技术总结
产羊毛甾醇大肠杆菌菌株的构建方法，包括：根据大肠杆菌密码子优化荚膜甲氧球菌的鲨烯环氧酶的密码子，PCR扩增获得鲨烯环氧酶基因片段；PCR扩增获得NADPH‑细胞色素P450还原酶、鲨烯合成酶和羊毛甾醇合成酶基因片段并将其融合成为DNA片段SE‑CPR‑LS，将所述SE‑CPR‑LS片段通过酶切连接的方法克隆到载体pet21c上，构建表达载体pet21c‑SE‑CPR‑LS；将所述鲨烯合成酶基因片段通过同源重组的方法克隆到载体pACYCduet‑1上，构建表达载体pACYCduet‑SS；将所述载体pet21c‑SE‑CPR‑LS和pACYCduet‑SS转化进入大肠杆菌感受态细胞，得产羊毛甾醇大肠杆菌菌株。本发明通过外源质粒导入方法改造大肠杆菌BL21(DE3)系统，使其能够合成羊毛甾醇，并通过密码子优化技术提高了外源基因在大肠杆菌系统中的表达量。
技术研发人员：宛雯
受保护的技术使用者：江苏师范大学
技术研发日：2019.12.13
技术公布日：2020.03.27