一种检测乙肝病毒的RPA引物、试剂、试剂盒及其应用的制作方法

文档序号:22477533发布日期:2020-10-09 22:20阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测乙肝病毒的rpa引物,其特征在于,所述rpa引物的核苷酸序列为:

上游引物:5’-cttgagtatttggtgtcttttggagtgtgg-3’(seqidno.1);

下游引物:5’-attgagatcttctgcgacgcggcgattgag-3’(seqidno.2);

所述上游引物的5’端采用fam进行标记,所述下游引物的5’端采用生物素进行标记。

2.一种检测乙肝病毒的rpa试剂,其特征在于,包括权利要求1所述的rpa引物。

3.根据权利要求2所述的rpa试剂,其特征在于,所述上游引物和下游引物在所述rpa试剂中的终浓度均为0.48μmol/l。

4.一种检测乙肝病毒的试剂盒,包括权利要求1所述的rpa引物或权利要求2或3所述的rpa试剂,以及试纸条。

5.权利要求1所述的rpa引物或权利要求2或3所述的rpa试剂或权利要求4所述的试剂盒在检测或辅助检测乙肝病毒中的应用;

或权利要求1所述的rpa引物或权利要求2或3所述的rpa试剂或权利要求4所述的试剂盒在制备检测或辅助检测乙肝病毒的产品中的应用。

6.权利要求1所述的rpa引物或权利要求2或3所述的rpa试剂或权利要求4所述的试剂盒在检测或辅助检测待测样品是否感染乙肝病毒中的应用;

或权利要求1所述的rpa引物或权利要求2或3所述的rpa试剂或权利要求4所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测样品是否感染乙肝病毒的产品中的应用;

或权利要求1所述的rpa引物或权利要求2或3所述的rpa试剂或权利要求4所述的试剂盒在检测乙肝病毒中的应用;

或权利要求1所述的rpa引物或权利要求2或3所述的rpa试剂或权利要求4所述的试剂盒在制备检测乙肝病毒的产品中的应用。

7.一种检测乙肝病毒的方法,包括如下步骤:

(1)用权利要求1所述rpa引物对待测病毒进行rpa扩增,得到rpa扩增产物;

(2)将步骤(1)中所得的rpa扩增产物滴加在试纸条加样区,根据试纸条上产生的条带情况分析待测病毒是否为乙肝病毒,若试纸条上产生两条清晰条带,则所述待测病毒为或候选为乙肝病毒;若试纸条上仅产生一条质控条带,则所述待测病毒中不含有乙肝病毒。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:步骤(1)中所述rpa扩增的模板为待测病毒的dna。

9.根据权利要求7或8所述的方法,其特征在于:所述rpa扩增的温度为37℃,所述rpa扩增的时间为20-60min。

10.权利要求7所述的方法在检测或辅助检测乙肝病毒中的应用。


技术总结
本发明公开了一种检测乙肝病毒的RPA引物、试剂、试剂盒及其应用,属于生物技术领域,所述RPA引物由SEQ ID NO.1所示单链DNA分子和SEQ ID NO.2所示单链DNA分子组成;RPA试剂包括上述RPA引物;试纸条包括上述RPA引物或RPA试剂;应用于检测乙肝病毒的方法为先用上述RPA引物对待测病毒进行RPA扩增,得到RPA扩增产物,然后将该产物滴加在试纸条加样区,根据试纸条上产生的条带情况分析是否为乙肝病毒。本发明的RPA引物特异性好、灵敏度高、检测时间短、不需要特殊的仪器,适用范围广;基于该引物建立的乙肝病毒的RPA检测方法灵敏、准确、简便和快速,对临床相关疾病检验具有指导意义。

技术研发人员:邵伊宁;闫灵均
受保护的技术使用者:中国医科大学
技术研发日:2019.03.28
技术公布日:2020.10.09
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