1.一种脐带间充质干细胞重编程为肝脏细胞的方法,其特征在于,其包括以下步骤:
获取脐带间充质干细胞;
对所述脐带间充质干细胞进行预处理2d;
利用成肝诱导组合物对经过预处理的脐带间充质干细胞进行成肝诱导7d;
利用第一成熟诱导组合物对经过成肝诱导处理的脐带间充质干细胞进行第一次成熟诱导7d,获得肝脏细胞;
利用第二成熟诱导组合物对所述肝脏细胞进行第二次成熟诱导12~20d,获得功能性肝脏细胞。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述脐带间充质干细胞进行预处理之前,体外培养至对数生长期。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述脐带间充质干细胞进行预处理之前,在无血清条件下进行体外培养。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述预处理的试剂包括20ng/ml的表皮生长因子和10ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子;
所述成肝诱导组合物包括30ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子、20ng/ml的肝细胞生长因子和0.61g/l的烟酰胺;
所述第一次成熟诱导组合物包括40ng/ml的itspremix的混合剂、10ng/ml的重组人骨保护素-m和1umol/l的地塞米松;
所述第二次成熟诱导组合物包括40ng/ml的its+premix、40ng/ml的重组人骨保护素-m、1umol/l的地塞米松、10umol/l的人源γ分泌酶复合物抑制剂和10umol/l的小分子抑制剂sb431542。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,光学显微镜下,所述功能性肝脏细胞为不规则圆形或多边形,核仁边界清晰。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述功能性肝脏细胞的肝脏特异性基因表达率高于所述肝脏细胞。
7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述肝脏特异性基因包括甲胎蛋白、白蛋白和细胞角蛋白。
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述功能性肝脏细胞的糖原累积功能鉴定结果为阳性。
9.如权利要求1~8所述的方法在制备肝脏类器官中的应用。
10.一种肝脏类器官,其特征在于,其包括:脱细胞基质水凝胶、干细胞和肝脏细胞,所述干细胞和肝脏细胞在脱细胞基质水凝胶中分布。
11.如权利要求10所述的肝脏类器官,其特征在于,所述脱细胞基质水凝胶通过脐带组织制备;所述干细胞为全能干细胞、多能干细胞或单能干细胞;所述肝脏细胞通过诱导脐带间充质干细胞分化获得,或者所述肝脏细胞来源于原代培养的肝脏细胞或传代培养的肝脏细胞系。
12.一种肝脏类器官的制备方法,其特征在于,其包括以下步骤:
将脱细胞基质水凝胶稀释液、干细胞和肝脏细胞用无血清培养基混合均匀;
在培养容器中静置培养至所述脱细胞基质水凝胶凝固;
确定凝固后的所述脱细胞基质水凝胶中的细胞存活之后继续培养,获得肝脏类器官。
13.如权利要求12所述的方法,其特征在于,所述脱细胞基质水凝胶的稀释液进行混合之前调节ph到7~7.5。
14.如权利要求12所述的方法,其特征在于,所述脱细胞基质水凝胶稀释液、干细胞和肝脏细胞的混合比例为:每12ml无血清培养基中加入1×107个干细胞、1×106个肝脏细胞和3ml脱细胞基质水凝胶稀释液。
15.如权利要求12所述的方法,其特征在于,通过染色法确定所述脱细胞基质水凝胶中的重编程肝脏细胞和正常肝脏细胞存活的情况。
16.如权利要求12所述的方法,其特征在于,所述脱细胞基质水凝胶中的细胞存活之后,继续培养6~7d,获得肝脏类器官。