一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒及检测方法与流程

文档序号:24241050发布日期:2021-03-12 13:15阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测诺如病毒gi和gii基因型的试剂盒,其特征在于,包括:

a液,所述a液为酶液mix,包括taq酶、udg酶以及rnainhibitor;

b液,所述b液即2xonestepbuffer包括诺如病毒gi和gii基因型特异性引物和特异性检测探针与10xtaqbuffer以及d(u)ntp。

2.如权利要求1所述的一种检测诺如病毒gi和gii基因型的试剂盒,其特征在于,所述诺如病毒gi基因型特异性引物和特异性检测探针分别为:

gi-primer-f:5'-atgttggtgaccaacaagctgtatcatggtctgctaatg-3'(seqidno.1);

gi-primer-r:5'-gcgagtggaccccaatagttttaccttgcc-3'(seqidno.2);

gi-probe:

5'-[fam-dt]tggagtgaacattggcgttagtgatctgaccactgtccgtggacca[bhq1-dt]-3'(seqidno.3);

所述诺如病毒gii基因型特异性引物和特异性检测探针分别为:

gii-primer-f:5'-gtgacgccaacccatctgatgggtccgcagccaacct-3'(seqidno.4);

gii-primer-r:5'-gcacttcaaaaccacctgcataaccgttgt-3'(seqidno.5);

gii-probe:

5'-[rox-dt]ggtcaacaatgaggttatggctctggagcccgttgttggtgccgcca[bhq2-dt]-3'(seqidno.6)。

3.如权利要求1所述的一种检测诺如病毒gi和gii基因型的试剂盒,其特征在于,所述10xtaqbuffer包括:

200mm的tris-hcl,20mm的(nh4)2so4,300mm的kcl,40mm的mgso4,1%的tritonx-100,ph为8.0。

4.一种利用权利要求1至3任一项所述的试剂盒检测诺如病毒gi和gii基因型的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)提取待测样品的rna;

(2)配制反应体系:反应体系为30μl,配置时依次向反应管中加入15μlb液,3.5μlnucletide-freewate,1.5μla液,震荡混匀、离心备用;

(3)向反应管中加入rna样本10μl,置于混匀器上充分混匀后离心;

(4)反应过程:将反应管置于实时荧光定量pcr仪内,50℃恒温孵育15min,95℃15s,55℃30s为1个循环采集1次荧光信号,共40个循环,整个反应过程共60min。


技术总结
本发明提供一种检测诺如病毒GI和GII基因型的试剂盒,包括:A液,所述A液为酶液Mix,包括Taq‑WT酶液、UDG酶以及RNA inhibitor;B液,所述B液即2X One Step Buffer包括诺如病毒GI和GII基因型特异性引物和特异性检测探针与10X Taq buffer以及d(U)NTP。通过使用优化的PCR扩增buffer,使得Taq酶具有反转录酶活性与DNA聚合酶活性,由同一个酶完成诺如病毒核酸实时荧光定量PCR检测,其灵敏度与特异性与传统的Real‑time RT‑PCR法相当,但检测时间缩短三分之一,适用于即时快速诊断,降低原料成本和时间成本。

技术研发人员:谭毅彬;钱凯;林冰;胡凯毅;谭华琳;王坤;张磊;马柳安;黄小玲
受保护的技术使用者:深圳市碳域科技有限公司
技术研发日:2020.12.04
技术公布日:2021.03.12
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