根据权利要求31-55中任一项所述的方法,其中由所述细胞工程系统提供的二氧化碳水平在步骤(c)期间降低。
57.根据权利要求31-56中任一项所述的方法,其中,所述细胞工程系统被配置为执行几轮的饲喂、洗涤、监测和选择所述转导的免疫细胞培养物。
58.根据权利要求31-57中任一项所述的方法,其中所述浓缩包括离心、沉降后去除上清液或过滤。
59.根据权利要求31-58中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统包括多个室,并且其中步骤(a)至(e)中的每个步骤在所述细胞工程系统的所述多个室中的不同室中进行。
60.根据权利要求31-59中任一项所述的方法,其进一步包括在步骤(a)之后从所述活化的免疫细胞培养物中除去所述活化剂。
61.根据权利要求31-60中任一项所述的方法,其进一步包括在(b)中的转导之后去除所述载体。
62.根据权利要求31-61中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在开始所述方法之前包含(a)的细胞培养物、所述活化剂、所述载体和细胞培养基。
63.一种用于自动生产基因修饰的免疫细胞培养物的方法,该方法包括:
(a)用活化剂活化免疫细胞培养物以产生活化的免疫细胞培养物;
(b)用载体转导活化的免疫细胞培养物,以产生转导的免疫细胞培养物;
(c)扩增转导的免疫细胞培养物;
(d)浓缩(c)中的扩增的免疫细胞培养物;和
(e)收获(d)中的浓缩免疫细胞培养物以产生基因修饰的的免疫细胞培养物,
其中(a)至(e)由完全封闭的自动化细胞工程系统执行,和
其中(a)至(e)中的每一个都是用具有优化的细胞密度(细胞/ml)和优化的细胞融合度(细胞/cm2)的免疫细胞培养物进行的。
64.根据权利要求63所述的方法,其中(a)的最优化细胞密度为约0.05×106个细胞/ml至约60×106个细胞/ml。
65.根据权利要求63或权利要求64所述的方法,其中对于(a),所述优化的细胞融合度为约0.1×106个细胞/cm2至约60×106个细胞/cm2。
66.根据权利要求63-65中任一项所述的方法,其中所述活化剂包括抗体或树突细胞。
67.根据权利要求66所述的方法,其中所述抗体被固定在表面上。
68.根据权利要求67所述的方法,其中,所述表面是珠的表面。
69.根据权利要求66所述的方法,其中所述抗体是可溶性抗体。
70.根据权利要求66-69中任一项所述的方法,其中所述抗体包含抗cd3抗体和抗cd28抗体中的至少一种。
71.根据权利要求63-70中任一项所述的方法,其中所述方法产生至少约1亿个存活的遗传修饰的免疫细胞。
72.根据权利要求63-71中任一项所述的方法,其中所述方法产生至少约20亿个存活的遗传修饰的免疫细胞。
73.根据权利要求63-72中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物是t细胞培养物。
74.根据权利要求73所述的方法,其中t细胞培养物是嵌合抗原受体t(cart)细胞培养物。
75.根据权利要求74所述的方法,其中所述载体编码嵌合抗原受体。
76.根据权利要求64-75中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物包括外周血单核细胞和/或纯化的t细胞。
77.根据权利要求64-76中任一项所述的方法,其中所述细胞培养物包含至少一个佐细胞。
78.根据权利要求77所述的方法,其中所述佐细胞包括单核细胞。
79.根据权利要求77所述的方法,其中所述佐细胞包含t细胞受体的抗原,包括cd28、cd40、cd2、cd40l和/或icos。
80.根据权利要求63-79中任一项所述的方法,其中,所述转导包括病毒感染、电穿孔、膜破坏或其组合。
81.根据权利要求63-80中任一项所述的方法,其中所述载体是慢病毒载体或逆转录病毒。
82.根据权利要求63-81中任一项所述的方法,其中,所述转导包括将所述载体在细胞培养基中混合并将所述培养基中的所述载体均匀地递送至所述活化的免疫细胞培养物。
