一种克隆法尼基转移酶基因家族成员群的方法与流程

文档序号:20004196发布日期:2020-02-22 03:27阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于克隆法尼基转移酶基因家族成员群的简并引物,其特征在于,所述简并引物的上游引物如seqidno.1所示,下游引物如seqidno.2所示。

2.一种克隆法尼基转移酶基因家族成员群的方法,其特征在于,包括步骤:

(1)选取细菌一;

(2)利用pcr技术扩增细菌一的部分法尼基转移酶基因,pcr扩增技术中引物采用第一简并引物,第一简并引物的上游引物如seqidno.1所示,下游引物如seqidno.2所示,模板为细菌一的基因组dna;

(3)将扩增得到的部分法尼基转移酶基因做blast比对,获得亲缘关系最近的菌种并获得亲缘关系最近菌种的完整法尼基转移酶的基因序列;

(4)根据步骤(3)亲缘关系最近菌种的完整法尼基转移酶基因序列设计第二简并引物,利用pcr技术扩增细菌一的完整法尼基转移酶基因,该步骤的pcr扩增技术中引物为第二简并引物,模板为细菌一的基因组dna;

(5)再选取细菌二,按照上述步骤(2)至步骤(4)的方法获取细菌二的完整法尼基转移酶基因,按照该方法依次得到多个细菌的完整法尼基转移酶基因,建构法尼基转移酶基因家族成员群。

3.根据权利要求2所述的克隆法尼基转移酶基因家族成员群的方法,所述步骤2)和步骤4)中pcr扩增体系为10×pcr反应缓冲液5μl、25mmol/lmgso42μl、10mmoldntp5μl、10nmol/l引物各1μl、模板80ng、kod-plusdna聚合酶1μl、双蒸去离子水定容至50μl;反应条件为:95℃预变性5min;95℃30s,55℃30s,68℃延伸1.30min,共计30个循环;68℃延伸10min;15℃保持10min。

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