1.一种重组鳗弧菌tolc蛋白,其特征在于,所述重组鳗弧菌tolc蛋白的氨基酸序列如seqidno.1所示,所述重组鳗弧菌tolc蛋白用于增强水产动物对鳗弧菌的免疫。
2.根据权利要求1所述的重组鳗弧菌tolc蛋白,其特征在于,编码所述重组鳗弧菌tolc蛋白的核苷酸序列如seqidno.2所示。
3.根据权利要求1或2所述的重组鳗弧菌tolc蛋白的制备方法,其特征在于,包括下述步骤:(1)以鳗弧菌c312为模板,采用f1/r1为引物进行pcr扩增外膜蛋白tolc基因;(2)将步骤(1)所得pcr扩增产物与peasy-t1simple载体连接,连接液转化大肠杆菌dh5a,筛选转化子提取质粒,即为质粒为tolc-ts;(3)再将所述质粒tolc-ts用限制性内切酶smai酶切后,纯化、回收tolc基因片段,并构建重组表达质粒pettolc;(4)将所述重组表达质粒pettolc转化大肠杆菌bl21(de3),表达即为seqidno.1中的氨基酸序列所示的重组鳗弧菌tolc蛋白;
所述引物为f1:5’-cccgggatgaattggatgaacatgaaaacg–3’,带有smai酶切位点;r1:5’-cccggggtactccaccgcatcatgc-3’,带有smai酶切位点;
所述鳗弧菌c312保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc,保藏编号为:cgmccno.6250。
4.一种鳗弧菌疫苗,其特征在于,所述鳗弧菌疫苗的原料包括如权利要求1或2所述的重组鳗弧菌tolc蛋白。
5.根据权利要求4所述的鳗弧菌疫苗,其特征在于,采用腹腔注射所述鳗弧菌疫苗的方式进行免疫,所述重组鳗弧菌tolc蛋白的用量为10μg/次,免疫一次后采用lx107cfu/ml的鳗弧菌对被免疫水产动物进行攻毒,相对免疫保护效率可达77%。
6.根据权利要求4或5所述的鳗弧菌疫苗,其特征在于,所述鳗弧菌疫苗的原料还包括佐剂。
7.根据权利要求6所述的鳗弧菌疫苗,其特征在于,所述佐剂为al(oh)3,所述佐剂由5wt%naoh和5wt%al2(so4)3以2:5的体积比混合、离心后,将离心所得沉淀悬浮于pbs中至0.2mg/ml制备得到;所述鳗弧菌疫苗中重组鳗弧菌tolc蛋白与佐剂的质量比为1:1。
8.根据权利要求1或2所述的重组鳗弧菌tolc蛋白在制备增强水产动物免疫力的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的重组鳗弧菌tolc蛋白的应用,其特征在于,所述水产动物包括但不限于鱼类、虾类和贝类。
10.根据权利要求9所述的重组鳗弧菌tolc蛋白的应用,其特征在于,所述水产动物为牙鲆。