1.鉴别柿树性别的分子标记引物,其特征在于,包括正向引物和反向引物,其序列分别为序列表中seqidno.1和seqidno.2的核苷酸序列。
2.鉴别柿树性别的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)提取柿树叶片dna;
(2)利用权利要求1所述的正向引物和反向引物对所提取的dna进行pcr扩增;
(3)pcr扩增产物经琼脂糖凝胶电泳进行分离并拍照;
(4)根据电泳图中的条带情况对柿树进行性别鉴定。
3.根据权利要求2所述的鉴别柿树性别的方法,其特征在于,在步骤(1)中:
(1-1)用电子天平迅速称取约0.5g的柿树幼嫩叶片于研钵中,利用液氮将样品充分研磨成粉末后,快速转入盛有预热至65℃的800μl2×溴化十六烷基三甲铵ctab缓冲液的2ml离心管中,65℃水浴提取30min;
(1-2)加入等体积的氯仿和异戊醇混合液,其中氯仿和异戊醇体积比为24:1,涡旋混匀后在12000rpm的转速下离心10min,将上清液转入新的离心管,再次加入等体积的氯仿和异戊醇混合液,涡旋混匀后在12000rpm的转速下离心10min;取上清液于新的离心管后,加入2倍体积且预冷至-20℃的乙醇,缓慢摇匀至dna絮状沉淀析出;
(1-3)10000rpm离心10min,倒去上清液;用体积分数为70%的乙醇清洗沉淀物2-3次;室温放置5min使沉淀物自然风干后,加入预热至65℃的50μl的ddh2o,即得到柿基因组dna;
(1-4)利用1.0%琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度计法检测dna样品的纯度和浓度,样品检测合格后置于-20℃冰箱保存备用。
4.根据权利要求2所述的鉴别柿树性别的方法,其特征在于,在步骤(2)中,pcr扩增的程序为:94℃预变性3min;94℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸1min,重复循环30次;72℃延伸5min。
5.根据权利要求2所述的鉴别柿树性别的方法,其特征在于,在步骤(2)中,pcr扩增的体系为:taqdna聚合酶12.5μl;10μm上游引物1μl;10μm下游引物1μl;模板dna1μl;加入ddh2o补齐到25μl。
6.根据权利要求2所述的鉴别柿树性别的方法,其特征在于,在步骤(3)中,pcr扩增产物用1.0wt%的琼脂糖凝胶电泳检测;电泳条件为150v、400ma,电泳时间为20min。
7.根据权利要求2所述的鉴别柿树性别的方法,其特征在于,电泳凝胶上268bp处显示1条条带的为开雄花的完全雄株或雌雄同株,无条带的为不开雄花的完全雌株。