本发明属于化学医药领域，具体涉及三唑己酮联芳(杂)环衍生物及其制备方法和用途。
背景技术：
小分子靶向抗肿瘤药物由于疗效明确，安全性高，可以实现针对肿瘤患者的精准治疗，因此已经成为近年肿瘤药物研发的热点和趋势。
二氢乳清酸脱氢酶(dihydroorotatedehydrogenase,dhodh)存在于人类线粒体内膜，是一种含铁的黄素依赖酶。其在生物体内催化核酸中嘧啶核苷酸从头合成途径中的第4步反应，是嘧啶核苷酸合成的限速酶。嘧啶核苷酸为生物体内合成dna、rna、糖蛋白和磷脂所必需，其合成对细胞的增殖及新陈代谢至关重要。在肿瘤细胞中，嘧啶核苷酸需要量远远大于正常细胞需要量，其合成主要依靠从头合成途径。抑制dhodh可以阻断新生嘧啶核苷酸的合成,导致dna(含腺嘧啶和胞嘧啶)、rna(含尿嘧啶和胞嘧啶)、糖蛋白和磷脂等生物合成产生障碍，从而引起细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞的异常增殖。研究显示，dhodh在多种肿瘤中高表达，而且与临床肿瘤患者不良预后正相关，抑制dhodh表达可以抑制肿瘤增殖。因此，dhodh已经成为潜在的抗肿瘤治疗靶点，针对其进行特异性抑制剂的开发和研究具有重要的意义。
目前，针对dhodh小分子抑制剂包括布喹那(brequinar)，其具有一定抗肿瘤活性，分别于1986、1988和1990年进行了用于治疗肿瘤的i期临床试验,但其抗肿瘤活性有限，而且骨髓抑制等副作用较大，一直未被临床批准用于恶性肿瘤治疗。因此，研发高效低毒的dhodh抑制剂用于肿癌治疗具有特别重要的意义。
技术实现要素：
本发明提供了一种三唑己酮联芳(杂)环衍生物，其结构如式ⅰ所示
其中，x、y、z为c或n
r1～r4为-h、卤素、-oh、甲氧基，
r5～r9为-h、卤素、-oh、甲氧基、氨基、硝基、甲氧羰基、三氟甲氧基、三氟甲基、烷基
r10～r12为-h、卤素、-oh、甲氧基、烷烃、烯烃、炔烃。
根据权利要求1所述的三唑己酮联芳(杂)环衍生物，其特征在于：结构式如下所示：
所述的三唑己酮联芳(杂)环衍生物的制备方法，合成路线为
路线一：
r1～r4为-h、卤素、-oh、甲氧基，
r5～r9为-h、卤素、-oh、甲氧基、氨基、硝基、甲氧羰基、三氟甲氧基、三氟甲基、烷基。
r10～r12为-h、卤素、-oh、甲氧基、烷烃、烯烃、炔烃。
上述式ⅱ所示三唑己酮联芳(杂)环衍生物的制备操作步骤包括：
a、中间体1是在取原料1与不同取代的芳基硼酸催化下得到，所述的催化剂为[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯；所述的碱为碳酸铯、碳酸钾等中的任意一种；所述的反应温度为90℃～100℃；所述的原料1、硼酸、碱、配体的摩尔比为1︰1.3︰6︰0.1；所述反应时间为12h-24h；
b、中间体2是在中间体1重氮化后叠氮得到，所述操作，零下十五摄氏度反应条件下，将中间体1的四氢呋喃溶液滴入三氟化硼的乙醚溶液中，反应10-30min后，滴入叔丁醇异丁酯反应1-2h，加入叔丁醇异丁酯反应2h，观察有沉淀(深色油状液滴)出现，则将反应升温至零下5应并加入10ml正戊烷，再升温至25烷加入10ml正戊烷，得到固体或是深色油状液滴产物。将产物放入新的反应瓶中，加入叠氮钠和30ml乙腈溶液(乙腈:水＝3:1)，80:反应1-4h；
d、中间体3在原料1重氮化后叠氮得到，所述操作，零下十五度反应条件下，将原料1的四氢呋喃溶液滴入三氟化硼的乙醚溶液中，反应10-50min后，滴入叔丁醇异丁酯，反应1-4h后，加入叔丁醇异丁酯反应2h，观察有沉淀(深色油状液滴)出现，反应升温至零下5观并加入10ml正戊烷，再升温至25烷加入10ml正戊烷，取固体或是深色油状液滴与新的反应瓶中而后加入叠氮钠，加入30ml(乙腈:水＝3:1)，80:反应1-8h；
e、中间体4在中间体3不同取代的芳基硼酸催化下得到，所述的催化剂为[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯；所述的碱为碳酸铯、碳酸钾等中的任意一种；所述的反应温度为90化钯；所述的；所述的原料1、硼酸、碱、配体的摩尔比为1︰1.3︰6︰0.1；所述反应时间为12h-24h；
c、式2.1、2.2、2.3化合物是在，中间体2和原料2(中间体4原料2)碱化下得到，所述的反应温度为85化；所述的碱为1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(dbu)；所述的原料2：中间体2:dbu的摩尔比：1:1.3:0.2，所述的原料4：中间体2:dbu的摩尔比：1:1.3:0.2。反应时间为12h-24h；
