CDK抑制剂的结晶形式的制作方法

对相关申请的交叉引用

不适用。

发明背景。

发明领域

本发明涉及6-(二氟甲基)-8-[(1r,2r)-2-羟基-2-甲基环戊基]-2-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮（pf-06873600）游离碱的无水结晶形式（形式1），涉及包含形式1的药物组合物，和涉及在哺乳动物的异常细胞生长如癌症的治疗中使用形式1和这样的组合物的方法。

相关技术描述

化合物pf-06873600是cdk2、cdk4和cdk6的强效抑制剂，其具有式(i)：

。

在国际专利公开no.wo2018/033815和美国专利no.10,233,188中公开了pf-06873600游离碱的制备。在国际专利申请no.pct/ib2019/058042中描述了一种制备pf-06873600的方法。上述文献各自的内容全文经此引用并入本文。

本发明提供具有理想性质，如高结晶度、高纯度、低吸湿度、有利的溶出和机械性质和/或有利的稳定性的pf-06873600游离碱的无水结晶形式（形式1）。

发明概述

在一个方面中，本发明提供pf-06873600游离碱的新型结晶形式（形式1）。pf-06873600游离碱的形式1通过下列方法中的一种或多种表征：(1)粉末x-射线衍射（pxrd）（2θ）；(2)拉曼光谱法（cm^-1）；(3)¹³c固态nmr光谱法（ppm）；或(4)¹⁹f固态nmr光谱法（ppm）。

在第一方面中，本发明提供pf-06873600游离碱（形式1），其特征在于具有：

(1)粉末x-射线衍射（pxrd）图（2θ），其包含：(a)选自以°2θ±0.2°2θ计的表1中的峰的一个、两个、三个、四个、五个或多于五个峰；(b)选自以°2θ±0.2°2θ计的表1中的特征峰的一个、两个、三个或四个峰；或(c)在与图1中所示基本相同的2θ值的峰；或

(2)拉曼光谱，其包含：(a)选自以cm^-1±2cm^-1计的表2中的值的一个、两个、三个、四个、五个或多于五个波数（cm^-1）值；(b)选自以cm^-1±2cm^-1计的表2中的特征值的一个、两个、三个、四个或五个波数（cm^-1）值；或(c)与图2中所示基本相同的波数（cm^-1）值；或

(3)¹³c固态nmr谱（ppm），其包含：(a)选自以ppm±0.2ppm计的表3中的值的一个、两个、三个、四个、五个或多于五个共振（ppm）值；(b)选自以ppm±0.2ppm计的表3中的特征值的一个、两个、三个、四个或五个共振（ppm）值；或(c)与图3中所示基本相同的共振（ppm）值；或

(4)¹⁹f固态nmr谱（ppm），其包含：(a)选自以ppm±0.2ppm计的表4中的值的一个或两个共振（ppm）值；或(b)与图4中所示基本相同的共振（ppm）值；

或上述实施方案(1)(a)-(c)、(2)(a)-(c)、(3)(a)-(c)或(4)(a)-(b)的任何两个、三个或四个的组合，只要它们不互相矛盾。

在另一个方面中，本发明进一步提供一种药物组合物，其包含根据本文所述的任一实施方案的pf-06873600游离碱（形式1）和可药用载体或赋形剂。

在另一个方面中，本发明提供一种治疗哺乳动物，包括人类的异常细胞生长的方法，其包括向哺乳动物给药治疗有效量的pf-06873600游离碱（形式1）。

在另一个方面中，本发明提供一种治疗哺乳动物的异常细胞生长的方法，其包括向哺乳动物给药治疗有效量的包含根据本文所述的任一方面或实施方案的pf-06873600游离碱（形式1）的药物组合物。

在另一个方面中，本发明提供根据本文所述的任一方面或实施方案的pf-06873600游离碱（形式1）或包含pf-06873600游离碱（形式1）的药物组合物在治疗哺乳动物的异常细胞生长的方法中的用途。

在再一个方面中，本发明提供根据本文所述的任一方面或实施方案的pf-06873600游离碱（形式1）在制备用于治疗哺乳动物的异常细胞生长的药物中的用途。

在常见实施方案中，异常细胞生长是癌症。在一个实施方案中，异常细胞生长是由cdk2、cdk4和/或cdk6介导的癌症。在一些这样的实施方案中，异常细胞生长是由cdk2介导的癌症。在另一些这样的实施方案中，异常细胞生长是由cdk4和/或cdk6介导的癌症。在另一些实施方案中，异常细胞生长是由cdk2和cdk4/6介导的癌症。在一些实施方案中，所述癌症的特征在于ccne1和/或ccne2的扩增或过度表达。

