一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒及检测非洲猪瘟病毒的方法与流程

文档序号:21172355发布日期:2020-06-20 17:14阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,包括含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒。

2.根据权利要求1所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,还包括vp73的上游引物,vp73的下游引物,β-actin的上游引物,β-actin的下游引物。

3.根据权利要求2所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,还包括vp73的探针,β-actin的探针。

4.根据权利要求2所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,所述vp73的上游引物为:

5’-cggatatgactgggacaacca-3’(seqidno.:1),

所述vp73的下游引物为:

5’-agggatctacaagcgtgtaaacg-3’(seqidno.:2),

所述β-actin的上游引物为:

5’-ccagttcgccatggatgac-3’(seqidno.:4),

所述β-actin的下游引物为:

5’-atgccggagccgttgtc-3’(seqidno.:5)。

5.根据权利要求3所述的一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,其特征在于,所述vp73的探针为:

5’-fam-acacctttagagggcg-tamra-3’(seqidno.:3),

所述β-actin的探针为:

5’-cy5-tattgctgcgctcgtg-bhq2-3’(seqidno.:6),其中其中vp73探针和β-actin探针中的fam、cy5为荧光基团,tamra和bhq2为淬灭基团。

6.一种检测非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,该方法采用权利要求1-5任一项所述的试剂盒,以含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒溶液作为阳性对照标准品,以猪肌动蛋白基因β-actin作为内参对照基因,包括以下步骤:

(1)提取待测样本的核酸;

(2)以待测样本的核酸和含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒为模板进行基因扩增反应;

(3)对扩增结果进行分析。

7.根据权利要求6所述的一种检测非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒溶液的配置:

向含有asfv结构蛋白基因vp73片段的质粒干粉中加入rnasefreewater溶解,得到质粒溶液,质粒溶液中质粒的浓度为0-106copies/ml。

8.根据权利要求6所述的一种检测非洲猪瘟病毒的方法,其特征在于,所述基因扩增反应为荧光定量pcr反应。

9.根据权利要求8所述的一种检测非洲猪瘟病毒的方法,荧光定量pcr反应的反应体系中,vp73的上游引物,vp73的下游引物,β-actin的上游引物,β-actin的下游引物;vp73的探针,β-actin的探针的使用浓度均为0.2-1μm。


技术总结
本发明提供了一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,包括含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒;VP73的上游引物,VP73的下游引物,β‑Actin的上游引物,β‑Actin的下游引物;VP73的探针,β‑Actin的探针。该试剂盒操作简便,价格低廉,耗时短,具有较高的灵敏性和特异性,具有广阔的市场前景和商业价值。本发明还提供了一种检测非洲猪瘟病毒方法,以含有ASFV结构蛋白基因VP73片段的质粒作为阳性对照,以猪肌动蛋白基因β‑Actin作为内参对照基因;从检测的最初阶段进行监控,能够监测整个病毒检测过程,完美的体现了内参质控的作用,增加了检测结果的准确性。

技术研发人员:王书崎;吴迪;武国华;刘慧
受保护的技术使用者:浙江大学
技术研发日:2019.11.04
技术公布日:2020.06.19
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