具体实施方式
实施例1、3.5-二氟-(3’-甲氧基-[1,1'-联苯])-4-氨基(中间体1a)的制备
将4-溴-3.5-二氟-苯胺1g(4.81mmol)和间甲氧基苯硼酸730mg(4.81mmol.1eq)碳酸钾(4.82g24.88mmol6eq)[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(425.35mg481mmol6eq)置于100ml的两口瓶，注入30ml(二氧六环:水＝3:1)氮气保护，80保反应3.5h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝6：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约690mg，收率为61％.
1h-nmr(400mhz,cdcl3):8.02–7.94(m,4h),7.40–7.33(m,2h),5.27(s,2h),3.87(s,3h).(esi,正离子)m/z:236.20[m+h]+。
实施例2、3.5-二氟-(2-氟-[1,1'-联苯])-4-氨基(中间体1b)的制备
将4-溴-3.5-二氟-苯胺1g(4.81mmol)和邻氟苯硼酸730mg(4.81mmol.1eq)碳酸钾(4.82g24.88mmol6eq)[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(425.35mg481mmol6eq)置于100ml的两口瓶，注入30ml(二氧六环:水＝3:1)氮气保护，80保反应3.5h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝6：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约650mg，收率为60％.
1h-nmr(400mhz,cdcl3):8.02–7.94(m,4h),7.40–7.33(m,2h),5.27(s,2h).(esi,正离子)m/z:224.20[m+h]+。
实施例3、2,6-二氟-4’-异丙基-[1,1'-联苯]-4-苯胺(中间体1c)的制备
将4-溴-2.6-二氟-苯胺1g(4.81mmol)和对异丙基苯硼酸788mg(4.81mmol.1eq)碳酸钾(4.82g24.88mmol6eq)[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(425.35mg481mmol6eq)置于100ml的两口瓶，注入30ml(二氧六环:水＝3:1)氮气保护，80保反应3.5h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝6：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约690mg，收率为69％.
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.63–7.54(m,4h),7.38(d,j＝8.2hz,2h),5.27(s,2h),3.00(dt,j＝13.8,6.9hz,1h),1.32(d,j＝6.9hz,6h).(esi,正离子)m/z:248.20[m+h]+。
实施例4、(4'-氨基-2'，6,6'-三氟[1,1'-联苯]-3-基甲醇(中间体1d)的制备
将4-溴-2.6-二氟-苯胺1g(4.81mmol)和(5-(二甲基氨基)-2-氟苯基)硼酸820mg(4.81mmol.1eq)碳酸钾(4.82g24.88mmol6eq)[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(425.35mg481mmol6eq)置于100ml的两口瓶，注入30ml(二氧六环:水＝3:1)氮气保护，80保反应3.5h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝6：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约570mg，收率为49％.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.10–7.87(m,2h),7.55(d,j＝6.4hz,2h),7.43(t,j＝9.6hz,1h),5.36(t,j＝5.2hz,1h),4.58(d,j＝4.4hz,2h),3.66(s,2h).msm/z(esi):254.07[m+h]+.
