本发明涉及中药技术领域，特别涉及一种松果菊苷的制备方法。
背景技术：
松果菊苷(echinacoside)，别名松果菊甙、海胆苷，分子式为c35h46o20，结构式如式i，cas登记号82854-37-3，其为管花肉苁蓉提取物之一。主要功效：补肾阳；益精血；润肠道。主肾阳虚衰；精血不足之阳痿；遗精；白浊；尿频余沥；腰痛脚弱；耳鸣目花；月经衍期；宫寒不孕；肠燥便秘。松果菊苷为一种天然化合物，具有许多生物学效应，如神经保护作用、肝脏保护作用、抗肿瘤、抗凋亡、抗衰老、免疫调节和促进生殖的作用，同时还有降糖、降脂、促进骨骼形成及预防动脉硬化的作用等。
松果菊苷主要以管花肉苁蓉为原材料，经过加工、提取和精制而得到。申请号为cn200410069054.x的发明提供了一种从肉苁蓉药材中提取、分离松果菊苷的方法，该方法为将干净的肉苁蓉药材粉碎，用水或/和有机溶剂溶剂进行提取。提取液浓缩后，经大孔吸附树脂柱分离，先用水洗脱除去部分杂质，再用5-15％(v/v)甲醇水溶液或乙醇水溶液洗脱除去部分杂质，最后用20-35％(v/v)甲醇水溶液或乙醇水溶液进行洗脱。在洗脱的过程中用hplc进行监控，当有效成分松果菊苷的纯度降到85％以下时，停止洗脱，合并高浓度的洗脱液，浓缩、干燥，即制得其有效成分松果菊苷。但该种方法对肉苁蓉药材中松果菊苷的含量要求比较高，并且所得松果菊苷纯度不高，转移率较低。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种松果菊苷的制备方法。本发明所制得的松果菊苷转移率及纯度较高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种松果菊苷的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：将管花肉苁蓉药材粉碎，所得粗粉用提取溶剂进行提取，得到滤液和药渣；提取溶剂为水或乙醇水溶液；
步骤2：将药渣用提取溶剂提取2次，提取溶剂为水或乙醇水溶液；合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至在70℃条件下相对密度为1.05～1.30，加水得到粗提物水溶液；
步骤3：将粗提物水溶液加入大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应后，用体积百分含量为5％～15％的乙醇水溶液洗脱2～4个柱床体积，再用16％～60％的乙醇水溶液洗脱并收集洗脱液，取松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至在80℃条件下相对密度为1.0～1.25，1～15℃条件下放置0.5～72h，析出结晶，减压干燥后得到松果菊苷。
作为优选，步骤1中粗粉与提取溶剂的体积比为1：(4～10)，提取的次数为1次，提取的温度为80～110℃，提取时间为0.5～2h；所述大孔吸附树脂型号为x-5、ab-8、nk-2、nka-2、nk-9、wld、d3520、d101、d201、d301、d113、d001、d203、d296、d354、d213、sp70、d101b、xda-1、xda-1b、xda-7、h-10、h-20、h-30、h-40、h-50、h-60、da-201、dm-301、hpd-100、hpd-400、dm130、h-103中的一种或几种。
优选地，步骤1中粗粉与提取溶剂的体积比为1：6，提取的次数为1次，提取的温度为100℃，提取时间为1h。
作为优选，步骤2中药渣与提取溶剂的体积比为1：(3～10)，提取的次数为2次，提取的温度为80～110℃，提取时间为0.5～2h。
优选地，步骤2中药渣与提取溶剂的体积比为1：4，提取的次数为2次，提取的温度为100℃，提取时间为1h。
作为优选，步骤2中减压回收乙醇并浓缩至在70℃条件下相对密度为1.10～1.30。
作为优选，步骤1和/或步骤2的提取溶剂为乙醇水溶液，合并滤液与浓缩之间还包括减压回收乙醇的步骤。
作为优选，步骤1中乙醇水溶液的体积百分含量为70％～90％。
作为优选，步骤2中乙醇水溶液的体积百分含量为70％～90％。
优选地，步骤1中乙醇水溶液的体积百分含量为80％，
优选地，步骤2中乙醇水溶液的体积百分含量为80％。
作为优选，粗提物水溶液的浓度为0.1～3.0g药材/ml。
优选地，粗提物水溶液的浓度为0.6g药材/ml。
作为优选，用体积百分含量为5％～15％的乙醇水溶液洗脱2～4个柱床体积为：用体积百分含量为10％的乙醇水溶液洗脱2～4个柱床体积。
更优选地，用体积百分含量为5％～15％的乙醇水溶液洗脱2～4个柱床体积为：用体积百分含量为10％的乙醇水溶液洗脱3个柱床体积。
作为优选，用16％～60％的乙醇水溶液洗脱为：用22％的乙醇水溶液洗脱。
作为优选，析出结晶与减压干燥之间还包括纯化的步骤，纯化为1～15℃水冲洗滤饼，或者为加40～100℃水溶解后重结晶。
优选地，析出结晶与减压干燥之间还包括纯化的步骤，纯化为4℃水冲洗滤饼，或者为加60℃水溶解后重结晶。