83.根据权利要求63-82中任一项所述的方法,其中所述扩增包括饲喂、洗涤、监测和选择所述转导的免疫细胞培养物中的至少一种或多种。
84.根据权利要求63-83中任一项所述的方法,其中针对细胞密度和细胞融合度优化转导的免疫细胞培养物的氧水平。
85.根据权利要求63-84中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在步骤(a)至(e)中的一个或多个期间,通过氧合组分再循环细胞培养基。
86.根据权利要求85所述的方法,其中在步骤(a)至(c)期间,通过硅树脂管提供氧气再循环。
87.根据权利要求63-86中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在步骤(a)至(e)期间再循环营养物、废物、释放的细胞因子和/或溶解的气体。
88.根据权利要求63-87中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统提供的二氧化碳水平在步骤(c)中降低。
89.根据权利要求63-88中任一项所述的方法,其中,营养物、废物、释放的细胞因子的再循环,和/或溶解的气体被均匀地提供有密度为约0.05×106个细胞/ml至约60×106个细胞/ml和约0.1×106个细胞/cm2至约60×106个细胞/cm2的细胞。
90.根据权利要求63-89中任一项所述的方法,其中,所述细胞工程系统配置为执行几轮的饲喂、洗涤、监测和选择所述转导的免疫细胞培养物。
91.根据权利要求63-90中任一项所述的方法,其中所述浓缩包括离心、沉降后去除上清液或过滤。
92.根据权利要求63-91中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统包括多个室,并且其中步骤(a)至(e)中的每个步骤在所述细胞工程系统的所述多个室中的不同室中进行。
93.根据权利要求63-92中任一项所述的方法,其进一步包括在步骤(a)之后从所述活化的免疫细胞培养物中去除所述活化剂。
94.根据权利要求63-93中任一项所述的方法,其进一步包括在(b)中的转导之后去除所述载体。
95.根据权利要求63-94中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在开始所述方法之前包含(a)的细胞培养物、所述活化剂、所述载体和细胞培养基。
96.一种用于自动产生基因修饰的免疫细胞培养物的方法,所述方法包括:
(a)用活化剂活化免疫细胞培养物以产生活化的免疫细胞培养物;
(b)用载体转导活化的免疫细胞培养物,以产生转导的免疫细胞培养物;
(c)扩增转导的免疫细胞培养物,其中在扩增过程中不摇动转导的细胞培养物;
(d)浓缩(c)中的扩增的免疫细胞培养物;和
(e)收获(d)中的浓缩免疫细胞培养物以产生基因修饰的的免疫细胞培养物,
其中(a)至(e)由完全封闭的自动化细胞工程系统进行。
97.根据权利要求96所述的方法,其中所述活化剂包括抗体或树突细胞。
98.根据权利要求97所述的方法,其中所述抗体固定在表面上。
99.根据权利要求98所述的方法,其中,所述表面是珠的表面。
100.根据权利要求97所述的方法,其中所述抗体是可溶性抗体。
101.根据权利要求96-100中任一项所述的方法,其中所述抗体包括抗cd3抗体、抗cd28抗体和抗cd2抗体中的至少一种。
102.根据权利要求96-101中任一项所述的方法,其中所述方法产生至少约1亿个存活的基因修饰的免疫细胞。
103.根据权利要求102所述的方法,其中所述方法产生至少约20亿个存活的基因修饰的免疫细胞。
104.根据权利要求96-103中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物是t细胞培养物。
105.根据权利要求104所述的方法,其中,t细胞培养物是嵌合抗原受体t(cart)细胞培养物。
