用于解决基因检测中荧光定量PCR非特异性扩增干扰的方法与流程

文档序号:21278469发布日期:2020-06-26 23:26阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于解决基因检测中荧光定量pcr非特异性扩增干扰的方法,其特征在于,其pcr扩增反应条件为:90—95℃预变性1—15min;90—95℃变性10—30s;50—65℃退火30s—90s;70—85℃延伸10s—30s;35-50个循环;信号收集设置在延伸环节。

2.如权利要求1所述的用于解决基因检测中荧光定量pcr非特异性扩增干扰的方法,其特征在于,还包括:20μlpcr反应体系;

所述20μlpcr反应体系包括以下组分:2×sybrgreenipcrmastermix10μl,特异性引物对各0.4μl,dna模板10—100ng,ddh2o补充至20μl。

3.如权利要求2所述的用于解决基因检测中荧光定量pcr非特异性扩增干扰的方法,其特征在于,所述特异性引物对包括以下7对引物对中任意一对:

引物对1:

上游引物序列如seqidno.1所示;

下游引物序列如seqidno.2所示;

引物对2:

上游引物序列如seqidno.3所示;

下游引物序列如seqidno.2所示;

引物对3:

上游引物序列如seqidno.4所示;

下游引物序列如seqidno.2所示;

引物对4:

上游引物序列如seqidno.5所示;

下游引物序列如seqidno.2所示;

引物对5:

上游引物序列如seqidno.6所示;

下游引物序列如seqidno.2所示;

引物对6:

上游引物序列如seqidno.7所示;

下游引物序列如seqidno.2所示;

引物对7:

上游引物序列如seqidno.7所示;

下游引物序列如seqidno.8所示。

4.如权利要求1所述的用于解决基因检测中荧光定量pcr非特异性扩增干扰的方法,其特征在于,在80℃收集荧光信号。

5.如权利要求1所述的用于解决基因检测中荧光定量pcr非特异性扩增干扰的方法,其特征在于,所述基因为人k-ras基因。

6.如权利要求1-5任一项所述的方法在荧光染料法定量pcr反应实验中的应用。

7.如权利要求1-5任一项所述的方法在荧光染料法定量pcr反应试剂盒中的应用。


技术总结
本发明公开一种用于解决基因检测中荧光定量PCR非特异性扩增干扰的方法,其特征在于,包括:PCR扩增反应条件为:90—95℃预变性1—15min;90—95℃变性10—30s;50—65℃退火30s—90s;70—85℃延伸10s—30s;35‑50个循环;信号收集设置在延伸环节。本发明采用三步法扩增,将荧光定量信号收集过程设定在延伸阶段,既有效避免了非特异性扩增信号的干扰,又省去了熔解曲线的构建过程,缩短了反应时间,提高了检测准确性,适用于多数荧光定量PCR反应实验,对于提高PCR扩增反应实验效率具有重要意义。

技术研发人员:张金库;孙吉瑞;陈红
受保护的技术使用者:张金库
技术研发日:2020.02.28
技术公布日:2020.06.26
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