作为优选，粗粉的粒径0.1～3.0cm。
优选地，粗粉的粒径0.5～1.5cm。
作为优选，步骤3中减压干燥的温度为40～100℃。
优选地，步骤3中减压干燥的温度为50℃。
本发明提供了一种松果菊苷的制备方法。该制备方法包括：将管花肉苁蓉药材粉碎，所得粗粉用提取溶剂进行提取，得到滤液和药渣；提取溶剂为水或乙醇水溶液；将药渣用提取溶剂提取2次，提取溶剂为水或乙醇水溶液；合并滤液，减压回收乙醇并浓缩至在70℃条件下相对密度为1.05～1.30，加水得到粗提物水溶液；将粗提物水溶液加入大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应后，用体积百分含量为5％～15％的乙醇水溶液洗脱2～4个柱床体积，再用16％～60％的乙醇水溶液洗脱并收集洗脱液，取松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至在80℃条件下相对密度为1.0～1.25，1～15℃条件下放置0.5～72h，析出结晶，减压干燥后得到松果菊苷。本发明具有的技术效果为：
本发明所提供的松果菊苷的制备方法，所制得的松果菊苷转移率及纯度较高。即便肉苁蓉药材中松果菊苷的含量较低的情况下，也能够获得较高的转移率和纯度，对肉苁蓉药材的要求低。
具体实施方式
本发明公开了一种松果菊苷的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的松果菊苷的制备方法中所用原料药或试剂、耗材均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
取松果菊苷含量为15％的管花肉苁蓉药材1kg，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用6倍生药量的80％乙醇提取1小时，滤过，滤液备用。药渣再加4倍药材量80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.13(70℃)，加水使其成浓度为0.6g药材/ml，徐徐注入已处理好的ab-8大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱3个柱床体积，再用22％乙醇洗脱并收集洗脱液，取hplc测得松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.04(80℃)，4℃冷藏12小时，析出结晶，抽滤，4℃冷水冲洗滤饼，弃去滤液，滤饼50℃减压干燥，粉碎，得松果菊苷转移率58.2％，纯度为99.2％。
比较例1-1
取松果菊苷含量为15％的管花肉苁蓉药材1kg，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用6倍生药量的80％乙醇提取1小时，滤过，滤液备用。药渣再加4倍药材量80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.12(70℃)，加水使其成浓度为0.6g药材/ml，徐徐注入已处理好的ab-8大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱3个柱床体积，再用22％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.02(80℃)，喷雾干燥(进口温度：185℃，出口温度：90℃)，得松果菊苷转移率51.3％，纯度为81.2％。
比较例1-2
取松果菊苷含量为15％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用6倍生药量的80％乙醇提取1小时，滤过，滤液备用。药渣再加4倍药材量80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15(70℃)，加水使其成浓度为0.6g药材/ml，徐徐注入已处理好的ab-8大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱3个柱床体积，再用22％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于85％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05(80℃)，喷雾干燥(进口温度：185℃，出口温度：90℃)，得松果菊苷转移率17.5％，纯度为93.1％。
通过对比实施例1与比较例1-1及比较例1-2可知，本发明经过将4℃冷藏过夜，再重结晶，所制得的松果菊苷转移率及纯度较高。
实施例2
