用于高通量测序的文库构建方法及高通量测序方法与流程

文档序号:21848678发布日期:2020-08-14 17:19阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于高通量测序的文库构建方法,其特征在于,包括:

(1)将至少两种dna样品分别进行步骤(1-1)至(1-4)的操作:

(1-1)将所述dna样品进行末端修复,以便获得经过末端修复的dna片段;

(1-2)在所述经过末端修复的dna片段的3’末端添加碱基a,以便获得具有粘性末端a的dna片段;

(1-3)将所述具有粘性末端a的dna片段与接头相连,以便获得连接产物;

(1-4)将所述连接产物进行预扩增及纯化,以便得到预扩增产物;

(2)将分别得到的所述预扩增产物进行混合,并将得到的总预扩增产物与探针进行杂交捕获,以便得到目的片段;

(3)将所述目的片段进行扩增及纯化,以便得到混合文库;

其中,基于3μg所述总预扩增产物,所述探针的添加量为2~4μl。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,进行杂交捕获的所述总预扩增产物的体积为14μl,

当进行所述混合所得到的混合液体积大于14μl时,将所述混合液浓缩至14μl,以便得到所述总预扩增产物;

当进行所述混合所得到的混合液体积小于14μl时,用无酶水将所述混合液补足至14μl,以便得到所述总预扩增产物。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,针对din小于4的样品,所得混合文库中所述样品的文库的捕获效率为10~20%,umi利用率为32~45%,文库复杂度为10~14%,平均测序深度为550~1200。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,针对din不小于4且小于6的样品,所得混合文库中所述样品的文库的捕获效率为28~33%,umi利用率为46~50%,文库复杂度为12.5~13%,平均测序深度为2400~2600。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,针对din大于6且不大于10的样品,所得混合文库中所述样品的文库的捕获效率为35~40%,umi利用率为38~52%,文库复杂度为12~14%,平均测序深度为3200~4000。

6.一种高通量测序方法,其特征在于,包括:

利用权利要求1~5任一项所述高通量测序建库方法得到混合文库;

将所述混合文库上机测序。


技术总结
本发明提出了用于高通量测序的文库构建方法,该方法包括:(1)将至少两种DNA样品进行步骤(1‑1)至(1‑4)的操作:(1‑1)将DNA片段进行末端修复,以便获得经过末端修复的DNA片段;(1‑2)在经过末端修复的DNA片段的3’末端添加碱基A,以便获得具有粘性末端A的DNA片段;(1‑3)将具有粘性末端A的DNA片段与接头相连,以便获得连接产物;(1‑4)将连接产物进行预扩增及纯化,以便得到预扩增产物;(2)将至少两种预扩增产物进行混合,并将得到的总预扩增产物与探针进行杂交捕获,以便得到目的预扩增产物;(3)将目的预扩增产物进行扩增及纯化,以便得到混合文库。本发明的文库构建方法可以有效地提高建库效率,降低建库成本,适于规模化应用。

技术研发人员:毛瑞芳;王量
受保护的技术使用者:杭州瑞普基因科技有限公司
技术研发日:2020.04.29
技术公布日:2020.08.14
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