1.一种同时检测bk病毒和jc病毒的引物组,其特征在于,所述的引物组是基于如seqidno.1和seqidno.2所示的核苷酸序列设计的。
2.根据权利要求1所述的同时检测bk病毒和jc病毒的引物组,其特征在于,所述引物组包括上游引物bj-f和下游引物bj-r,上游引物bj-f核苷酸序列如seqidno.3所示,下游引物bj-r核苷酸序列如seqidno.4所示。
3.一种同时检测bk病毒和jc病毒的探针组,其特征在于,所述的探针组是基于如seqidno.1和seqidno.2所示的核苷酸序列设计的。
4.根据权利要求3所述的同时检测bk病毒和jc病毒的探针组,其特征在于,所述探针组包括探针bk-p和探针jc-p,探针bk-p的核苷酸序列如seqidno.5所示,探针jc-p的核苷酸序列如seqidno.6所示。
5.根据权利要求3或4所述的同时检测bk病毒和jc病毒的探针组,其特征在于,所述探针bk-p和探针jc-p各自的5’端修饰有荧光报告基团,3’端修饰有荧光淬灭基团;
可选的,所述的荧光报告基团选自6-羧基荧光素、六氯-6-甲基荧光素、vic荧光染料、四氯-6-羧基荧光素、羧基-x-罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、2,7-二甲基-4,5-二氯-6-羧基荧光素、磺酰罗丹明、6-羧基-4’,5-二氯-2’,7’-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯、花菁3、花菁5或花菁5.5中的至少一种;
可选的,所述荧光淬灭基团为mgb。
6.权利要求1或2所述的同时检测bk病毒和jc病毒的引物组和/或权利要求3-5任一项所述的同时检测bk病毒和jc病毒的探针组在制备检测bk病毒、jc病毒或同时检测bk病毒和jc病毒的产品中的用途;
可选的,所述的产品包括检测试剂和试剂盒。
7.一种同时检测bk病毒和jc病毒的荧光定量pcr试剂盒,其特征在于,包括权利要求1或2所述的同时检测bk病毒和jc病毒的引物组和/或权利要求3-5任一项所述的同时检测bk病毒和jc病毒的探针组;
可选的,所述上游引物bj-f、下游引物bj-r、探针bk-p和探针jc-p的摩尔比为1:1:0.5:0.5。
8.根据权利要求7所述的同时检测bk病毒和jc病毒的荧光定量pcr试剂盒,其特征在于,还包括pcrmastermix、阴性质控品、bkvdna标准品和jcvdna标准品中的至少一种;
可选的,所述阴性质控品为无菌水;
可选的,所述bkv标准品为克隆有如seqidno.1所示的核苷酸序列的重组质粒,设有6个浓度梯度,浓度依次为5×102copies/ul、5×103copies/ul、5×104copies/ul、5×105copies/ul、5×106copies/ul、5×107copies/ul;
可选的,所述jcv标准品为克隆有如seqidno.2所示的核苷酸序列的重组质粒,设有6个浓度梯度,浓度依次为5×102copies/ul、5×103copies/ul、5×104copies/ul、5×105copies/ul、5×106copies/ul、5×107copies/ul。
9.根据权利要求7或8所述的同时检测bk病毒和jc病毒的荧光定量pcr试剂盒,其特征在于,还包括pcr扩增反应体系,以25ul为计:
pcrmastermix,12.5ul;
上游引物bj-f,浓度为10um,1ul;
下游引物bj-r,浓度为10um,1ul;
探针bk-p,浓度为10um,0.5ul;
探针jc-p,浓度为10um,0.5ul;
dna模板,1ul;
无菌水补足至25ul。
10.一种同时检测bk病毒和jc病毒的荧光定量pcr方法,其特征在于,包括:
利用权利要求1或2所述的同时检测bk病毒和jc病毒的引物组、权利要求3-5任一项所述的同时检测bk病毒和jc病毒的探针组和/或权利要求7-9任一项所述的同时检测bk病毒和jc病毒的荧光定量pcr试剂盒对待测样品进行荧光定量pcr扩增反应;
可选的,所述荧光定量pcr扩增反应条件为:95℃预变性5min;95℃变性10s,60℃退火延伸40s,40个循环;
可选的,每个循环中在60℃收集荧光信号;
可选的,还包括荧光定量pcr标准曲线制定的步骤:将bkvdna标准品和jcvdna标准品分别利用权利要求1或2所述的同时检测bk病毒和jc病毒的引物组、权利要求3-5任一项所述的同时检测bk病毒和jc病毒的探针组和/或权利要求7-9任一项所述的同时检测bk病毒和jc病毒的荧光定量pcr试剂盒对待测样品进行荧光定量pcr扩增反应,以各标准品对应的ct值为纵坐标,以各标准品的浓度为纵坐标,绘制荧光定量pcr标准曲线。