一种强启动子及其质粒载体和应用的制作方法

文档序号:19497211发布日期:2019-12-24 15:14阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种强启动子,其特征在于,其核苷酸序列任选自如下(a)、(b)或(c)所述的序列:

(a)强启动子为序列表seqidno:1所示的核苷酸序列;

(b)与序列表seqidno:1具有75%以上一致性,且具有启动子功能的核苷酸序列;

(c)在高严谨条件下与(a)或(b)所述的核苷酸序列杂交且具有启动子功能的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的强启动子,其特征在于,所述(b)为与序列表seqidno:1具有95%以上同源性,且具有启动子功能的核苷酸序列。

3.一种含有权利要求1或2所述强启动子的质粒载体。

4.根据权利要求3所述的质粒载体,其特征在于,所述质粒载体为游离型或整合型载体,优选地,所述游离型载体为含有革兰氏阴性菌均可识别的复制子和mob基因的广泛宿主穿梭质粒载体,进一步优选pbbr1mcs2;所述整合型载体为携带有靶基因翼侧500-4000碱基同源重组臂的同源重组载体,进一步优选puc系列质粒。

5.根据权利要求3所述的质粒载体,其特征在于,所述质粒载体还包括编码目的多肽的核酸序列。

6.根据权利要求5所述的质粒载体,其特征在于,所述编码目的多肽的核酸序列包括荧光蛋白;

优选地,所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白。

7.一种宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞含有权利要求3所述的质粒载体。

8.根据权利要求7所述的宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞为α-变形菌门;

优选地,为苜蓿中华根瘤菌(sinorhizobiummeliloti)、运动发酵单胞菌(zymomonasmobilis)、新月柄杆菌(caulobactercrescentus)、脱氮假单胞菌(pseudomonasdenitrificans)、致瘤农杆菌(agrobacteriumtumefaciens)、流产布鲁氏菌(brucellaabortus)、荧光假单胞菌(pseudomonasfluorescens)、豆科根瘤菌(rhizobiumleguminosarum)或黏着剑菌(sinorhizobiumadhaerensorensiferadhaerens)中的一种;

更优选地为黏着剑菌(sinorhizobiumadhaerensorensiferadhaerens)。

9.权利要求1-2任一项所述强启动子或权利要求3-6任一项所述质粒载体或权利要求7-8任一项所述宿主细胞在启动目的基因表达的应用。


技术总结
本发明通过扩增黏着剑菌中的一种强启动子,进行生物信息学分析和功能验证,获得可广泛用于苜蓿中华根瘤菌、运动发酵单胞菌、新月柄杆菌、脱氮假单胞菌、致瘤农杆菌、流产布鲁氏菌、荧光假单胞菌、豆科根瘤菌和黏着剑菌等α‑变形菌门中基因表达、遗传基因操作和菌株改良的强启动子,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明还涉及含有该强启动子的质粒载体,利用该启动子构建基因工程菌株的方法及相应的菌株,及宿主细胞在启动目的基因表达的应用。

技术研发人员:张大伟;董会娜
受保护的技术使用者:中国科学院天津工业生物技术研究所
技术研发日:2019.09.27
技术公布日:2019.12.24
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