在一些实施方案中，异常细胞生长是癌症，其中所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌（包括nsclc、sclc、鳞状细胞癌或腺癌）、食管癌、头颈癌、结肠直肠癌、肾癌（包括rcc）、肝癌（包括hcc）、胰腺癌、胃（即胃部）癌和甲状腺癌。在本文提供的方法的进一步实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌、食管癌、肝癌、胰腺癌和胃癌。在一些这样的实施方案中，所述癌症的特征在于ccne1和/或ccne2的扩增或过度表达。

在另一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌，包括例如er阳性/hr阳性乳腺癌、her2阴性乳腺癌；er阳性/hr阳性乳腺癌、her2阳性乳腺癌；三阴性乳腺癌（tnbc）；或炎性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是内分泌耐药性乳腺癌、曲妥珠单抗耐药性乳腺癌或表现出对cdk4/cdk6抑制的原发性或获得性耐药性的乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是晚期或转移乳腺癌。在上述各自的一些实施方案中，乳腺癌的特征在于ccne1和/或ccne2的扩增或过度表达。

附图的若干视图的简述

图1.pf-06873600游离碱（形式1）的pxrd图。

图2.pf-06873600游离碱（形式1）的ft-拉曼光谱。

图3.pf-06873600游离碱（形式1）的碳cpmas光谱（#指示旋转边带）。

图4.pf-06873600游离碱（形式1）的氟mas光谱（#指示旋转边带）。

图5.实施例1中的流式反应器的配置。

发明详述

参考本发明的实施方案和其中包括的实施例的以下详述，可以更容易地理解本发明。要理解的是，本文所用的术语仅用于描述具体实施方案并且无意构成限制。还要理解的是，除非本文中明确规定，本文所用的术语具有如相关领域中已知的其传统含义。

除非另行指明，本文所用的单数形式“一”和“该”包括复数指代。例如，“一”取代基包括一个或多个取代基。

当本领域普通技术人员考虑时，术语“大约”是指具有落在平均值的公认标准误差内的值。

本文所用的术语“基本相同”意味着考虑到特定方法的典型变异度。例如，关于x-射线衍射峰位置，术语“基本相同”意味着考虑到峰位置和强度的典型变异度。本领域技术人员会认识到，峰位置(2θ)将表现出一定变异度，通常高达±0.2°。此外，本领域技术人员会认识到，相对峰强度将表现出装置间的变异度，以及归因于结晶度、优选取向、制备的样品表面和本领域技术人员已知的其它因素的变异度，并且只应被视为定性量度。类似地，拉曼光谱波数（cm^-1）值表现出通常高达±2cm^-1的变异度，而¹³c和¹⁹f固态nmr谱（ppm）表现出通常高达±0.2ppm的变异度。

本文所用的术语“结晶”是指具有规则重复排列的分子或外晶面平面（externalfaceplanes）。结晶形式可能在热力学稳定性、物理参数、x-射线结构和制备方法方面不同。

本文所用的术语“无水”是指仅含活性药物成分（api）作为其晶格的一部分的结晶形式。

本文描述的发明可合适地在不存在本文中没有具体公开的任何要素的情况下实施。因此，例如，在本文中的每种情况下，任一术语“包含”、“基本由…组成”和“由…组成”可被另外两个术语的任一个替代。

在一个方面中，本发明提供pf-06873600游离碱（形式1）。本文所述的方法提供基本纯的并且不含替代形式的pf-06873600游离碱（形式1）。

如本文所述，通过pxrd、拉曼光谱法和¹³c和¹⁹f固态nmr光谱法表征形式1。这样的结晶形式可进一步通过另外的技术，如傅里叶变换红外光谱法（ftir）、差示扫描量热法（dsc）、热重分析（tga）或差热分析（dta）表征。

在本发明的各个方面的一些实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）通过其粉末x-射线衍射（pxrd）图表征。在本发明的各个方面的另一些实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）通过其拉曼光谱表征。在本发明的各个方面的另一些实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）通过其¹³c固态nmr谱表征。在本发明的各个方面的再一些实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）通过其¹⁹f固态nmr谱表征。

在进一步的实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）通过这些方法中的两种、三种或四种的组合表征。在本文中提供包括以下两种或更多种的示例性组合：粉末x-射线衍射（pxrd）图（2θ）；拉曼光谱波数值（cm^-1）；¹³c固态nmr谱（ppm）；或¹⁹f固态nmr谱（ppm）。

