一种抗真菌肽突变体及其制备方法和应用

文档序号:25039476发布日期:2021-05-14 13:26阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种抗真菌肽突变体的工程化设计的方法,所述方法包括以下步骤:1)确定抗真菌肽的折衷性位点;2)对所述折衷性位点进行饱和定点突变,获得突变体;3)体外抑菌实验分析步骤2)获得的突变体,筛选具有期望的活性或功能的抗真菌肽突变体;其中,所述步骤1)是通过以下方法实现的:

选择抗真菌肽的并系同源的序列,并进行生物活性比较,从而确定与活性相关的氨基酸位点;

利用丙氨酸扫描确定多肽的折衷性位点;优选地,所述抗真菌肽选自cremycin-5野生型肽、果蝇素、昆虫防御肽、天蚕素、刺肩蝽素和棉铃虫素。2.一种抗真菌肽突变体,其中,所述突变体为crem-5野生型肽的突变体,所述突变体包含如seq id no:1所示的氨基酸序列、其生物活性功能片段、变体或衍生物;seq id no:1dvksghykgpcyhdxncngvcrdegyksghcsrwggacwcdt。3.根据权利要求2所述的抗真菌肽突变体,其中,所述x为lys、arg、his、met、asn、tyr、phe、gln、ser、thr、ala、ile、val、pro、d-lys、d-arg、d-his、d-met、d-asn、d-tyr、d-phe、d-gln、d-ser、d-thr、d-ala、d-ile、d-val或d-pro;优选地,所述x为lys。4.根据权利要求2或3所述的突变体,所述突变体包含如seq id no:2-15中任一项所示的氨基酸序列。5.一种编码如权利要求2-4中任一项所述的抗真菌肽突变体前体或如权利要求2-4中任一项所述的抗真菌肽突变体的dna序列。6.一种含有如权利要求5所述的dna序列的表达载体。7.一种重组的宿主细胞,所述宿主细胞含有权利要求6所述的表达载体、或者染色体中整合有如权利要求5所述的dna序列。8.一种制备如权利要求2-4中任一项所述抗真菌肽突变体的方法,所述方法包括:1)用含有编码抗真菌肽突变体的dna序列的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞;2)在合适的培养基中培养宿主细胞;3)从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。9.一种抗真菌的药物组合物,所述药物组合物含有安全有效量的如权利要求2-4中任一项所述的抗真菌肽突变体以及药学上可接受的载体或辅料;优选地,所述抗真菌肽突变体包含修饰或未修饰的聚合物;优选地,所述抗真菌肽突变体的致死浓度为2-20μm;更优选地,所述载体和/或辅料包括水溶性填充剂、ph调节剂、稳定剂、注射用水或渗透压调节剂中的一种或多种;优选地,所述水溶性填充剂选自甘露醇、低分子右旋糖酐、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖或半乳糖等中的一种或多种;所述ph调节剂选自枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸、盐酸等有机或无机酸,以及氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化铵、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铵、碳酸氢钾、碳酸
氢钠或碳酸氢铵盐等生理上可接受的无机碱或盐中的一种或多种;所述稳定剂选自edta-2na、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、精氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧基/羟基纤维素或其衍生物如hpc、hpc-sl、hpc-l或hpmc、环糊精、十二烷基硫酸钠或三羟甲基氨基甲烷中的一种或多种;所述渗透压调节剂为氯化钠和/或氯化钾。10.一种如权利要求2-4中任一项所述的抗真菌肽突变体、如权利要求5所述的dna序列、如权利要求6所述的表达载体、如权利要求7所述的宿主细胞或如权利要求9所述的药物组合物在制备用于抗真菌的药物中的应用。
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