慢病毒感染人表皮角质细胞株及其构建方法和应用与流程

文档序号:21887341发布日期:2020-08-18 17:26阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种shrna片段,所述shrna片段序列如seqidno:1或seqidno:2所示。

2.一种含有权利要求1所述的shrna片段的重组质粒。

3.根据权利要求2所述的重组质粒,其特征在于,所述重组质粒是将shrna片段与质粒pgmlv-sc5相连得到。

4.权利要求1所述的shrna片段、权利要求2或3所述的重组质粒在基因敲低方面的应用。

5.一种重组菌株,其特征在于,所述重组菌株含有权利要求1所述的shrna片段或权利要求2所述的重组质粒。

6.权利要求3所述的重组质粒的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)设计并合成如权利要求1所述的shrna片段;

2)shrna的退火得到目标片段;

3)shrna载体的酶切及回收;

4)将步骤3)的酶切载体与步骤2)的目标片段连接得到重组载体。

7.权利要求5所述的重组菌株的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:将权利要求3所述的重组质粒导入到宿主细胞中得到。

8.根据权利要求7所述的重组菌株的构建方法,其特征在于,所述具体步骤为:

1)构建含有权利要求1所述的shrna片段的重组表达载体;

2)将步骤1)获得的重组表达载体感染宿主细胞hacat获得感染细胞株;

3)将步骤2)获得的感染细胞株应用嘌呤霉素筛选培养基定时更换培养基并长期筛选培养,获得阳性细胞株。

9.根据权利要求8所述的重组菌株的构建方法,其特征在于,所述步骤3)的含有嘌呤霉素的筛选培养基为含有2ug/ml的嘌呤霉素的10%的胎牛血清dmem培养基。

10.权利要求1所述的shrna片段、权利要求2或3所述的重组质粒、权利要求5所述的重组菌株在细胞增殖或药物筛选方面的应用。


技术总结
本发明公开了一种shRNA片段。本发明还公开了一种含有所述的shRNA的重组质粒。本发明还公开了一种重组菌株。本发明还公开了一种重组质粒的构建方法和重组菌株的构建方法。本发明的细胞株遗传稳定性强,经过30次以上传代仍保留转入基因不发生丢失;本发明对于PPP2CA的敲低效果显著,可以有效降低其在mRNA和蛋白水平的表达;本发明细胞株具有良好的实验表型,阳性细胞株的增殖能力显著高于对照组细胞株。

技术研发人员:方超;陈建泉;张敏
受保护的技术使用者:南京市江宁医院
技术研发日:2020.06.11
技术公布日:2020.08.18
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1