1.一种检测诺如病毒gi和gii基因型的试剂盒,其特征在于,包括:
a液,所述a液为酶液mix,包括taq酶、udg酶以及rnainhibitor;
b液,所述b液即2xonestepbuffer包括诺如病毒gi和gii基因型特异性引物和特异性检测探针与10xtaqbuffer以及d(u)ntp。
2.如权利要求1所述的一种检测诺如病毒gi和gii基因型的试剂盒,其特征在于,所述诺如病毒gi基因型特异性引物和特异性检测探针分别为:
gi-primer-f:5'-atgttggtgaccaacaagctgtatcatggtctgctaatg-3'(seqidno.1);
gi-primer-r:5'-gcgagtggaccccaatagttttaccttgcc-3'(seqidno.2);
gi-probe:
5'-[fam-dt]tggagtgaacattggcgttagtgatctgaccactgtccgtggacca[bhq1-dt]-3'(seqidno.3);
所述诺如病毒gii基因型特异性引物和特异性检测探针分别为:
gii-primer-f:5'-gtgacgccaacccatctgatgggtccgcagccaacct-3'(seqidno.4);
gii-primer-r:5'-gcacttcaaaaccacctgcataaccgttgt-3'(seqidno.5);
gii-probe:
5'-[rox-dt]ggtcaacaatgaggttatggctctggagcccgttgttggtgccgcca[bhq2-dt]-3'(seqidno.6)。
3.如权利要求1所述的一种检测诺如病毒gi和gii基因型的试剂盒,其特征在于,所述10xtaqbuffer包括:
200mm的tris-hcl,20mm的(nh4)2so4,300mm的kcl,40mm的mgso4,1%的tritonx-100,ph为8.0。
4.一种利用权利要求1至3任一项所述的试剂盒检测诺如病毒gi和gii基因型的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)提取待测样品的rna;
(2)配制反应体系:反应体系为30μl,配置时依次向反应管中加入15μlb液,3.5μlnucletide-freewate,1.5μla液,震荡混匀、离心备用;
(3)向反应管中加入rna样本10μl,置于混匀器上充分混匀后离心;
(4)反应过程:将反应管置于实时荧光定量pcr仪内,50℃恒温孵育15min,95℃15s,55℃30s为1个循环采集1次荧光信号,共40个循环,整个反应过程共60min。