取松果菊苷含量为1％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用6倍生药量的80％乙醇提取1小时，滤过，滤液备用。药渣再加4倍药材量80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10(70℃)，加水使其成浓度为0.6g药材/ml，徐徐注入已处理好的ab-8大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱3个柱床体积，再用22％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.03(80℃)，4℃冷藏12小时，析出结晶，抽滤，4℃冷水冲洗滤饼，弃去滤液，滤饼50℃减压干燥，粉碎，得松果菊苷转移率53.1％，纯度为96.7％。
比较例2-1
取松果菊苷含量为1％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用6倍生药量的80％乙醇提取1小时，滤过，滤液备用。药渣再加4倍药材量80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.13(70℃)，加水使其成浓度为0.6g药材/ml，徐徐注入已处理好的ab-8大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱3个柱床体积，再用22％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.04(80℃)，喷雾干燥(进口温度：185℃，出口温度：90℃)，得松果菊苷转移率47.3％，纯度为72.6％。
比较例2-2
取松果菊苷含量为1％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用6倍生药量的80％乙醇提取1小时，滤过，滤液备用。药渣再加4倍药材量80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.12(70℃)，加水使其成浓度为0.6g药材/ml，徐徐注入已处理好的ab-8大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱3个柱床体积，再用22％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于85％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.03(80℃)，喷雾干燥(进口温度：185℃，出口温度：90℃)，得松果菊苷转移率6.8％，纯度为79.4％。
比较例2-3
取松果菊苷含量为1％的管花肉苁蓉药材1kg，粉碎，加入3l乙酸乙酯溶液，加热回流1小时，提取3次，收集合并提取液，加入80g针剂类医药用活性炭脱色1小时，过滤后回收试剂，浸膏加去离子水溶解后加入hz806大孔树脂柱饱和吸附，先用8bv水洗，再用4bv20％乙醇，最后用5bv50％乙醇洗脱松果菊苷，收集有效成分加入短粗铝柱(1kg氧化铝)去杂质，下柱液减压浓缩。得松果菊苷转移率35.8％，纯度为88.9％。
通过对比实施例2与比较例2-1、比较例2-2及比较例2-3可知，本发明在管花肉苁蓉药材中松果菊苷含量较低的情况下，仍可以获得转移率及纯度较高的松果菊苷，使得松果菊苷的制备对肉苁蓉药材的要求不高，材料易得，大大降低成本。
实施例3
取松果菊苷含量为15％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用6倍生药量的80％乙醇提取1小时，滤过，滤液备用。药渣再加4倍药材量80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.14(70℃)，加水使其成浓度为0.6g药材/ml，徐徐注入已处理好的ab-8大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱3个柱床体积，再用22％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.25(80℃)，15℃冷藏72小时，析出结晶，抽滤，15℃冷水冲洗滤饼，弃去滤液，滤饼50℃减压干燥，粉碎，得松果菊苷转移率45.7％，纯度为97.3％。
实施例4
取松果菊苷含量为15％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用6倍生药量的80％乙醇提取1小时，滤过，滤液备用。药渣再加4倍药材量80％乙醇提取2次，每次1小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.13(70℃)，加水使其成浓度为0.6g药材/ml，徐徐注入已处理好的xda-1大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用10％乙醇洗脱3个柱床体积，再用22％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.01(80℃)，1℃冷藏8小时，析出结晶，抽滤，1℃冷水冲洗滤饼，弃去滤液，滤饼50℃减压干燥，粉碎，得松果菊苷转移率48.2％，纯度为96.8％。