要理解的是，两种、三种或四种技术的各种组合可用于独有表征本文公开的pf-06873600游离碱（形式1）。在一些实施方案中，通过pxrd和拉曼光谱表征pf-06873600游离碱（形式1）。在另一些实施方案中，通过pxrd和¹³c固态nmr表征pf-06873600游离碱（形式1）。在另一些实施方案中，通过pxrd和¹⁹f固态nmr表征pf-06873600游离碱（形式1）。在另一些实施方案中，通过¹⁹f固态nmr和拉曼光谱表征pf-06873600游离碱（形式1）。在另一些实施方案中，通过¹⁹f固态nmr和¹³c固态nmr表征pf-06873600游离碱（形式1）。在另一些实施方案中，通过pxrd、拉曼光谱和¹³c固态nmr表征pf-06873600游离碱（形式1）。在另一些实施方案中，通过pxrd、拉曼光谱和¹⁹f固态nmr表征pf-06873600游离碱（形式1）。

在一个实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含一个或多个在选自6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的pxrd图。在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含两个或更多个在选自6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的pxrd图。在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含三个或更多个在选自6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的pxrd图。

在一个实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的pxrd图。在一些这样的实施方案中，形式1具有进一步包含在6.9°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的pxrd图。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含在9.6°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的pxrd图。在另一实施方案中，形式1具有包含在18.3°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的pxrd图。在另一实施方案中，形式1具有包含在22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的pxrd图。在另一实施方案中，形式1具有包含在6.9°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的pxrd图。在一些这样的实施方案中，pxrd图进一步包含一个或多个在选自表1中的峰的2θ值的另外的峰。

在具体实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有pxrd图，其包含：(a)选自以°2θ±0.2°2θ计的表1中的峰的一个、两个、三个、四个、五个或多于五个峰；(b)选自以°2θ±0.2°2θ计的表1中的特征峰的一个、两个、三个或四个峰；或(c)在与图1中所示基本相同的2θ值的峰。

在一个实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含选自1254、1528、1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的一个或多个波数（cm^-1）值的拉曼光谱。在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含选自1254、1528、1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的两个或更多个波数（cm^-1）值的拉曼光谱。在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含选自1254、1528、1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的三个或更多个波数（cm^-1）值的拉曼光谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。在一些这样的实施方案中，形式1具有进一步包含波数（cm^-1）值1254cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。在一些这样的实施方案中，形式1具有进一步包含波数（cm^-1）值1528cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含波数（cm^-1）值1254、1528、1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含波数（cm^-1）值1589cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。在另一实施方案中，形式1具有包含波数（cm^-1）值1626cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。在另一实施方案中，形式1具有包含波数（cm^-1）值1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。在一些这样的实施方案中，形式1具有进一步包含波数（cm^-1）值1254cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。在一些这样的实施方案中，形式1具有进一步包含波数（cm^-1）值1528cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。

在具体实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有拉曼光谱，其包含：(a)选自以cm^-1±2cm^-1计的表2中的值的一个、两个、三个、四个、五个或多于五个波数（cm^-1）值；(b)选自以cm^-1±2cm^-1计的表2中的特征值的一个、两个、三个、四个或五个波数（cm^-1）值；或(c)与图2中所示基本相同的波数（cm^-1）值。

在一个实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含选自28.8、42.0、123.0、133.2和161.4ppm±0.2ppm的一个或多个共振（ppm）值的¹³c固态nmr谱。在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含选自28.8、42.0、123.0、133.2和161.4ppm±0.2ppm的两个或更多个共振（ppm）值的¹³c固态nmr谱。在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含选自28.8、42.0、123.0、133.2和161.4ppm±0.2ppm的三个或更多个共振（ppm）值的¹³c固态nmr谱。

在另一些实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。在一些实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含共振（ppm）值28.8ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。在另一实施方案中，形式1具有包含共振（ppm）值133.2ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。在另一实施方案中，形式1具有包含共振（ppm）值161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。在一些这样的实施方案中，形式1具有进一步包含共振（ppm）值42.0ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。在另一些这样的实施方案中，形式1具有进一步包含共振（ppm）值123.0ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。

在具体实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有¹³c固态nmr谱（ppm），其包含：(a)选自以ppm±0.2ppm计的表3中的值的一个、两个、三个、四个、五个或多于五个共振（ppm）值；(b)选自以ppm±0.2ppm计的表3中的特征值的一个、两个、三个、四个或五个共振（ppm）值；或(c)与图3中所示基本相同的共振（ppm）值。

在一个实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含选自-109.6和-122.7ppm±0.2ppm的一个或多个共振（ppm）值的¹⁹f固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含共振（ppm）值-109.6ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱。在另一实施方案中，形式1具有包含共振（ppm）值-122.7ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱（ppm）。在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含共振（ppm）值-109.6和-122.7ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱。

在另一实施方案中，形式1具有¹⁹f固态nmr谱（ppm），其包含：(a)选自以ppm±0.2ppm计的表4中的值的一个或两个共振（ppm）值；或(b)与图4中所示基本相同的共振（ppm）值。

