核酸释放剂、核酸PCR扩增方法和PCR扩增试剂盒与流程

文档序号:16987632发布日期:2019-03-02 00:43阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种核酸释放剂,其特征在于,包括tris-hcl、氯化钠、氯化钾、吐温20、曲拉通x-100、乙基苯基聚乙二醇和强碱;其中,tris-hcl的摩尔浓度为0.5mm~500mm,氯化钠的摩尔浓度为20mm~500mm,氯化钾的质量浓度为5mg/ml~8mg/ml,吐温20的体积百分比为0.1%~2%,曲拉通x-100的体积百分比为0.1%~3%,乙基苯基聚乙二醇的体积百分比为0.1%~3%,强碱的质量浓度为2mg/ml~50mg/ml。

2.根据权利要求1所述的核酸释放剂,其特征在于,还包括甜菜碱和牛血清白蛋白,且在所述核酸释放剂中,所述甜菜碱的质量浓度为0.1mg/ml~20mg/ml,所述牛血清白蛋白的质量浓度为5mg/ml~100mg/ml。

3.根据权利要求1所述的核酸释放剂,其特征在于,还包括蛋白酶k和十二烷基硫酸锂,且在所述核酸释放剂中,所述蛋白酶k的质量浓度为0.02mg/ml~1.5mg/ml,所述十二烷基硫酸锂的质量浓度为0.4mg/ml~30mg/ml。

4.一种核酸pcr扩增方法,其特征在于,包括以下步骤:将权利要求1~3任一项所述的核酸释放剂与样品混合,于25℃~60℃放置2min~10min,然后加入pcr反应液进行pcr扩增。

5.根据权利要求4所述的核酸pcr扩增方法,其特征在于,在将所述核酸释放剂与样品混合之前,还包括样品的预处理步骤:将样品与聚乙二醇混合,然后离心取沉淀。

6.根据权利要求4所述的核酸pcr扩增方法,其特征在于,对所述样品中的肠道病毒进行pcr扩增的条件为:

逆转录反应:48℃~52℃反应28min~32min;

热变性反应:93℃~97℃反应0.9min~1.1min;

扩增反应:93℃~97℃反应13s~17s,53℃~57℃反应28s~32s,若干个循环;

冷却:23℃~27℃反应8s~12s。

7.根据权利要求4所述的核酸pcr扩增方法,其特征在于,对所述样品中的丙型肝炎病毒进行pcr扩增的条件为:

预变性和酶激活:93℃~97℃反应0.9min~1.1min;

逆转录反应:58℃~62℃反应28min~32min;

热变性反应:93℃~97℃反应0.9min~1.1min;

扩增反应:93℃~97℃反应13s~17s,58℃~62℃反应28s~32s,若干个循环;

冷却:23℃~27℃反应8s~12s。

8.根据权利要求4所述的核酸pcr扩增方法,其特征在于,对所述样品中的呼吸道病毒进行pcr扩增的条件为:

逆转录反应:48℃~52℃反应28min~32min;

热变性反应:93℃~97℃反应0.9min~1.1min;

扩增反应:93℃~97℃反应13s~17s,58℃~62℃反应28s~32s,若干个循环;

冷却:23℃~27℃反应8s~12s。

9.根据权利要求4所述的核酸pcr扩增方法,其特征在于,对所述样品中的呼吸道细菌进行pcr扩增的条件为:

udg酶反应:48℃~52℃反应1.9min~2.1min;

热变性反应:92℃~96℃反应2.9min~3.1min;

扩增反应:92℃~96℃反应8s~12s,58℃~62℃反应18s~22s,若干个循环;

延伸及荧光采集:73℃~77℃反应18s~22s;

溶解曲线:62℃~75℃。

10.一种pcr扩增试剂盒,其特征在于,包括权利要求1~3任一项所述的核酸释放剂和pcr反应液。


技术总结
本发明涉及一种核酸释放剂、核酸PCR扩增方法和PCR扩增试剂盒,包括Tris-HCl、氯化钠、氯化钾、吐温20、曲拉通X-100、乙基苯基聚乙二醇和强碱;其中,Tris-HCl的摩尔浓度为0.5mM~500mM,氯化钠的摩尔浓度为20mM~500mM,吐温20的体积百分比为0.1%~2%,曲拉通X-100的体积百分比为0.1%~3%,乙基苯基聚乙二醇的体积百分比为0.1%~3%,氯化钾的质量浓度为5mg/mL~8mg/mL,强碱的质量浓度为2mg/mL~50mg/mL。该核酸释放剂可以使含有RNA的样品在室温下直接释放出RNA,且能够与PCR反应液直接混合进行PCR扩增,无需进行复杂的核酸提取和纯化过程即可完成扩增。

技术研发人员:纪博知;张文曲;邓中平;戴立忠
受保护的技术使用者:湖南圣湘生物科技有限公司
技术研发日:2019.01.08
技术公布日:2019.11.26
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