几丁质酶基因、几丁质酶及其制备方法和应用与流程

文档序号:23092168发布日期:2020-11-27 12:46阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种几丁质酶基因chiam,其特征在于,其核苷酸序列如seqidno:1所示。

2.一种几丁质酶chiam,其特征在于,所述几丁质酶chiam是权利要求1所述几丁质酶基因chiam编码的蛋白,其氨基酸序列如seqidno:2所示。

3.一种重组表达载体,其特征在于,包括权利要求1所述的几丁质酶基因chiam。

4.一种重组表达菌株,其特征在于,包括权利要求3所述的重组表达载体。

5.一种几丁质酶chiam的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

提供几丁质酶基因chiam、表达载体和表达菌株;

对所述几丁质酶基因chiam进行扩增,所得扩增产物与所述表达载体进行连接,得到重组表达载体;

将所述重组表达载体转入表达菌株,得到重组表达菌株;

对所述重组表达菌株进行培养,得到几丁质酶chiam;

其中,所述几丁质酶基因chiam的核苷酸序列如seqidno:1所示,所述几丁质酶chiam的氨基酸序列如seqidno:2所示。

6.根据权利要求5所述几丁质酶chiam的制备方法,其特征在于,将所述几丁质酶基因chiam进行扩增的步骤中,用于扩增的引物包括正向引物和反向引物,所述正向引物的核苷酸序列如seqidno:3所示,所述反向引物的核苷酸序列如seqidno:4所示。

7.根据权利要求5所述几丁质酶chiam的制备方法,其特征在于,所述表达载体为毕赤酵母表达载体。

8.根据权利要求5所述几丁质酶chiam的制备方法,其特征在于,所述表达菌株为毕赤酵母表达菌株。

9.权利要求2所述几丁质酶chiam或权利要求5-8任一项所述几丁质酶chiam的制备方法制备得到的几丁质酶chiam在水解几丁质中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,在所述水解几丁质的反应中,所述反应的温度为30℃-60℃;和/或

所述反应的ph为3.0-8.0。


技术总结
本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种几丁质酶基因、几丁质酶及其制备方法和应用。本发明几丁质酶基因chiam的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,其是通过对来源于地中海拟无枝菌酸菌Amycolatopsis mediterranei几丁质酶的序列进行综合优化得到。本发明几丁质酶ChiAm的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,其不仅丰富了几丁质酶的种类和来源途径,而且酶比活为48U/mg,在较宽的温度范围和较宽的pH范围内均表现出良好的稳定性,具有良好的应用前景和产业价值。

技术研发人员:王建荣;祝木金;王平;余思;曹革
受保护的技术使用者:深圳润康生态环境股份有限公司
技术研发日:2020.08.10
技术公布日:2020.11.27
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