1.牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌分离鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
s1，细菌选择培养：将采集的待测样本与ec肉汤培养基进行首次增菌，然后将增菌液以1:8～12的比例转移至新鲜的ec肉汤培养基进行二次增菌；
s2，stec分离：利用pcr扩增并结合麦康凯选择平板对s1中增菌后的样本进行stec分离；
s3，stec鉴定：将s2中分离得到的阳性单克隆菌株活化于lb平板，然后对活化的菌株进行stx1/2基因扩增、凝胶电泳及成像，显示阳性的，即为stec菌株；
s4，stec保藏，对s3中经过鉴定为stec的菌株进行菌种保藏。
2.根据权利要求1所述的牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌的分离鉴定方法，其特征在于，所述的s1中，首次增菌的具体方法为：将收集的样本称取后加入无菌ec肉汤，振荡均匀，然后培养，得到首次增菌液；其中，样本和无菌ec肉汤的质量比为1:8～12，振荡时间10～20s；
二次增菌的具体方法为，将首次增菌液振荡均匀后，加入无菌ec肉汤，所述的首次增菌液与无菌ec肉汤的质量比为1:8～12，振荡均匀后进行培养；
首次增菌及二次增菌的培养温度都为41～43℃，将混匀的样本悬浮液放置摇床，在转速为180～200rpm的条件下，培养18～24h。
3.根据权利要求1所述的牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌的分离鉴定方法，其特征在于，所述的s2的具体操作为：
s2.1，利用pcr扩增stec所共有的志贺毒素基因(stx1/2)，然后经过凝胶电泳及成像判断牛粪样本中是否携带stec菌株，
s2.2，将s2.1中判断为阳性及疑似样本的菌液分别稀释涂布于麦康凯平板上，然后在每个样本中挑取20个疑似菌落涂抹于lb平板四个区域，
s2.3，在s2.2中所述的四个区域中，每个区域5株菌混合并进行stx1/2基因扩增，根据凝胶电泳及成像来判断每个区域中的5个菌落中是否存在产志贺毒素菌株，所述基因扩增采用pcr扩增方法；
s2.4，经s2.3检测判断为阳性的区域，则继续将该阳性区域中的每株菌进行stx1/2基因扩增，进而判断哪个菌落为产志贺毒素菌株；所述基因扩增采用pcr扩增方法。
菌液稀释涂布时，阳性及疑似样本的稀释倍数是10-4，10-5和10-6，涂布量为48～52μl；
将菌液滴于麦康凯平板的五个区域，五个区域分别为：左上，左下，右上，右下和中部区域。涂布滴加菌液于五个区域，目的是将菌液均匀涂布；
进行pcr扩增时使用的dna模板均是通过煮沸法制得。
4.根据权利要求3所述的牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌分离鉴定方法，其特征在于，所述的s2.2中菌落挑取具体操作为：选取菌落数在30～300之间的麦康凯平板进行挑菌，一个样本挑取一个平板，将该平板用十字线划分为四个区域；四个区域分别为：左上，左下，右上和右下，十字线划分四个区域，目的是提高目的菌株的挑取概率，在上述的四个区域中，各挑取5个单菌落，置于lb平板对应的四个区域，区域编号为1，2，3和4。
5.根据权利要求1所述的牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌分离鉴定方法，其特征在于，所述的s3的具体步骤为：
s3.1，对已经确定的阳性区域进行单克隆菌株鉴定，具体步骤为：
s3.1.1对经s2中鉴定为阳性区域的5个单克隆菌落进行编号；用无菌牙签取少量的菌体涮于500μl的无菌ddh2o，并做好编号；
s3.1.2涡旋振荡10～20s，13000rpm离心5min，弃去上清，重复两次；将清洗两次的菌体，加入300μl的无菌ddh2o，吹吸混匀，并涡旋振荡10～20s；
s3.1.3将准备好的菌悬液放入事前预热好的金属加热器，100℃加热煮沸15min，然后将煮沸后的菌液于4℃冰箱放置5min；
s3.1.4将煮沸冷却后的菌液与离心机，13000rpm离心10min，吸取200μl上清即为dna模板，然后进行pcr扩增操作，若模板不立即使用，保存于-20℃冰箱中；
s3.2，进行stec鉴定：将扩增后阳性的单克隆菌株活化于lb平板，37℃恒温培养箱培养18～24h，并利用pcr扩增stx1/2基因，再利用凝胶电泳及成像来确定得到的即为产志贺毒素大肠埃希氏菌。
6.根据权利要求1所述的牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌分离鉴定方法，其特征在于，所述的s4具体为：用棉签将菌体涮于装有1.2ml40％lb-甘油的冻存管中，于-80℃的冰箱进行保存。
7.根据权利要求1-6任一项所述的牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌的分离鉴定方法，其特征在于，所述的dna模板的制备方法为：
(1)将金属加热器开至100℃，稳定30min；
(2)取1ml二次增菌液于1.5mlep管中13000rpm离心5min，弃上清；
(3)加500μl无菌ddh2o将菌体沉淀重悬，13000rpm离心5min，弃去上清，重复两次；
(4)将清洗两次的菌体，加300μl无菌ddh2o重悬并用涡旋振荡器振荡10～20s；
(5)将准备好的菌悬液放入事前预热好的金属加热器，加热煮沸15min；
(6)将煮沸后的菌液于4℃冰箱放置5min；
(7)将冷却后煮沸的菌液与离心机13000rpm离心10min，吸取200μl上清即为dna模板，若模板不立即使用，保存于-20℃冰箱中。
8.根据权利要求1-6任一项所述的牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌分离鉴定方法，其特征在于，所述的pcr扩增时，反应体系和反应条件如下：pcr反应体系：dna模板5μl，10×pcrbuffer2.5μl，mgcl21.5μl，dntp2μl，taqdna聚合酶0.125μl，上下游引物各为0.3μl，ddh2o13.275μl。pcr反应条件：95℃预变性5min；94℃变性30s、58℃退火30s、72℃延伸45s，30个循环；72℃终延伸10min，4℃保存。
9.根据权利要求1-6任一项所述的牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌分离鉴定方法，其特征在于，所述的pcr扩增操作的具体步骤为，
(a)按照反应体系和样本数量计算试剂总用量(注：通常多算1-2个样的体系)
(b)混合体系的配制：试剂全部溶解后，振荡混匀。根据反应体系按步加入，混匀并且离心，置于冰盒上备用；
(c)分装：将pcr管和已配好的体系都置于冰上，先加入事先配好的体系20μl，然后将5μldna模板加入对应标号的pcr管中，记录编号；
(d)pcr扩增：将pcr管管壁上的溶液进行短暂离心，小心取出，按顺序放入pcr仪，再次确认每个pcr管盖子已盖好。设定pcr程序进行扩增。
10.根据权利要求1-6任一项所述的牛粪中非o157产志贺毒素大肠埃希氏菌分离鉴定方法，其特征在于，所述的凝胶电泳及成像方法的具体操作步骤为：
(i)电泳：配制1％琼脂糖，微波煮沸三次，待冷却到50℃，加入eb染料混匀，缓慢的倒入事先插好梳子的胶板，半小时后拔出梳子，然后每孔上样5μlpcr产物，缓慢放入0.5×tris-borate-edta缓冲区，最后设定程序120v，90ma电泳35min；
(ii)成像：将电泳结束的凝胶放入成像系统中成像，根据成像结果对应的mark区间，是否与引物大小相一致来判断基因的检出，并做好记录。