一种抗草甘膦转基因大豆的培育方法与流程

文档序号:23860399发布日期:2021-02-05 16:18阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种抗草甘膦转基因大豆的培育方法,其特征在于,将外源基因dna片段插入天隆1号大豆基因组第19号染色体内得到转基因大豆,插入位点的左边界侧翼序列如seq id no:1所示,插入位点的右边界侧翼序列如seq id no:2所示;所述外源基因dna片段包含草甘膦抗性基因。2.根据权利要求1所述的培育方法,其特征在于,所述外源基因dna片段核苷酸序列如seq id no:3所示。3.根据权利要求1所述的培育方法,其特征在于,所述外源基因dna片段用抗草甘膦基因i.variabilis-mepsps构建植物表达载体所得。4.根据权利要求1所述的培育方法,其特征在于,所述外源dna片段插入过程为通过农杆菌介导的遗传转化方法,将外源dna片段导入到天隆1号大豆受体中。5.一种权利要求1所述的培育方法获得的转基因大豆外源基因的检测方法,其特征在于,利用gmcyp2基因作为内参基因,设计引物gmcyp2-rtf与gmcyp2-rtr进行质量检测,设计引物iva-epsps-rtf与iva-epsps-rtr进行外源基因表达量检测;所述引物gmcyp2-rtf与gmcyp2-rtr的核苷酸序列如seq id no:4-5所示;所述设计引物iva-epsps-rtf与iva-epsps-rtr的核苷酸序列如seq id no:6-7所示。6.一种权利要求1所述的培育方法获得的转基因大豆外源基因位点的分析方法,其特征在于,利用反向pcr方法进行两轮pcr分析,然后进行位点验证得到侧翼序列,第一轮pcr的引物核苷酸序列如seq id no:8-9所示;第二轮pcr的引物如seq id no:10-11所示。7.根据权利要求6所述的外源基因位点的分析方法,其特征在于,所述位点验证利用引物gm1-v1f与gm17-glbr进行左边界侧翼序列验证,利用gm1-v2f与gm17-grbr进行右边界侧翼序列验证;所述引物gm1-v1f与gm17-glbr的核苷酸序列如seq id no:12-13所示;所述引物gm1-v2f与gm17-grbr的核苷酸序列如seq id no:14-15所示。8.根据权利要求7所述外源基因位点的分析方法,其特征在于,所述左边界侧翼序列验证结果在520bp处有特异性条带,右边界侧翼序列验证结果在592bp处有特异性条带。
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