在进一步的实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）的特征在于不互相矛盾的两个、三个或四个上述实施方案的组合。下面提供可用于独有表征pf-06873600游离碱的形式1的示例性实施方案。

在一个实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含在6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；和(b)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；和(b)包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；和(b)包含共振（ppm）值-109.6ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；(b)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱；和(c)包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；(b)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱；和(c)包含共振（ppm）值-109.6ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；(b)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱；(c)包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱；和(d)包含共振（ppm）值-109.6ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；和(b)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；和(b)包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；和(b)包含共振（ppm）值-109.6ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；(b)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱；和(c)包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；(b)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱；和(c)包含共振（ppm）值-109.6ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含在6.9、9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；(b)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱；(c)包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱；和(d)包含共振（ppm）值-109.6ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含共振（ppm）值-109.6和-122.7ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含共振（ppm）值-109.6和-122.7ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱；和(b)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含共振（ppm）值-109.6和-122.7ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱；和(b)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含共振（ppm）值-109.6和-122.7ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱；和(b)包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含共振（ppm）值-109.6和-122.7ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱；(b)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；和(c)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含共振（ppm）值-109.6和-122.7ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱；(b)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；和(c)包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有：(a)包含共振（ppm）值-109.6和-122.7ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱；(b)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射图；(c)包含波数（cm^-1）值1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱；和(d)包含共振（ppm）值28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含波数（cm^-1）值1254、1528、1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的拉曼光谱。

在另一实施方案中，pf-06873600游离碱（形式1）具有包含共振（ppm）值28.8、42.0、123.0、133.2和161.4ppm±0.2ppm的¹³c固态nmr谱。

在另一个方面中，本发明提供pf-06873600游离碱（形式1），其具有：(a)包含在9.6、18.3和22.1°2θ±0.2°2θ的2θ值的峰的粉末x-射线衍射（pxrd）图；(b)包含选自1589、1626和1673cm^-1±2cm^-1的一个或多个波数（cm^-1）值的拉曼光谱；(c)包含选自28.8、133.2和161.4ppm±0.2ppm的一个或多个共振（ppm）值的¹³c固态nmr谱；或(d)包含共振（ppm）值-109.6ppm±0.2ppm的¹⁹f固态nmr谱；或(a)、(b)、(c)和(d)的两项或更多项的组合。本文为各表征方法描述的各个实施方案可与这一方面组合或进一步限制这一方面，只要这些实施方案不互相矛盾。

在另一个方面中，本发明提供一种药物组合物，其包含根据本文所述的任一实施方案的pf-06873600游离碱的结晶形式（形式1）和可药用载体或赋形剂。

在另一个方面中，本发明提供治疗哺乳动物，优选人类的异常细胞生长的方法，其包括向哺乳动物给药治疗有效量的根据本文所述的任一实施方案的pf-06873600游离碱的结晶形式（形式1）。

在另一个方面中，本发明提供治疗哺乳动物，优选人类的异常细胞生长的方法，其包括向哺乳动物给药治疗有效量的包含根据本文所述的任一实施方案的pf-06873600游离碱的结晶形式（形式1）的药物组合物。

在另一个方面中，本发明提供根据本文所述的任一实施方案的pf-06873600游离碱的结晶形式（形式1），其用于治疗哺乳动物，优选人类的异常细胞生长。

在另一个方面中，本发明提供根据本文所述的任一实施方案的pf-06873600游离碱的结晶形式（形式1）在治疗哺乳动物，优选人类的异常细胞生长中的用途。

在另一个方面中，本发明提供根据本文所述的任一实施方案的pf-06873600游离碱的结晶形式（形式1）在制备用于治疗哺乳动物，优选人类的异常细胞生长的药物中的用途。

在本文所述的方法、组合物和用途的常见实施方案中，异常细胞生长是癌症。

本文所用的术语“治疗有效量”是指在一定程度上缓解治疗的病症的一种或多种症状的所给药化合物的量。关于癌症的治疗，治疗有效量是指具有如下效果的量：(1)减小肿瘤尺寸，(2)抑制（即在一定程度上减慢，优选停止）肿瘤转移，(3)在一定程度上抑制（即在一定程度上减慢，优选停止）肿瘤生长或肿瘤侵袭，和/或(4)在一定程度上缓解（或优选消除）与癌症相关的一种或多种迹象或症状。

本文所用的“哺乳动物”是指人类或动物对象。在某些优选实施方案中，哺乳动物是人类。

除非另行指明，本文所用的术语“治疗”是指对该术语适用的病症或病况或此类病症或病况的一种或多种症状实现逆转、减轻、抑制进程或预防。除非另行指明，本文所用的术语“治疗”是指如上文刚刚定义的“治疗”的治疗行为。术语“治疗”还包括对象的辅助和新辅助治疗。

