一种快速提取石蜡组织RNA的方法与流程

文档序号:20004120发布日期:2020-02-22 03:27阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种快速提取石蜡组织rna的试剂盒,其特征在于,包括以下组分:

脱蜡混合液bufferal:0.5~1.5%的tween-20(v/v)、5~15mm的tris·cl;

裂解液bufferrlt:400~600mm的tris·cl,15~25mm的edta,质量分数0.1~1%的sds,80~120mm的dtt;

dnasei工作混合液:8~12mm的tris·cl、0.1mm的cacl2、8~12mm的mncl2和dnasei0.5~7.5u/μl;

纯化液1:1~5%chelex-100(m/v,g/ml),溶剂为te缓冲液;

纯化液2:4~7%chelex-100(m/v,g/ml),溶剂为depc处理水;

蛋白酶k。

2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述的脱蜡混合液bufferal包含体积分数1%的tween-20,10mm的tris·cl。

3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述的裂解液bufferrlt包含500mm的tris·cl,20mm的edta,质量分数0.5%的sds,100mm的dtt。

4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述的dnasei工作混合液包含10mmtris·cl,0.1mmcacl2,10mmmncl2、0.5u/μldnasei。

5.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述的纯化液1包括5%g/ml的chelex-100,溶剂为te缓冲液。

6.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述的纯化液2包括6%g/ml的chelex-100,溶剂为depc水。

7.一种快速提取石蜡组织rna的方法,其特征在于,是利用权利要求1、2、3、4、5或6所述的试剂盒进行提取,具体方法如下:

a、脱蜡:将ffpe样品置于脱蜡混合液bufferal中进行脱蜡;

b、组织的裂解:将脱蜡后的样品用裂解液bufferrlt和蛋白酶k裂解,得裂解液;

c、纯化:裂解液中加入纯化液1,混匀孵育,离心取上清,将上清转入新的管中,再加入氯仿混匀,离心取上清转入新的管中,得到纯化液;

d、rna分离:在纯化液中加入dnasei工作混合液,混匀孵育,再加入纯化液2,混匀孵育,离心取上清至无rnase离心管中,得到rna。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,具体步骤如下:

a、脱蜡:

刮取1片10μm厚、面积约1×1cm2的ffpe样品至1.5ml离心管中,加入100μl脱蜡混合液bufferal,将贴在管壁上的组织全部浸入其中,90℃孵育10min;

b、组织的裂解

(1)加入120μl裂解液bufferrlt,2μlproteinasek使得其终浓度为10mg/l涡旋震荡混匀56℃孵育15min400rpm,直至样品完全溶解.80℃孵育15min,离心,使管壁上的溶液收集到管底;

c、纯化

(1)加入100μl纯化液1,轻轻混匀,99℃450rmp孵育10min,立即放在冰上静置2min,10500xg离心15min;

(2)转移上清至新的ep管中金属浴加热至45℃后,加入100μl氯仿充分混匀后,10500xg离心15min,吸取上清180μl至新的ep管中;

d、rna分离

(1)在步骤c的(2)的含有上清的新的ep管中加入2μldnasei工作混合液,使用移液器吹打混匀,37孵育15min,94℃孵育5min;

(2)加入100μl纯化液2,轻轻混匀,100℃450rmp孵育15min,10500xg离心15min,转移180μl上清至新的无rnase离心管中。

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