CH3结构域改造诱导形成的异源二聚体及其制备方法和应用与流程

文档序号:25873606发布日期:2021-07-16 17:08阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种异源二聚体,其特征在于,其含有第一多肽链和第二多肽链,所述第一多肽链和第二多肽链分别含有抗体重链恒定区ch3结构域,分别命名为ch3_a结构域和ch3_b结构域,与野生型的人抗体重链恒定区ch3结构域相比,所述ch3_a和ch3_b结构域含有如下位置氨基酸的突变:ch3_a结构域的k409、f405发生突变,且ch3_a结构域和ch3_b结构域还分别在选自q347、y349、s354、e356、e357、k360、s364、l368、k370、k392、d399和k439中的一个或多个氨基酸位置具有的突变;优选地,所述ch3_a结构域和ch3_b结构域具有选自下列的突变中的一种或多种:1a)ch3_b结构域的s364、e357发生突变,且ch3_a结构域的k370发生突变;1b)ch3_b结构域的d399发生突变,且ch3_a结构域的k392发生突变;1c)ch3_b结构域的e356、e357发生突变,且ch3_a结构域的k439发生突变;1d)ch3_b结构域的s364发生突变,且ch3_a结构域的l368发生突变;1e)ch3_b结构域的q347发生突变,且ch3_a结构域的k360发生突变;以上所述的氨基酸的位置根据kabat编号的eu索引确定。2.根据权利要求1所述的异源二聚体,其特征在于,所述ch3_a结构域和ch3_b结构域还具有下列突变:1f)ch3_b结构域的s354发生突变,且ch3_a结构域的y349发生突变;或1g)ch3_b结构域的y349发生突变,且ch3_a结构域的s354发生突变。3.根据权利要求1或2所述的异源二聚体,其特征在于,所述突变选自以下突变中的一个或数个:q347r、y349c、s354c、e356k、e357k、e357s、k360e、s364r、s364k、l368d、k370d、k392d、d399k、k439e、f405e和k409f。4.根据权利要求3所述的异源二聚体,其特征在于,所述的ch3_a结构域和ch3_b结构域含有选自以下一组的突变:(a1)ch3_a结构域:f405e+k409f+k370d,ch3_b结构域:s364r+e357s;(a2)ch3_a结构域:f405e+k409f+k370d+s354c,ch3_b结构域:s364r+e357s+y349c;(a3)ch3_a结构域:f405e+k409f+k370d+y349c,ch3_b结构域:s364r+e357s+s354c(b1)ch3_a结构域:f405e+k409f+k392d,ch3_b结构域:d399k;(b2)ch3_a结构域:f405e+k409f+k392d+s354c,ch3_b结构域:d399k+y349c;(b3)ch3_a结构域:f405e+k409f+k392d+y349c,ch3_b结构域:d399k+s354c;(c1)ch3_a结构域:f405e+k409f+k439d,ch3_b结构域:e356k+e357k;(c2)ch3_a结构域:f405e+k409f+k439d+s354c,ch3_b结构域:e356k+e357k+y349c;(c3)ch3_a结构域:f405e+k409f+k439d+y349c,ch3_b结构域:e356k+e357k+s354c;(d1)ch3_a结构域:f405e+k409f+l368d,ch3_b结构域:s364r;(d2)ch3_a结构域:f405e+k409f+l368d+s354c,ch3_b结构域:s364r+y349c;(d3)ch3_a结构域:f405e+k409f+l368d+y349c,ch3_b结构域:s364r+s354c;(e1)ch3_a结构域:f405e+k409f+l368d,ch3_b结构域:s364k;(e2)ch3_a结构域:f405e+k409f+l368d+s354c,ch3_b结构域:s364k+y349c;(e3)ch3_a结构域:f405e+k409f+l368d+y349c,ch3_b结构域:s364k+s354c;(f1)ch3_a结构域:f405e+k409f+k360e,ch3_b结构域:q347r;
(f2)ch3_a结构域:f405e+k409f+k360e+s354c,ch3_b结构域:q347r+y349c;(f3)ch3_a结构域:f405e+k409f+k360e+y349c,ch3_b结构域:q347r+s354c;(g1)ch3_a结构域:f405e+k409f+k370d+k360e,ch3_b结构域:s364r+e357s+q347r;(g2)ch3_a结构域:f405e+k409f+k370d+k360e+s354c,ch3_b结构域:s364r+e357s+q347r+y349c;(g3)ch3_a结构域:f405e+k409f+k370d+k360e+y349c,ch3_b结构域:s364r+e357s+q347r+s354c。5.根据权利要求1或2所述的异源二聚体,其特征在于,所述的抗体恒定区来源于igg、iga、igd、ige或igm,igg优选为igg1、igg2、igg3或igg4,iga优选为iga1或iga2。6.一种组合物,其特征在于,其含有:(1)权利要求1-5中任意一项所述的异源二聚体,以及(2)药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂。7.一种多核苷酸、载体组合、或重组宿主细胞,其特征在于,所述多核苷酸包含:编码权利要求1-5中任意一项所述的异源二聚体的第一条多肽链的核苷酸分子a,以及编码权利要求1-5中任意一项所述的异源二聚体的第二条多肽链的核苷酸分子b;所述载体组合包括:含有所述核苷酸分子a的重组载体a,以及含有所述核苷酸分子b的重组载体b;所述重组宿主细胞含有所述载体组合;其中,所述重组宿主细胞的原始宿主细胞优选为真核细胞,进一步优选为cho细胞或293e细胞。8.权利要求1-5中任意一项所述的异源二聚体,权利要求6所述的组合物,权利要求7所述的多核苷酸、载体组合或重组宿主细胞在在制备双特异性抗体、双特异性融合蛋白和抗体-融合蛋白嵌合体中的用途。9.一种制备权利要求1-5中任意一项所述的异源二聚体的方法,其特征在于,使用权利要求7所述的重组宿主细胞表达所述异源二聚体。10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述重组宿主细胞中重组载体a和重组载体b的转染比例为1:3~3:1,例如1:2~2:1,例如1:1.5~1.5:1,例如约1:1。
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