一种WPRE突变体病毒载体及其应用的制作方法

文档序号:22435336发布日期:2020-10-02 10:25阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种wpre突变体病毒载体,其特征在于,包括wpre突变体-03,所述wpre突变体-03的核苷酸序列如seqidno:3所示。

2.根据权利要求1所述的wpre突变体病毒载体,其特征在于,所述wpre突变体病毒载体为wpre突变体慢病毒载体或wpre突变体腺相关病毒载体。

3.一种病毒颗粒,其特征在于,包含权利要求1所述的wpre突变体病毒载体。

4.一种细胞,其特征在于,所述细胞包含权利要求1所述的wpre突变体病毒载体。

5.根据权利要求1所述的wpre突变体病毒载体在提高病毒滴度中的应用。

6.一种利用权利要求1所述的wpre突变体病毒载体进行病毒包装的方法,其特征在于,包括:

(1)培养待转染细胞;

(2)制备含有权利要求1所述的wpre突变体病毒载体的dna-转染试剂复合体;

(3)将dna-转染试剂复合体加入到细胞培养容器中,5-7h后弃去培养基,再加入新鲜的完全培养基培养。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述细胞为293t细胞。

8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述完全培养基为opti-mem培养基。


技术总结
本发明属于病毒载体领域,具体涉及一种WPRE突变体病毒载体及其应用,所述WPRE突变体病毒载体包括WPRE突变体‑03,其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,其构建方法包括:S1:制备随机突变目的片段;S2:随机突变目的片段与能表达荧光蛋白的目的载体连接;S3:涂平板后流式细胞仪筛选细胞;S4:抽提筛选得到的细胞基因组,使用PCR技术扩增WPRE区域;S5:连接T载体后涂板获得克隆细胞,进行测序,得到WPRE突变体病毒载体。本发明中发明人通过大量的创新性劳动,设计并构建了一个WPRE随机点突变病毒文库,通过文库筛选发现一种新的WPRE突变体病毒载体,其对病毒包装有明显促进作用。

技术研发人员:杨兴林;贾国栋;潘讴东;杨佳丽;马佩敏;夏清梅
受保护的技术使用者:和元生物技术(上海)股份有限公司
技术研发日:2020.08.26
技术公布日:2020.10.02
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