实施例5、2'，6'-二氟-n3，n3-二甲基-[1,1'-联苯]-3,4'-二胺(中间体1e)的制备
将4-溴-2.6-二氟-苯胺1g(4.81mmol)和对异丙基苯硼酸740mg(4.81mmol.1eq)碳酸钾(4.82g24.88mmol6eq)[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(425.35mg481mmol6eq)置于100ml的两口瓶，注入30ml(二氧六环:水＝3:1)氮气保护，80保反应3.5h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝6：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约520mg，收率为47％.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.84(d,j＝7.6hz,2h),7.35(dd,j＝7.6,1.6hz,1h),6.86(d,j＝5.6hz,2h),6.81(d,j＝7.6hz,1h),3.66(s,2h),2.95(s,6h).msm/z(esi):249.11[m+h]+.
实施例6、3.5-二氟-(3-甲氧基-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2a)的制备
将300mg3.5-二氟-(3-甲氧基-[1,1'-联苯])-4-苯胺(中间体1a)上一步的产物溶于分析纯的四氢呋喃(10ml)中，缓慢滴入处于零下15处的含有((1.5ml)三氟化硼乙醚溶液的反应瓶中，反应5min后，在滴入0.9ml的叔丁醇异丁酯，反应2h，观察有沉淀析出，反应升温至零下5温并加入10ml正戊烷，再升温至25℃加入10ml正戊烷，再加入过滤取滤饼置于新的反应瓶中而后加入294mg叠氮钠，注入30ml(乙腈:水＝3:1)，80℃反应1h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约190mg，收率为57％.
1h-nmr(400mhz,cdcl3):8.02–7.94(m,4h),7.40–7.33(m,2h),3.87(s,3h).(esi,正离子)m/z:262.20[m+h]+。
实施例7、3.5-二氟-(2-氟-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2b)的制备
将300mg3.5-二氟-(2-氟-[1,1'-联苯])-4-苯胺(中间体1b)上一步的产物溶于分析纯的四氢呋喃(10ml)中，缓慢滴入处于零下15处的含有((1.5ml)三氟化硼乙醚溶液的反应瓶中，反应5min后，在滴入0.9ml的叔丁醇异丁酯，反应2h，观察有沉淀析出，反应升温至零下5温并加入10ml正戊烷，再升温至25℃加入10ml正戊烷，再加入过滤取滤饼置于新的反应瓶中而后加入294mg叠氮钠，注入30ml(乙腈:水＝3:1)，80℃反应1h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约210mg，收率为63％.
1h-nmr(400mhz,cdcl3):8.02–7.94(m,4h),7.40–7.33(m,2h),5.27(s,2h).(esi,正离子)m/z:250.10[m+h]+。
实施例8、4-叠氮基-2,6-二氟-4'-异丙基-1,1'-联苯(中间体2c)的制备
将300mg2,6-二氟-4’-异丙基-[1,1'-联苯]-4-苯胺(中间体1c)上一步的产物溶于分析纯的四氢呋喃(10ml)中，缓慢滴入处于零下15处的含有((1.5ml)三氟化硼乙醚溶液的反应瓶中，反应5min后，在滴入0.9ml的叔丁醇异丁酯，反应2h，观察有沉淀析出，反应升温至零下5温并加入10ml正戊烷，再升温至25℃加入10ml正戊烷，再加入过滤取滤饼置于新的反应瓶中而后加入294mg叠氮钠，注入30ml(乙腈:水＝3:1)，80℃反应1h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约150mg，收率为48％.
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.63–7.54(m,4h),7.38(d,j＝8.2hz,2h),3.00(dt,j＝13.8,6.9hz,1h),1.32(d,j＝6.9hz,6h).(esi,正离子)m/z:274.20[m+h]+
实施例9、(4'-叠氮基-2'，6,6'-三氟[1,1'-联苯]-3-基)甲醇(中间体2d)的制备
将300mg(4'-氨基-2'，6,6'-三氟[1,1'-联苯]-3-基甲醇(中间体1d)上一步的产物溶于分析纯的四氢呋喃(10ml)中，缓慢滴入处于零下15处的含有((1.5ml)三氟化硼乙醚溶液的反应瓶中，反应5min后，在滴入0.9ml的叔丁醇异丁酯，反应2h，观察有沉淀析出，反应升温至零下5温并加入10ml正戊烷，再升温至25℃加入10ml正戊烷，再加入过滤取滤饼置于新的反应瓶中而后加入294mg叠氮钠，注入30ml(乙腈:水＝3:1)，80℃反应1h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约120mg，收率为25％.