106.根据权利要求105所述的方法,其中所述载体编码嵌合抗原受体。
107.根据权利要求96-106中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物包括外周血单核细胞和/或纯化的t细胞。
108.根据权利要求96-107中任一项所述的方法,其中所述细胞培养物包括至少一个佐细胞。
109.根据权利要求108所述的方法,其中所述佐细胞包括单核细胞或单核细胞衍生的细胞。
110.根据权利要求109所述的方法,其中所述佐细胞包含用于t细胞受体的抗原,包括cd28、cd40、cd2、cd40l和/或icos。
111.根据权利要求96-110中任一项所述的方法,其中所述转导包括病毒感染、电穿孔、膜破坏或其组合。
112.根据权利要求96-111中任一项所述的方法,其中所述载体是慢病毒载体或逆转录病毒。
113.根据权利要求96-112中任一项所述的方法,其中所述转导包括将所述载体在细胞培养基中混合并将所述培养基中的所述载体均匀地递送至所述活化的免疫细胞培养物。
114.根据权利要求96-113中任一项所述的方法,其中所述扩增包括在不摇动免疫细胞培养物的情况下饲喂、洗涤、监测和选择转导的免疫细胞培养物中的至少一种或多种。
115.权利要求96-114中任一项所述的方法,其中针对所述免疫细胞培养优化转导的免疫细胞培养物的氧水平。
116.根据权利要求96-115中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在步骤(a)至(e)中的一个或多个期间,通过氧合组分再循环细胞培养基。
117.根据权利要求96-116中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统再循环营养物、废物、释放的细胞因子和/或溶解的气体。
118.根据权利要求96-117中任一项所述的方法,其中由所述细胞工程系统提供的二氧化碳水平在步骤(c)期间降低。
119.根据权利要求96-118中任一项所述的方法,其中,所述细胞工程系统被配置为执行几轮的饲喂、洗涤、监测和选择所述转导的免疫细胞培养物。
120.根据权利要求96-119中任一项所述的方法,其中所述浓缩包括离心、沉降后去除上清液或过滤。
121.根据权利要求96-120中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统包括多个室,并且其中步骤(a)至(e)中的每个步骤在所述细胞工程系统的所述多个室中的不同室中进行。
122.根据权利要求96-121中任一项所述的方法,其进一步包括在步骤(a)之后从所述活化的免疫细胞培养物中除去所述活化剂。
123.根据权利要求96-122中任一项所述的方法,其进一步包括在(b)中的转导之后去除所述载体。
124.根据权利要求96-123中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在开始所述方法之前包含(a)的细胞培养物、所述活化剂、所述载体和细胞培养基。
125.一种用于自动产生基因修饰的免疫细胞培养物的方法,该方法由细胞工程系统执行,包括:
(a)用活化剂活化免疫细胞培养物以在细胞工程系统的第一室中产生活化的免疫细胞培养物;
(b)转导活化的免疫细胞培养物,所述转导包括:
i.将活化的免疫细胞培养物从第一室转移至电穿孔单元;
ii.用载体电穿孔活化的免疫细胞培养物,以产生转导的免疫细胞培养物;
iii.将转导的免疫细胞培养物转移至细胞工程系统的第二室;
(c)扩增转导的免疫细胞培养物;
(d)浓缩(c)中的扩增的免疫细胞培养物;和
(e)收获(d)中的浓缩的免疫细胞培养物以产生基因修饰的的细胞培养物。
126.根据权利要求125所述的方法,其中,所述转导包括:
i.通过第一无菌、闭合连接将活化的免疫细胞培养物从第一室转移至电穿孔单元;
ii.用载体电穿孔活化的免疫细胞培养物,以产生转导的免疫细胞培养物;
iii.通过第二个无菌的,封闭的连接将转导的免疫细胞培养物转移到细胞工程系统的第二个室。
