通过微生物核糖体免疫沉淀快速检测抗微生物剂耐药性的制作方法

文档序号:23847619发布日期:2021-02-05 13:07阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种用于通过检测来自生物样品中的微生物的耐药性基因的至少一种转录物来确定微生物对于药物的耐药性的方法,该方法包括以下步骤:(i)将该样品经受化学或机械细胞裂解方法,从而获得裂解物和细胞碎片;(ii)使用特异性地结合微生物-核糖体蛋白的抗体或其片段从该裂解物获得核糖体-抗体复合物;(iii)通过核酸提取方法纯化与该核糖体-抗体复合物缔和的mrna;以及(iv)将所得的mrna经受特异性基因检测方法,从而鉴定该生物样品的该至少一种耐药性基因转录物。2.根据权利要求1所述的方法,其中获得该核糖体-抗体复合物的步骤(ii)通过以下程序中的一个进行:(a)首先用该抗体或其片段温育该裂解物以获得该核糖体-抗体复合物,并且随后通过亲和纯化方法分离该核糖体-抗体复合物;(b)首先从该裂解物分离核糖体,随后用该抗体或其片段温育所得的核糖体制品以获得该核糖体-抗体复合物,并且随后通过亲和纯化方法分离该核糖体-抗体复合物;以及(c)首先用亲和纯化该抗体或其片段的手段温育该抗体或其片段,并且随后用该抗体或其片段和该亲和纯化该抗体或其片段的手段的前述混合物温育该裂解物。3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法,其中该微生物是细菌,该药物是抗生素,并且该抗体或其片段特异性地结合细菌-核糖体蛋白。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中该生物样品是人样品。5.根据权利要求4所述的方法,其中该人样品选自由血液、血浆、血清、唾液、尿液和脓肿组成的组。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其中该抗体或其片段结合选自由以下组成的组的细菌核糖体亚基:l9、l16、l17、l19、l20、l21、l25、l27、l28、l31、l32、l33、l34、l35、l36、s1、s6、s16、s18、s20、s21、s22和s31。7.根据权利要求6所述的方法,其中该抗体或其片段结合选自由s6、s16、s18和s20组成的组的细菌核糖体亚基。8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其中在步骤(i)与(ii)之间,进行分离从步骤(i)获得的裂解物的步骤,并且因此根据步骤(ii)处理所得的分离的裂解物。9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其中该亲和纯化方法选自由以下组成的组:磁免疫沉淀,基于蛋白质a、蛋白质g、琼脂糖凝胶、l-琼脂糖的免疫沉淀和基于亲和柱的纯化方法。10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法,其中步骤(vi)的该特异性基因检测方法是基于扩增的方法、基于测序的方法或基于杂交的方法。11.根据权利要求10所述的方法,其中该特异性基因检测方法选自由以下组成的组:qrt-pcr、rna-rna杂交、rna-dna杂交和下一代核酸测序。12.根据权利要求10所述的方法,其中在同一生物样品中检测到来自一种细菌或不同细菌的耐药性基因的多于一种转录物,该特异性基因检测方法是基于杂交的方法,并且使用核酸-芯片。13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,其中该耐药性基因转录物选自由以下组
成的组:氨苄西林耐药性基因、卡那霉素耐药性基因、新霉素耐药性基因、嘌呤霉素耐药性基因和氯霉素耐药性基因。14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法,其中为了进一步确定微生物对于药物的耐药性,通过以下鉴定该生物样品中存在的该一种或多种微生物:将来自步骤(iii)的相同的所得mrna经受特异性基因检测方法,从而鉴定此微生物的独特基因、变体或序列。15.试剂盒用于检测来自生物样品中的微生物的耐药性基因的至少一种转录物的用途,该试剂盒包括:(i)特异性地结合微生物-核糖体蛋白的抗体或其片段;以及(ii)用于分离核糖体-抗体复合物的手段。16.一种用于使用以上所述的方法检测来自生物样品中的细菌的耐药性基因的至少一种转录物的试剂盒,该试剂盒包括:(i)特异性地结合选自由s6、s16、s18和s20组成的组的细菌-核糖体蛋白亚基的抗体或其片段;以及(ii)用于分离核糖体-抗体复合物的手段。
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