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.92–7.85(m,2h),7.59–7.50(m,2h),7.49–7.44(m,2h),5.34(t,j＝5.6hz,1h),4.60(d,j＝6.4hz,2h).msm/z(esi):236.08[m+h]+。
实施例10、4'-叠氮基-2'，6'-二氟-n，n-二甲基-[1,1'-联苯]-3-胺(中间体2e)的制备
将300mg2'，6'-二氟-n3，n3-二甲基-[1,1'-联苯]-3,4'-二胺(中间体1e)上一步的产物溶于分析纯的四氢呋喃(10ml)中，缓慢滴入处于零下15处的含有((1.5ml)三氟化硼乙醚溶液的反应瓶中，反应5min后，在滴入0.9ml的叔丁醇异丁酯，反应2h，观察有沉淀析出，反应升温至零下5温并加入10ml正戊烷，再升温至25℃加入10ml正戊烷，再加入过滤取滤饼置于新的反应瓶中而后加入294mg叠氮钠，注入30ml(乙腈:水＝3:1)，80℃反应1h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，得淡黄色油状液体约140mg，收率为46％.
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.84(d,j＝7.6hz,2h),7.35(dd,j＝7.6,1.6hz,1h),6.86(d,j＝5.6hz,2h),6.81(d,j＝7.6hz,1h),2.95(s,6h).msm/z(esi):275.11[m+h]+。
实施例11、1-(2,6-二氟-3'-甲氧基-[1,1'-联苯]-4-基)-6-异丙基-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][11,2,3]三唑-4-酮(3a)的制备
3.5-二氟-(3-甲氧基-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2a)100mg，5-异丙基-1,3-环己二酮)59mg加入4-6ml乙腈，与80℃反应12h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，所得化合物棕色固体52mg，收率为34％
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.42(d,j＝6.4hz,1h),7.36(t,j＝6.4hz,1h),7.31–7.14(m,4h),3.87(s,3h),3.09–2.98(m,1h),2.82(dd,j＝11.2,4.2hz,1h),2.69(d,j＝12.8hz,1h),2.48–2.38(m,1h),2.17(s,1h),1.77(dd,j＝6.4,6.4hz,1h),0.97(d,j＝6.8hz,6h).(esi,正离子)m/z:406.07[m+h]+。
实施例12、6-异丙基-1-(2,2'，6-三氟[1,1'-联苯]-4-基)-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][1,2，3]三唑-4-酮(3b)的制备
3.5-二氟-(2-氟-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2a)80mg，5-异丙基-1,3-环己二酮)50mg加入4-6ml乙腈，与80℃反应12h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，所得化合物棕色固体62mg，收率为50％.
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.42(d,j＝6.4hz,1h),7.36(t,j＝6.4hz,1h),7.31–7.14(m,5h),3.09–2.98(m,1h),2.82(dd,j＝11.2,4.2hz,1h),2.69(d,j＝12.8hz,1h),2.48–2.38(m,1h),2.17(s,1h),1.77(dd,j＝6.4,6.4hz,1h),0.97(d,j＝6.8hz,6h)。
实施例13、1-(2,6-二氟-4'-异丙基-[1,1'-联苯]-4-基)-6-异丙基-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][11,2,3]三唑-4-酮(3c)的制备
4-叠氮基-2,6-二氟-4'-异丙基-1,1'-联苯(中间体2a)88mg，5-异丙基-1,3-环己二酮)50mg加入4-6ml乙腈，与80℃反应12h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，所得化合物棕色固体41mg，收率为31％.
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.42(d,j＝6.4hz,1h),7.36(t,j＝6.4hz,1h),7.31–7.14(m,5h),3.09–2.98(m,1h),2.82(dd,j＝11.2,4.2hz,1h),2.69(d,j＝12.8hz,1h),2.48–2.38(m,1h),2.17(s,1h),3.00(dt,j＝13.8,6.9hz,1h),1.77(dd,j＝6.4,6.4hz,1h),1.32(d,j＝6.9hz,6h),0.97(d,j＝6.8hz,6h)。
实施例14、6-异丙基-1-(2,2'，6-三氟-5'-(羟甲基)-[1,1'-联苯]-4-基)-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-酮(3d)的制备
3.5-二氟-(3-甲氧基-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2a)90mg，5-异丙基-1,3-环己二酮)50mg加入4-6ml乙腈，与80℃反应12h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，所得化合物棕色固体55mg，收率为41.3％.