除非另行指明，本文所用的“异常细胞生长”是指不依赖于正常调节机制（例如接触抑制的损失）的细胞生长。异常细胞生长可能是良性（非癌性）或恶性的（癌性的）。在本文提供的方法的常见实施方案中，异常细胞生长是癌症。

本文所用的“癌症”是指由异常细胞生长引起的任何恶性和/或侵袭性生长或肿瘤。术语“癌症”包括但不限于源于体内特定部位的原发癌、已从其起始位置扩散到身体其它部位的转移癌、原始原发癌在缓解后的复发、和第二原发癌，所述第二原发癌是之前有与新发原发癌不同类型的癌症史的人的新发原发癌。

本发明的药物组合物可以例如是适合作为片剂、胶囊、丸剂、粉剂、缓释制剂、溶液剂、混悬剂口服给药、适合作为无菌溶液剂、混悬剂或乳剂肠胃外注射、适合作为软膏剂或乳膏剂局部给药或适合作为栓剂直肠给药的形式。该药物组合物可以是适合单次给药精确剂量的单位剂型。该药物组合物包括常规药物载体或赋形剂和作为活性成分的根据本发明的化合物。此外，其可包括其它医学或药用试剂、载体、辅助剂等。

示例性的肠胃外给药形式包括活性化合物在无菌水溶液，例如丙二醇或右旋糖水溶液中的溶液剂或混悬剂。如果需要，这样的剂型可合适地缓冲。

合适的药物载体包括惰性稀释剂或填料、水和各种有机溶剂。如果需要，药物组合物可含有另外的成分，如调味剂、粘合剂、赋形剂等。因此，对于口服给药，可使用与各种崩解剂，如淀粉、藻酸和某些复合硅酸盐和与粘合剂，如蔗糖、明胶和阿拉伯树胶一起含有各种赋形剂，如柠檬酸的片剂。另外，润滑剂，如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石通常可用于压片用途。在软和硬填充的明胶胶囊中也可使用类似类型的固体组合物。优选材料包括乳糖（lactose或milksugar）和高分子量聚乙二醇。当口服给药需要水性混悬剂或酏剂时，其中的活性化合物可与各种甜味剂或调味剂、着色物质或染料和如果需要，乳化剂或悬浮剂合并，与稀释剂，如水、乙醇、丙二醇、甘油或其组合一起。

制备含特定量的活性化合物的各种药物组合物的方法是本领域技术人员已知的或显而易见的。例如，参见remington'spharmaceuticalsciences,mackpublishingcompany,easter,pa.,第15版(1975)。

实施例

下面提供的实施例和制备进一步阐明和例示本发明的特定方面和实施方案。要理解的是，本发明的范围不受以下实施例的范围限制。

通用方法1.粉末x-射线衍射（pxrd）

仪器方法:

使用配有cu辐射源的brukeraxsd4endeavor衍射仪进行粉末x-射线衍射分析。将发散狭缝设定为0.6mm，而二次光学器件（secondaryoptics）使用可变狭缝。通过psd-lynxeye检测器检测衍射辐射。将x-射线管电压和安培数分别设定为40kv和40ma。在theta-2theta测角仪中在cu波长（cukᾱ=1.5418λ）下从3.0至40.0°2-θ使用0.0185°的步幅和5秒的步长时间收集数据。注意过滤cuk-β波长。通过将样品置于硅低背景样品支架中来制备样品并在收集过程中旋转。使用brukerdiffracplus软件收集数据并通过evadiffractplus软件进行分析。

峰值拾取法:

pxrd数据文件在峰值搜索前没有处理。使用eva软件中的峰值搜索算法，使用以1的阈值选取的峰进行初步峰值分配。为确保有效性，手动进行调节；视觉检查自动化分配的输出，并根据峰值最大值调节峰位置。通常选择相对强度≥3%的峰。通常，不选择未解析或与噪声符合的峰。与来自pxrd的峰位置相关的典型误差在usp中规定为最多+/-0.2°2-θ(usp-941)。

通用方法2.拉曼光谱法

仪器方法:

使用连接于ft-irbench的nicoletnxrft-raman附件收集拉曼光谱。该光谱仪配备1064nmnd:yvo4激光器和液氮冷却的锗检测器。在数据采集前，使用聚苯乙烯进行仪器性能和校准验证。在光谱收集过程中为静态的玻璃nmr管中分析api样品。使用0.5w激光功率和512次共叠加（co-added）扫描收集光谱。收集范围是3700-100cm^-1。使用2cm^-1分辨率和happ-genzel变迹法记录这些光谱。利用上述拉曼法，与光谱测量有关的可能变异度为±2cm^-1。

