基于多重PCR的靶向高通量测序的MDS检测试剂盒及制备方法与流程

文档序号:21172216发布日期:2020-06-20 17:14阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,包括:

提取25ng、10ng/uldna,并与5ul的pcr混合液和1ul的pcr反应液进行pcr程序运行,得到扩增子产物;

向所述扩增子产物中加入消化液和磁珠进行纯化,得到纯净的所述扩增子产物;

向纯化后的所述扩增子产物加入接头引物、pcr混合液和pcr反应液进行pcr反应,并利用磁珠得到纯净的扩增子文库。

2.如权利要求1所述的一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述提取25ng、10ng/uldna,并与5ul的pcr混合液和1ul的pcr反应液进行pcr程序运行,得到扩增子产物,包括:

利用dna提取试剂盒对待测样本进行提取,得到25ng、10ng/uldna,并向所述dna中加入5ul的pcr混合液、1ul的pcr反应液和各1ul上游引物、下游引物,同时用nuclease-freewater补足混合溶液至10ul后运行pcr程序,得到扩增子产物。

3.如权利要求2所述的一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述提取25ng、10ng/uldna,并与5ul的pcr混合液和1ul的pcr反应液进行pcr程序运行,得到扩增子产物,还包括:

将所述混合溶液进行预变性95℃15min后,再依次进行95℃30s、60℃90s和72℃90s共24个循环,并在72℃10min运行后,暂存于4℃中。

4.如权利要求3所述的一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,向所述扩增子产物中加入消化液和磁珠进行纯化,得到纯净的所述扩增子产物,包括:

向所述扩增子产物中加入消化液后,依次在pcr仪上进行37℃30min和80℃10min的程序运行,并结合磁珠回收所述扩增子产物后进行洗涤,得到纯净的扩增子产物。

5.如权利要求4所述的一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,向纯化后的所述扩增子产物加入接头引物、pcr混合液和pcr反应液进行pcr反应,并利用磁珠得到纯净的扩增子文库,包括:

向纯化后的所述扩增子产物中加入接头p5和接头p7后,再加入pcr混合液和pcr反应液进行pcr反应,并利用磁珠进行回收和洗涤后,得到纯净的扩增子文库。

6.一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒,其特征在于,所述基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒包括扩增子的全部引物、pcr混合液、pcr反应液、消化液、接头p5、接头p7、无水乙醇、磁珠和nuclease-freewater。


技术总结
本发明公开了一种基于多重PCR的靶向高通量测序的MDS检测试剂盒及制备方法,包括扩增子的全部引物、PCR混合液、PCR反应液、消化液、接头P5、接头P7、无水乙醇、磁珠和Nuclease‑Free Water,利用DNA提取试剂盒提取25ng、10ng/ulDNA后,并与5ul的PCR混合液和1ul的PCR反应液进行PCR程序运行,得到扩增子产物,然后向所述扩增子产物中加入消化液和磁珠进行纯化,得到纯净的所述扩增子产物,最后向纯化后的所述扩增子产物加入接头P5、接头P7、PCR混合液和PCR反应液后,进行PCR反应,并利用磁珠得到纯净的扩增子文库,特异性强、实验周期短并提高多基因突变筛查可行性。

技术研发人员:唐春花;邢宽;谢珍;张鹏;袁鸣;安雪茄;高婷婷;高彧辉
受保护的技术使用者:南京实践医学检验有限公司
技术研发日:2020.03.09
技术公布日:2020.06.19
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