5-氯-N4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-N2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺新晶型的制作方法

本发明涉及药物化合物的晶型，特别涉及5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺新晶型及其制备方法和药用组合物。

背景技术：

美国专利us201313842951中描述了一种磷衍生物作为激酶抑制剂，特别是5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺。2017年4月28日，5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺(布格替尼，商品名为alunbrigtm)，作为一种具有抗肿瘤性质的酪氨酸及酶抑制剂在美国被批准上市，用于对克唑替尼不耐受或用药后疾病进展的alk阳性的转移性非小细胞肺癌患者。

美国专利us9611283中描述了一种抑制alk驱动的癌细胞增殖的方法，特别是使用化合物5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺，用于治疗alk阳性的转移性非小细胞肺癌患者，其有效性更佳。

美国阿瑞雅德公司（ariad）在中国专利申请文件cn107108599a(公开号)中描述了5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺的十种多晶型物及其制备方法。

5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺微溶于水，而不同晶型的溶解度存在差异，从而影响其药物组合物体外的溶出、释放，进而影响到药物在体内的生物利用度。所以，研究和制备5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺的不同形态结晶具有非凡的意义。

技术实现要素：

本发明第一目的是提供一种新的5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体，该晶体具有水溶性好、稳定性较佳、更适于工业化规模制备等优点。

本发明的另一个目的在于提供一种所述新5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体的制备方法，该方法实现了成本低、收率高、能有效控制产品杂质。

本发明的第三个目的是提供含有上述新晶体的药用组合物。

本发明所提供的5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体，使用cu-ka辐射，其x-射线衍射图，以度表示的2θ在5.46±0.2°、10.89±0.2°、11.63±0.2°、12.94±0.2°、14.88±0.2°、16.05±0.2°、17.32±0.2°、20.34±0.2°、20.73±0.2°、22.42±0.2°、23.42±0.2°和41.62±0.2°处有衍射峰。特别是，在5.46±0.2°、12.94±0.2°、14.88±0.2°、20.73±0.2°和23.42±0.2°还有一个或多个(以任意组合，包括两个以上，或者全部)衍射峰；晶体的x-射线衍射图谱如图2所示。

此外，本发明的5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体用kbr压片测得的红外吸收图谱，其特征为在约3426cm^-1，3222cm^-1，3164cm^-1，3087cm^-1，2933cm^-1，2796cm^-1，1616cm^-1，1569cm^-1，1513cm^-1，1442cm^-1，1413cm^-1，1309cm^-1，1232cm^-1，1157cm^-1，1035cm^-1，933cm^-1，865cm^-1，773cm^-1，757cm^-1，709cm^-1，623cm^-1，476cm^-1处有吸收峰；见图3。

本发明还提供一种5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体的制备方法，实现的步骤包括：首先将5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺加入于体积比为1:5至5:1的甲醇与水溶液中，然后在60～70℃下搅拌2～4小时，降至室温，放置直至晶体缓慢析出；过滤干燥所得固体，即得到所述的5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺新晶体。

加大有机溶剂的使用量，对产品质量无提升，反而会提高整体生产成本。

在本发明中，本发明所涉及的x-粉末衍射测试仪器及测试条件为：x-射线衍射仪rigakud/max-ra型(日本理学)；cu靶、石墨弯晶单色器、管电压40kv、管电流100ma、波长1.5406å、扫描范围3～70°。

本发明所涉及的有关物质高效液相色谱检测条件及方法为：色谱条件与系统适用性用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为0.1%三氟乙酸水溶液和乙腈，进行梯度洗脱(乙腈：0-5%-40%-90%-5%，5-60-80-85-90分钟)；检测波长250nm；理论塔板数按5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺峰计算应不低于5000。5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

溶出度的测定条件及方法：照中国药典2015年版四部通则0931第二法测定。

取本品制成的片剂，照溶出度测定法，以磷酸盐缓冲液（用氢氧化钠调节ph值至7.2）900ml为溶出介质，转速为每分钟70转，依法操作，经60分钟时，取溶液适量，滤过，弃去初滤液，取续滤液稀释后作为供试品溶液。另精密称取5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺对照品适量，用水制成每1ml中约含5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺10μg的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2015年版四部通则0931第二法，在250nm波长处测定吸光度，按外标法以吸光度计算每粒(或片)的溶出量。