峰值拾取法:

在峰值拾取前将强度标度归一化为1。使用thermonicoletomnic9.7.46软件手动识别峰值。在峰值最大值下拾取峰位置，并且如果在每一侧上有斜度，仅识别峰本身；不包括峰肩。对于纯形式1api，在峰值拾取过程中使用0.006的绝对阈值和84的灵敏度。使用标准做法（0.5向上舍入，0.4向下舍入）将峰位置四舍五入到最近的整数。具有在(1-0.75)、(0.74-0.30)、(0.29-0)之间的归一化峰强度的峰分别标记为强、中和弱。在这一报告中也显示相对峰强度值。

基于它们的强度以及峰位置选择这些形式的特征峰。

通用方法3.固态nmr（ssnmr）光谱法:

仪器方法:

在安置到bruker-biospinavanceiii500mhz（¹h频率）nmr能谱仪中的cpmas探针上进行固态nmr（ssnmr）分析。将材料装到用标准驱动帽密封的4mm转子中。使用质子解耦交叉极化魔角旋转（cpmas）实验使用14.0khz的魔角旋转速率收集¹³cssnmr谱。将交叉极化接触时间设定为2ms并将再循环延迟到5秒。在波谱采集过程中施加80-90khz的相位调制质子解耦场。调节扫描数以获得足够的信噪比；对api样品收集1024次扫描并对药物产品样品收集8192次扫描。¹³c化学位移标度使用¹³ccpmas实验参考结晶金刚烷的外标，将其高场共振设定为29.5ppm（如由纯tms测定）。使用质子解耦魔角旋转（mas）实验使用12.5khz的魔角旋转速率收集¹⁹fssnmr谱。在波谱采集过程中施加80-90khz的相位调制质子解耦场。在40秒的再循环延迟下收集256次扫描。¹⁹f化学位移标度使用¹⁹fmas实验参考三氟乙酸和水（50/50体积/体积）的外标，将其共振设定为-76.54ppm（如由纯tms测定）。

峰值拾取法:

使用bruker-biospintopspin3.5版本软件进行自动峰值拾取。通常，使用3%相对强度的阈值进行初步峰值选择。视觉检查自动化峰值拾取的输出以确保有效性，并且如果必要，手动进行调节。

尽管在本文中报道了具体的固态nmr峰值，但由于仪器、样品和样品制备中的差异，这些峰值存在一定的范围。在固态nmr领域中，由于峰位置的固有变化，这是惯例。对于结晶固体，¹³c和¹⁹f化学位移x轴值的典型变异度约为加或减0.2ppm。在本文中报道的固态nmr峰高是相对强度。固态nmr强度可随cpmas实验参数的实际设置和样品的热史而变。

通用合成方法:

可以如u.s.10,233,188的实施例10中所述制备pf-06873600游离碱原材料。被指定为化合物1、化合物2和化合物3的中间体可根据u.s.10,233,188的实施例2制备。最初如本文的实施例1中所述以实验室规模制备pf-06873600游离碱形式1。如实施例1中所述制备的pf-06873600游离碱（形式1）晶体可用作更大规模实验的晶种。种晶常用于在所需过饱和水平下引发结晶并改进批次一致性，但通常不是获得结晶材料所必需的。

实施例1

6-(二氟甲基)-8-[(1r,2r)-2-羟基-2-甲基环戊基]-2-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮（pf-06873600）无水游离碱（形式1）的实验室规模制备

步骤1:制备以下溶液以用于流式反应器（如图5中所示并大致如u.s.10,233,188的实施例133/134中配置）：瓶子1，二氟甲亚磺酸钠（4910mg，35.6mmol）和氯化铁(ii)（118mg，0.593mmol）在9/1dmso/水（135mldmso/15ml水）中；瓶子2，叔丁基过氧化氢（tbhp，3210mg，35.6mmol，3000μl）在150mldmso中；瓶子3，化合物3（如u.s.10,233,188的实施例2中所述制备）和氯化铁(ii)（118mg，0.593mmol）在100mldmso中。

该溶液以1ml/min的速率经过流式反应器。温度在t1和t2为50℃和在t3为室温。在底物溶液耗尽后，将产物混合物倒入冰/10%乙二胺四乙酸钠（edta）水溶液（13500g，35.6mmol）中并剧烈搅拌10分钟。水溶液用乙酸乙酯（4x300ml）萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠（300ml）和盐水（300x2ml）洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将残留物加载到二氧化硅柱上并用乙酸乙酯/庚烷0-100%洗脱。获得1350mgpf-06873600（48.3%收率）。