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.42(d,j＝6.4hz,1h),7.36(t,j＝6.4hz,1h),7.31–7.11(m,4h),5.34(t,j＝5.6hz,1h),4.60(d,j＝6.4hz,2h)，3.09–2.98(m,1h),2.82(dd,j＝11.2,4.2hz,1h),2.69(d,j＝12.8hz,1h),2.48–2.38(m,1h),2.17(s,1h),1.77(dd,j＝6.4,6.4hz,1h),0.97(d,j＝6.8hz,6h)。
实施例15、1-(5“-(二甲基氨基)-2,2”，6-三氟[1,1'-联苯]-4-基)-6-异丙基-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-酮(3e)的制备
3.5-二氟-(3-甲氧基-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2a)90mg，5-异丙基-1,3-环己二酮)50mg加入4-6ml乙腈，与80℃反应12h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，所得化合物棕色固体46mg，收率为34.5％.
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.42(d,j＝6.4hz,1h),7.36(t,j＝6.4hz,1h),7.31–7.14(m,5h),3.09–2.98(m,1h),2.95(s,6h),2.82(dd,j＝11.2,4.2hz,1h),2.69(d,j＝12.8hz,1h),2.48–2.38(m,1h),2.17(s,1h),1.77(dd,j＝6.4,6.4hz,1h),0.97(d,j＝6.8hz,6h)。
实施例16、1-(2,2'，6-三氟[1,1'-联苯]-4-基)-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][1,2,3]三唑--4-酮(4b)的制备
3.5-二氟-(2-氟-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2a)110mg，5-异丙基-1,3-环己二酮)59mg加入4-6ml乙腈，与80℃反应12h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，所得化合物棕色固体41mg，收率为22.4％.
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.53–7.46(m,1h),7.42(t,j＝7.2hz,1h),7.26(s,1h),7.26(s,5h),3.16(t,j＝6.1hz,2h),2.74–2.69(m,2h),2.37–2.28(m,2h)。
实施例17、6,6-二甲基-1-(2,2'，6-三氟[1,1'-联苯]-4-基)-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][11,2,3]三唑-4-酮(5b)的制备
3.5-二氟-(2-氟-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2a)90mg，5-异丙基-1,3-环己二酮)50mg加入4-6ml乙腈，与80℃反应12h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，所得化合物棕色固体67mg，收率为46％.
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.53–7.46(m,1h),7.42(t,j＝7.2hz,1h),7.34(d,j＝6.8hz,1h),7.32–7.21(m,1h),3.01(s,2h),2.58(s,2h),1.20(s,6h)。
实施例18、6-苯基-1-(2,2’，6-三氟-[1,1’-联苯]-4-基)-1,5,6,7-四氢-4h-苯并[d][1,2,3]三唑-4-酮(6b)的制备
3.5-二氟-(2-氟-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2a)90mg，5-苯基-1,3-环己二酮)60mg加入4-6ml乙腈，与80℃反应12h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，所得化合物棕色固体62mg，收率为36％.
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.51–7.19(m,11h),3.64(dd,j＝13.6,7.4hz,1h),3.36(d,j＝10.2hz,2h),3.13–2.87(m,2h)。
实施例19、4-氧代-1-(2,2’，6-三氟-[1,1’-联苯]-4-基)-4,5,6,7-四氢-1h-苯并[d][1,2,3]三唑-6-甲酸(7b)的制备
3.5-二氟-(2-氟-[1,1'-联苯])-4-叠氮基(中间体2a)90mg，5-羧基-1,3-环己二酮)55mg加入4-6ml乙腈，与80℃反应12h。tlc监察反应完毕后，后处理减压蒸馏至剩余约10ml，溶液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取2-3次，无水na2so4干燥，过滤，减压蒸馏旋干得黑色油状液滴，用石油醚:乙酸乙酯＝15：1硅胶柱层析分离纯化，所得化合物棕色固体63mg，收率为39％.
