1.一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,包括:
提取25ng、10ng/uldna,并与5ul的pcr混合液和1ul的pcr反应液进行pcr程序运行,得到扩增子产物;
向所述扩增子产物中加入消化液和磁珠进行纯化,得到纯净的所述扩增子产物;
向纯化后的所述扩增子产物加入接头引物、pcr混合液和pcr反应液进行pcr反应,并利用磁珠得到纯净的扩增子文库。
2.如权利要求1所述的一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述提取25ng、10ng/uldna,并与5ul的pcr混合液和1ul的pcr反应液进行pcr程序运行,得到扩增子产物,包括:
利用dna提取试剂盒对待测样本进行提取,得到25ng、10ng/uldna,并向所述dna中加入5ul的pcr混合液、1ul的pcr反应液和各1ul上游引物、下游引物,同时用nuclease-freewater补足混合溶液至10ul后运行pcr程序,得到扩增子产物。
3.如权利要求2所述的一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述提取25ng、10ng/uldna,并与5ul的pcr混合液和1ul的pcr反应液进行pcr程序运行,得到扩增子产物,还包括:
将所述混合溶液进行预变性95℃15min后,再依次进行95℃30s、60℃90s和72℃90s共24个循环,并在72℃10min运行后,暂存于4℃中。
4.如权利要求3所述的一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,向所述扩增子产物中加入消化液和磁珠进行纯化,得到纯净的所述扩增子产物,包括:
向所述扩增子产物中加入消化液后,依次在pcr仪上进行37℃30min和80℃10min的程序运行,并结合磁珠回收所述扩增子产物后进行洗涤,得到纯净的扩增子产物。
5.如权利要求4所述的一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒的制备方法,其特征在于,向纯化后的所述扩增子产物加入接头引物、pcr混合液和pcr反应液进行pcr反应,并利用磁珠得到纯净的扩增子文库,包括:
向纯化后的所述扩增子产物中加入接头p5和接头p7后,再加入pcr混合液和pcr反应液进行pcr反应,并利用磁珠进行回收和洗涤后,得到纯净的扩增子文库。
6.一种基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒,其特征在于,所述基于多重pcr的靶向高通量测序的mds检测试剂盒包括扩增子的全部引物、pcr混合液、pcr反应液、消化液、接头p5、接头p7、无水乙醇、磁珠和nuclease-freewater。