5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体特性测定

一、稳定性

试验用样品：实施例1所制备的5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体。

1、水或溶剂影响试验

将5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体与适量辅料混合并进行湿法制粒，所得样品测定x-射线衍射图谱，对比制粒前的5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体，未发现影响或者变化。结果参照x-射线衍射图谱如图4所示。

2、粉碎试验

取样品适量，采用高速粉碎机进行粉碎的方法，粉碎后取样测定，测试指标并将结果与粉碎前比较，结果见表1。

表1粉碎试验

3、与辅料混合实验

称取定量5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺一份与适量的权利要求项5中所述辅料，然后过80目筛三次混合，制得晶体与辅料混合的样品。将所得样品和本发明所用混合辅料进行x-射线衍射检测，检测结果如图6所示。

4、光照试验(5000lxs)

取样品适量，置光照相对强度5000lxs条件下放置30天，于30天取样测定，并将结果与0天比较外观性状，结果见表2。

表2光照试验

5、加速试验(40℃)

取样品适量，置温度为40℃条件下放置30天，于30天取样测定，取样测定晶体粉末数据，比较外观后，测试指标并将结果与0天比较，结果见表3。

表3加速试验(40℃)

6、高湿试验

将5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体原料均匀分摊至敞口培养皿中，厚度≤5mm，置于室温(25℃左右)，相对湿度为90±5％的恒温恒湿培养箱中，于第30天取样进行测定，并与0天的结果进行对照，结果见表4。

表4高湿试验(室温，相对湿度、90±5％)

二、溶解性

参照中国药典2015年版二部凡例进行试验。方法：精密称取5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体适量，缓慢加入一定量的溶剂，每隔5分钟强力振摇30秒，观察30分钟内的溶解情况，结果见表5。

表55-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体溶解度试验

通过一系列试验验证，研究在高温、光照、压力、机械剪切力及与辅料作用等条件下的稳定性。由此可见，本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体适合制备成制剂。

附图说明

图1是本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体的核磁共振碳谱图。

图2是本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体的x-射线衍射图谱。

图3是本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体的红外光谱图谱。

图4是本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体制粒后的x-射线衍射图谱。

图5是本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体粉碎后的x-射线衍射图谱。

图6是本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体与辅料混合x-射线衍射图谱。

图7是本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体光照30天试验x-射线衍射图谱。

图8是本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体加速30天试验x-射线衍射图谱

图9是本发明5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体高湿30天试验x-射线衍射图谱。

具体实施方式

以下实施例和附图对本发明作更具体的描述，但本发明并不仅限于以下实施例的内容。

实施例1

取20g5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺加入于体积比为1:1甲醇与水溶液中，然后在65℃下搅拌3小时，降至室温，放置直至晶体缓慢析出；过滤干燥所得固体，所得产品x-射线衍射图谱如图2所示。

实施例2

取50g5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺加入于体积比为2:1乙醇与水溶液中，然后在68℃下搅拌4小时，降至室温，放置直至晶体缓慢析出；过滤干燥所得固体，所得产品x-射线衍射谱图与实施例1基本一致。

实施例3片剂的处方及制备工艺：

按下述方法用几种赋形剂将上述5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体配制成每片含30mg的片剂，结果见表6。

表6处方情况

制备过程：含5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体片剂的制造方法是将上述赋形剂与5-氯-n4-[2-(二甲基磷酰基)苯基]-n2-{2-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2,4-二胺晶体按等量递增法混合均匀，干法制粒，压片。参比晶体采用相同的方法进行混合、制粒、压片。片剂处方溶出度测定结果对比见表7

表7片剂处方溶出度测定结果对比

上述对本发明进行了示例性描述，本发明并不仅限于以上实施例的内容。其他任何采用了本发明的技术方案和原理所做出的非实质改进，或未经改进将发明的技术方案和原理直接应用于其他场合的，均属于本发明的保护范围之内。