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.37(dd,j＝14.2,7.2hz,2h),7.23–7.12(m,2h),7.32–7.21(m,1h),3.01(s,2h),2.58(s,2h)。
实施例20、本发明三唑己酮联芳(杂)环衍生物的体外酶活性实验
体外酶活抑制分析采用上海睿智公司提供的测试服务完成。
1实验方法
将纯化后的hsdhodh蛋白用测活溶液(50mmol·l-1hepesph8.0,150mmol·l-1kcl,0.1％tritonx-100)稀释至10nmol·l-1,加入辅酶q及dcip至其终浓度分别为100及120μmol·l-1。混匀后用排枪以每孔199μl加入到96孔板中,之后置于室温下孵育5min,然后每孔加入1μl底物dho至其终浓度为500μmol·l-1。运用酶标仪读取600nm处吸光值,一共读取6min,每30s读取一次。计算酶促反应初速度v0,抑制剂活性测试则是在上述反应体系中加入不同浓度的抑制剂,计算酶促反应初速度vi,通过公式(1-vi/v0)×100％计算出化合物的抑制率。用软件graphpadprism7计算化合物的ic50值。该实验以brequinar为阳性对照,每次实验至少设置3个平行。
2实验结果
采用以上方法检测，1μm化合物对体外酶水平抑制结果，化合物对酶活抑制作用结果见表1
表1为本发明化合物的体外酶水平抑制结果
表1中的“nd”表示没有测定抑制作用。“rc”表示阳性对照化合物brequinar，从表7可以看出，本发明具有三唑己酮联芳(杂)环衍生物显示较好的dhodh活性抑制作用。特别是化合物3d、3e具有强效的dhodh抑制活性，其ic50值为171nm、39nm，有较好效果抑制活性类似。
实施例21体外肿瘤细胞增殖抑制实验
本实验目的是检测发明化合物对体外肿瘤细胞增殖抑制活性，采用的方法为mtt(四甲基偶氮唑盐)比色法。
1实验材料
1.1主要试剂
rpmi-1640、dmem高糖培养基、胎牛血清、胰酶等购自gibcobrl公司(invitrogencorporation，usa)。四甲基偶氮唑盐(mtt)、二甲基亚砜(dmso)为sigma公司(usa)产品。体外实验时，待测化合物用100％dmso配制成50mm储存液，置-20℃冰箱避光保存备用，临用时用完全培养液稀释至所需浓度。
1.2细胞系及培养
本实验所用人乳腺癌细胞株mcf-7，人结直肠癌细胞株hct116，人肝肿瘤细胞株hepg2，人肺癌细胞株a549，人黑色素癌细胞株a375均购于美国atcc公司，由本实验室保存。以上所有细胞株均用含10％胎牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素的rpmi-1640完全培养基或dmem完全培养基在5％co2、37℃条件下培养。
2实验方法
用完全细胞培养基把细胞浓度调整为4x104个/ml(48h的细胞浓度)，按0.1ml/孔接种于96孔板，培养过夜。次日，加入含有10μm浓度药物的培养基，每个浓度梯度设置3个复孔，并同时设置溶剂对照组和不含细胞的空白对照组，继续在37℃，5％co2条件下培养。培养48h后，每孔加入浓度为5mg/ml的mtt试剂20μl，再培养2～4h后，弃上清，每孔再加入dmso150μl，振荡混匀15min，用酶标仪(λ用酶标仪(λ0再加)波长570nm测定吸光度，取其平均值。相对细胞增殖抑制率＝(对照组a570-实验组a570/对照组a570×100％。实验数据用均数表示，化合物对细胞增殖抑制作用均用抑制率表示。
3.1实验结果
采用以上方法检测了化合物对mcf-7，hct116，a549，hepg2，a375增殖抑制活性，化合物对细胞增殖抑制作用结果见表2。
表2化合物在体外对多种人肿瘤细胞增殖抑制活性
表2中的“nd”表示没有测定抑制作用。
化合物体外对肿瘤细胞增殖抑制实验结果显示，与阳性化合物相比，合成的化合物3d、3c、5b对于人肺癌细胞有更高的抑制活性，而且，化合物4b对人结直肠癌细胞株、人黑色素瘤细胞株也有更强的活性。数据表明三唑己酮联芳(杂)环衍生物对于多种肿瘤细胞株上都一定的抑制效果。