1.一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,包括含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒。
2.根据权利要求1所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,还包括vp73的上游引物,vp73的下游引物,β-actin的上游引物,β-actin的下游引物。
3.根据权利要求2所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,还包括vp73的探针,β-actin的探针。
4.根据权利要求2所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,所述vp73的上游引物为:
5’-cggatatgactgggacaacca-3’(seqidno.:1),
所述vp73的下游引物为:
5’-agggatctacaagcgtgtaaacg-3’(seqidno.:2),
所述β-actin的上游引物为:
5’-ccagttcgccatggatgac-3’(seqidno.:4),
所述β-actin的下游引物为:
5’-atgccggagccgttgtc-3’(seqidno.:5)。
5.根据权利要求3所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,所述vp73的探针为:
5’-fam-acacctttagagggcg-tamra-3’(seqidno.:3),
所述β-actin的探针为:
5’-cy5-tattgctgcgctcgtg-bhq2-3’(seqidno.:6),其中其中vp73探针和β-actin探针中的fam、cy5为荧光基团,tamra和bhq2为淬灭基团。
6.一种检测非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,该方法采用权利要求1-5任一项所述的试剂盒,以含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒溶液作为阳性对照标准品,以猪肌动蛋白基因β-actin作为内参对照基因,包括以下步骤:
(1)提取待测样本的核酸;
(2)以待测样本的核酸和含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒为模板进行基因扩增反应;
(3)对扩增结果进行分析。
7.根据权利要求6所述的一种检测非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒溶液的配置:
向含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒干粉中加入rnasefreewater溶解,得到质粒溶液,质粒溶液中质粒的浓度为0-106copies/ml。
8.根据权利要求6所述的一种检测非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,所述基因扩增反应为荧光定量pcr反应。
9.根据权利要求8所述的一种检测非洲猪瘟病毒的方法,荧光定量pcr反应的反应体系中,vp73的上游引物,vp73的下游引物,β-actin的上游引物,β-actin的下游引物;vp73的探针,β-actin的探针的使用浓度均为0.2-1μm。