127.根据权利要求126所述的方法,其中所述电穿孔单元位于所述细胞工程系统的外部。
128.根据权利要求125-127中任一项所述的方法,其中所述方法产生至少约1亿个存活的基因修饰的免疫细胞。
129.根据权利要求128所述的方法,其中所述方法产生至少约20亿个存活的基因修饰的免疫细胞。
130.根据权利要求125-129中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物是t细胞培养物。
131.根据权利要求130所述的方法,其中t细胞培养物是嵌合抗原受体t(cart)细胞培养物。
132.根据权利要求131所述的方法,其中所述载体编码嵌合抗原受体。
133.根据权利要求125-132中任一项所述的方法,其中所述免疫细胞培养物包括外周血单核细胞和/或纯化的t细胞。
134.根据权利要求125-132中任一项所述的方法,其中所述细胞培养物包括至少一个佐细胞。
135.根据权利要求134所述的方法,其中所述佐细胞包括单核细胞或单核细胞衍生的细胞。
136.根据权利要求134所述的方法,其中所述佐细胞包含t细胞受体的抗原,包括cd28、cd40、cd40l和/或icos。
137.根据权利要求125-136中任一项所述的方法,其中所述活化剂包括抗体或树突细胞。
138.根据权利要求137所述的方法,其中所述抗体被固定在表面上。
139.根据权利要求138所述的方法,其中所述表面是珠的表面。
140.根据权利要求137所述的方法,其中所述抗体是可溶性抗体。
141.根据权利要求138-140中任一项所述的方法,其中所述抗体包含抗cd3抗体、抗cd28抗体和抗cd2抗体中的至少一种。
142.根据权利要求125-141中任一项所述的方法,其中所述载体是慢病毒载体或逆转录病毒。
143.根据权利要求125-142中任一项所述的方法,其中所述扩增包括饲喂、洗涤、监测和选择所述转导的免疫细胞培养物中的至少一种或多种。
144.根据权利要求125-143中任一项所述的方法,其中针对所述免疫细胞培养优化转导的免疫细胞培养物的氧水平。
145.根据权利要求125-144中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在步骤(a)至(e)中的一个或多个期间,通过氧合组分再循环细胞培养基。
146.根据权利要求125-145中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统在步骤(a)至(e)期间再循环营养物、废物、释放的细胞因子和/或溶解的气体。
147.根据权利要求125-146中任一项所述的方法,其中由所述细胞工程系统提供的二氧化碳水平在步骤(c)期间降低。
148.根据权利要求125-147中任一项所述的方法,其中,所述细胞工程系统被配置为执行几轮的饲喂、洗涤、监测和选择所述转导的免疫细胞培养物。
149.根据权利要求125-148中任一项所述的方法,其中所述浓缩包括离心、沉降后去除上清液或过滤。
150.根据权利要求125-149中任一项所述的方法,其中所述细胞工程系统包括多个室,并且其中步骤(a)至(e)中的每个步骤在所述细胞工程系统的所述多个室中的不同室中进行。
151.根据权利要求125-150中任一项所述的方法,其还包括在步骤(a)之后从活化的免疫细胞培养物中除去活化剂。
152.根据权利要求125-151中任一项所述的方法,进一步包括在(b)中的转导之后去除所述载体。
153.根据权利要求125-152中任一项所述的方法,其中在开始所述方法之前,所述细胞工程系统包含(a)的细胞培养物、所述活化剂、所述载体和细胞培养基。
154.根据权利要求1-153中任一项所述的方法,其中,所述方法的步骤(c)中的转导效率比利用柔性、透气袋进行细胞培养的所述方法的转导效率高至少20%。
155.根据权利要求1-154中任一项所述的方法,其中所述方法产生的基因修饰的免疫细胞比利用带有柔性、透气袋的人工细胞培养的方法多出至少20%。