步骤2:将根据步骤1分两批制备的pf-06873600（2.35g，4.863mmol）溶解在甲醇（300ml）中。加入活性木炭（20g，1700mmol）并将浆料搅拌2小时。通过在玻璃纤维过滤器上经celite®床过滤，除去木炭。滤饼用甲醇和丙酮洗涤并除去挥发物。残留pf-06873600（泡沫）从甲基叔丁基醚（mtbe）和庚烷的混合物中结晶，然后在乙醇/丙酮/水中二次结晶以产生为白色结晶固体（小针晶）的pf-06873600。

¹hnmr(400mhz,dmso-d6,80℃)位移8.74(s,1h),8.04(s,1h),7.77(dd,j=5.93,11.19hz,1h),6.60-7.00(m,1h),5.75-5.95(m,1h),4.08(s,1h),3.91-4.07(m,j=6.48hz,1h),3.63(t,j=11.62hz,2h),2.90-2.98(m,2h),2.88(s,3h),2.16-2.26(m,1h),2.06-2.16(m,1h),1.97-2.06(m,j=12.23hz,2h),1.85-1.95(m,j=4.28hz,2h),1.68-1.79(m,2h),1.50-1.68(m,1h),1.04(s,3h)；¹⁹fnmr(377mhz,dmso-d6)位移-122.82--111.49(m,2f)；旋光度:[α]d²²−24.4(c0.5,chcl3)。

实施例2

6-(二氟甲基)-8-[(1r,2r)-2-羟基-2-甲基-环戊基]-2-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮（pf-06873600）无水游离碱（形式1）的大规模制备

步骤1:在100l反应器中在20±5℃下将8-[(1r,2r)-2-羟基-2-甲基环戊基]-2-(甲基硫烷基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮（化合物1）（7.0kg）溶解在69l二氯甲烷（dcm）中。

在20±5℃下向200l反应器中装载70l水和20.8kgoxone®（casno.37222-66-5）并混合5分钟以提供稀浆料。将oxone®混合物冷却到0±5℃。在保持0±10℃的温度的同时将化合物1的溶液经15分钟添加到反应器中。将反应器升温到20±5℃并保持3小时。

一旦通过超高压液相色谱法（uplc）确认反应完全，将混合物冷却到0±5℃并通过在0-10℃下经15分钟加入亚硫酸氢钠水溶液（11.75kg无水nahso3在28lh2o中）淬灭。将混合物升温到20±5℃。分离各层，有机层用稀盐水（5.04kgnacl溶解在33.6l水中，13%aq.）洗涤并通过在20±5℃下用2kg无水硫酸镁制浆15分钟而干燥。通过经nutsche过滤器过滤而除去干燥剂，滤饼用7ldcm洗涤并在氮气流下经30分钟吹干。

将滤液转移到100l反应器中并在真空下在20±15℃下浓缩至14-16l的体积。为了清除dcm，加入13ldmso并将溶液在真空下在20±15℃下浓缩至20-26l的体积。将温度调节到20±5℃。化合物2不经进一步分离而进入步骤2。

步骤2:向200l反应器中装载56ldmso并加入4.62kg三乙胺（tea）。反应器用氮气吹扫并在氮气下在20±5℃下加入9.7kg4-氨基-1-甲磺酰基哌啶盐酸盐（casno.651057-01-1）并在20±5℃下保持30min。在20±5℃下将化合物2的dmso溶液添加到该200l反应器中。将混合物加热到25±5℃并搅拌18小时。一旦通过uplc确认反应完全，将反应混合物加热到45±5℃并在45±5℃下用70l水稀释。用0.018kg晶种将溶液种晶并将混合物在45±5℃下保持1小时。加入另外的水（26l）并将混合物经5小时缓慢冷却到15±5℃并保持1.5小时。

通过经nutsche过滤器过滤而收集固体。滤饼用21l水洗涤并在氮气下干燥1小时，然后在真空炉中在50±5℃下干燥4小时以产生为白色固体的化合物3，与u.s.10,233,188的实施例2中制备的物质一致。

步骤3:向100l反应器中装载9ldmso。在15±5℃下加入luperoxtbh70x叔丁基过氧化氢70wt%/水并保持在此温度下直至均匀。在20±10℃下向200l反应器中装载9l水和46ldmso。加入二氟甲亚磺酸钠（5.41kg）（casno.275818-95-6）并将混合物在20±10℃下保持10分钟。在使温度保持在20±5℃的同时加入7ldmso。加入化合物3（6.6kg），接着加入四水合氯化铁(ii)（0.318kg）。将12ldmso添加到反应器中，然后将其冷却到5±5℃。