实施例5
取松果菊苷含量为15％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用4倍生药量的90％乙醇提取0.5小时，滤过，滤液备用。药渣再加10倍药材量90％乙醇提取2次，每次2小时，滤过。合并3次滤液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30(70℃)，加水使其成浓度为3.0g药材/ml，徐徐注入已处理好的d101大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用15％乙醇洗脱2个柱床体积，再用60％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.06(80℃)，4℃冷藏12小时，析出结晶，抽滤，4℃冷水冲洗滤饼，弃去滤液，滤饼40℃减压干燥，粉碎，得松果菊苷转移率52.3％，纯度为98.7％。
实施例6
取松果菊苷含量为15％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用10倍生药量的70％乙醇提取2小时，滤过，滤液备用。药渣再加3倍药材量的70％乙醇提取2次，每次2小时，滤过。合并3次滤液，减压回收并浓缩至相对密度为1.12(70℃)，加水使其成浓度为0.1g药材/ml，徐徐注入已处理好的nk-2大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用5％乙醇洗脱4个柱床体积，再用16％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷的含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.04(80℃)，4℃冷藏12小时，析出结晶，抽滤，4℃冷水冲洗滤饼，弃去滤液，滤饼100℃减压干燥，粉碎，得松果菊苷转移率51.2％，纯度为98.3％。
实施例7
取松果菊苷含量为15％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用10倍生药量的水提取2小时，滤过，滤液备用。药渣再加3倍药材量的水提取2次，每次2小时，滤过。合并3次滤液，减压回收并浓缩至相对密度为1.06(70℃)，加水使其成浓度为0.1g药材/ml，徐徐注入已处理好的h-10大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用5％乙醇洗脱4个柱床体积，再用16％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.00(80℃)，1℃冷藏0.5小时，析出结晶，抽滤，1℃冷水冲洗滤饼，弃去滤液，滤饼50℃减压干燥，粉碎，得松果菊苷转移率45.8％，纯度为97.3％。
比较例3
取松果菊苷含量为15％的管花肉苁蓉药材，粉碎成粗粉(粒径0.5～1.5cm)，用15倍生药量的水提取2小时，滤过，滤液备用。药渣再加15倍药材量的水提取2次，每次2小时，滤过。合并3次滤液，减压回收并浓缩至相对密度为1.04(70℃)，加水使其成浓度为0.1g药材/ml，徐徐注入已处理好的ab-8大孔吸附树脂柱内，先用水洗脱至无糖反应，改用5％乙醇洗脱4个柱床体积，再用10％乙醇洗脱并收集洗脱液，取用hplc测得松果菊苷含量大于60％的洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.03(80℃)，18℃放置30小时，无晶体析出。
将比较例3与实施例1、3、4、5、6、7进行比较，得到的松果菊苷转移率及纯度剧降，表明在本发明所主张参数条件下，得到的松果菊苷转移率及纯度较高。进一步对比实施例1、3、4、5、6、7可知，在管花肉苁蓉药材的松果菊苷含量一致的情况下，在重结晶阶段，浓缩至相对密度为1.02～1.06(80℃)，4℃冷藏12小时，析出结晶，抽滤，4℃冷水冲洗滤饼，弃去滤液，滤饼、减压干燥，粉碎，得到的松果菊苷转移率及纯度较高，而且实施例1效果最好。
比较例4
参照公开号为cn105111255a专利实施例4中方法提取松果菊苷，具体如下：
50kg肉从蓉粗粉中加入500kg75％乙醇，用多功能超声波提取罐于45℃超声提取1.5小时，以上方法重复提取3次，合并三次提取液，于70℃以下减压浓缩至无乙醇，该溶液用超滤设备过滤至澄清，澄清液上大孔树脂柱(ab-8大孔吸附树脂)进行吸附，首先用纯化水洗脱至流出液无色澄清，再用55％乙醇洗脱，收集全部55％乙醇洗脱液，用外循环真空浓缩器进行浓缩，浓缩液喷雾干燥即得肉从蓉提取物，松果菊苷转移率41.8％，纯度为25.6％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。