156.根据权利要求1-155中任一项所述的方法,其中细胞工程系统包括多个室,并且其中步骤(a)至(e)中的每个步骤均在细胞工程系统的多个室中的不同室中进行,其中每个(a)、活化试剂、载体,在开始该方法之前,将细胞培养基和细胞培养基包含在多个室的另一个室中,并且其中多个室中的至少一个保持在用于细胞生长的温度,并且多个室中的至少一个保持在冷藏温度。
157.一种用于自动细胞工程系统的盒,包括:
(a)低温室,用于储存细胞培养基;
(b)进行免疫细胞培养的活化、转导和扩增的高温室,
其中高温室通过热障与低温室隔开,
高温室包括细胞培养室;和
(c)连接至细胞培养室的一个或多个流体通道,其中所述流体通道提供再循环、废物的去除和均质气体交换以及营养物向细胞培养室的分布,而不会干扰细胞培养室内的细胞。
158.根据权利要求157所述的盒,其中所述细胞培养室是平坦的且非柔性的室,具有低的室高度。
159.根据权利要求157或权利要求158所述的盒,其中,所述细胞培养室被定向成允许所述免疫细胞培养物跨所述细胞培养室的底部扩散。
160.根据权利要求157-159中任一项所述的盒,其中,所述盒预先填充有细胞培养物、培养基、活化剂和载体。
161.根据权利要求157-160中任一项所述的盒,其特征在于,还包括ph传感器、葡萄糖传感器、氧传感器、二氧化碳传感器和/或光密度传感器中的一个或多个。
162.根据权利要求157-161中任一项所述的盒,其特征在于,还包括一个或多个采样端口和/或注入端口。
163.根据权利要求157-162中任一项所述的盒,其中,所述细胞培养室还包括以下至少之一:
远端端口,其构造成允许从细胞培养室和/或作为再循环端口去除气泡;
中间端口,其构造成用作再循环入口端口;和
近端端口,其配置为用作细胞去除的排放端口。
164.根据权利要求157-163中任一项所述的盒,其特征在于,还包括用于将所述盒连接到外部设备的进入端口。
165.根据权利要求164所述的盒,其中,所述外部设备包括电穿孔单元或附加介质源。
166.一种用于自动细胞工程系统的盒,包括:
(a)用于进行免疫细胞培养物的活化、转导和/或扩增的细胞培养室,其具有用于容纳免疫细胞培养物的室体积,
(b)卫星容积,通过在不容纳免疫细胞培养物的情况下为培养基和其他工作流体提供额外的容积来增加室的工作容积,
其中,卫星容积通过一个或多个流体通路与细胞培养室流体连接,使得培养基与培养室交换而不会干扰免疫细胞培养。
167.根据权利要求166所述的盒,其中,所述卫星容积是袋。
168.根据权利要求166所述的盒,其中,所述卫星容积是非屈服室。
169.根据权利要求166-168中任一项所述的盒,其中,所述卫星容积还被配置为允许去除培养基而不损失免疫细胞培养物的细胞。
170.根据权利要求166-169中任一项所述的盒,其特征在于,还包括错流储存器。
171.根据权利要求166-170中任一项所述的盒,其中,所述细胞培养室的体积在约0.50ml至约300ml之间。
172.根据权利要求171所述的盒,其中,所述细胞培养室的体积在约50ml至约200ml之间。
173.根据权利要求172所述的盒,其中所述细胞培养室具有约180ml的体积。
174.根据权利要求166-173中任一项所述的盒,其中,所述卫星容积在约.50ml至约300ml之间。
175.根据权利要求174所述的盒,其中,所述卫星容积在约150ml至约200ml之间。
176.根据权利要求166-175中任一项所述的盒,其中,所述错流储存器的体积在约.50ml至约300ml之间。
177.根据权利要求176所述的盒,其中,所述错流储存器的体积在约100ml至约150ml之间。
178.根据权利要求166-177中任一项所述的盒,其中,所述工作容积为约180ml至约1l。
179.根据权利要求178所述的盒,其中,所述工作容积为约180ml至约460ml。
180.根据权利要求157-179中任一项所述的盒,其中,一个或多个流体通路包括硅基管部件,所述硅基管部件允许通过管部件的充氧。