在0至10℃下经1小时将叔丁基过氧化氢混合物转移到200l反应器中并在5±5℃下保持15分钟。通过uplc监测反应。在完全后，反应混合物在15至20℃下用40l水稀释。反应混合物在水和33l乙酸乙酯（etoac）之间分配，水层用两份33l的etoac萃取，且合并的etoac层用亚硫酸氢钠水溶液（2.44kg无水亚硫酸氢钠在13l水中）、接着13l水洗涤。洗过的有机溶液在真空下在35±15℃下浓缩以提供粘性油。通过加入23lch3cn并混合以溶解油、然后在真空下在35±15℃下浓缩以提供油（10-11l体积），将溶剂交换为乙腈（ch3cn）。将甲苯（9.6kg）添加到粗制浓缩物中并通过在硅胶上的快速色谱法提纯所得pf-06873600的ch3cn/甲苯溶液。

步骤4:将根据步骤3制备的pf-06873600（3.8kg）和乙醇（104l，~37g/l）添加到反应器中并加热以在70±10℃下溶解。将温度调节到60-65℃并加入~250ml晶种浆料（如下所述制备）。将反应器在60-65℃下保持4小时，然后经4小时冷却到10±5℃并保持1小时。然后将反应器经30分钟加热到55±5℃并在40±10℃下浓缩大约2小时。将浓缩的浆料经3小时冷却到10±5℃并保持1小时。然后借助过滤分离所得浆料。滤饼用乙醇洗涤并在真空炉中在40±5℃下干燥。

通过将pf-06873600（0.132kg）和乙醇（0.5l，~264g/l）在烧瓶中在20±5℃下混合30分钟以提供均匀浆料，单独制备晶种浆料。

实施例3

pf-06873600无水游离碱（形式1）的替代性制备

如实施例2中所述进行步骤1-3。通过溶解在热丙酮中并冷却到环境温度、然后用10倍甲苯稀释并使其结晶，将中间体pf-06873600转化成甲苯溶剂化物（形式3）。通过过滤收集所得形式3的浆料并用甲苯洗涤。形式3溶剂化物在氮气流下抽吸干燥。将pf-06873600甲苯溶剂化物（形式3）（7.1kg）和乙酸异丙酯（179l，~83g/l）添加到反应器中。然后将混合物经1小时加热到80-85℃并保持8小时，然后经6小时冷却到5-10℃。混合物在此温度下保持4小时，然后借助过滤分离所得浆料以提供pf-06873600形式1，其与实施例1和2中制备的确证物质一致。

实施例4

pf-06873600无水游离碱（形式1）的表征

pxrd数据

图1显示根据通用方法1收集的pf-06873600游离碱（形式1）的pxrd数据。在衍射角2-θ°(°2θ)±0.2°2θ的pxrd峰的列表和它们的相对强度提供在表1中。

表1:pf-06873600游离碱形式1的pxrd峰列表（2-θ°）

ft拉曼数据

图2显示根据通用方法2收集的pf-06873600游离碱（形式1）的ft-拉曼光谱。ft拉曼峰（cm^-1）的完整列表和定性强度以cm^-1±2cm^-1提供在表2中。归一化峰强度如下标示：w=弱；m=中；s=强。

表2:pf-06873600游离碱形式1的ft拉曼峰列表（cm^-1）

ssnmr数据

图3显示根据通用方法3收集的pf-06873600游离碱（形式1）的碳cpmas谱。化学位移以百万分率（ppm）表示并参考在29.5ppm的固相金刚烷的外部样品。形式1的ssnmr¹³c化学位移（ppm）的列表以ppm±0.2ppm提供在表3中。

表3:pf-06873600游离碱形式1的ssnmr¹³c化学位移（ppm)

图4显示根据通用方法3收集的pf-06873600游离碱（形式1）的¹⁹f氟mas（ssnmr）谱。化学位移以参考在-76.54ppm的三氟乙酸的外部样品（50%v/v在h2o中）的百万分率（ppm）表示。

形式1的ssnmr¹⁹f化学位移（ppm）以ppm±0.2ppm提供在表4中。

表4:pf-06873600游离碱形式1的ssnmr¹⁹f化学位移（ppm）

实施例5

pf-06873600无水游离碱（形式1）的固态化学稳定性

长时间在长期储存条件（25℃/60%rh）下和较短时期在加速稳定性条件（40℃/75%rh）下研究pf-06873600无水游离碱（形式1）的化学稳定性。稳定性试验在25℃/60%rh下进行24个月（长期条件）和在40℃/75%rh下进行6个月（加速条件）并通过hplc评估外观和纯度。

光稳定性研究在ich条件下使用光源选项2ich条件运行。对直接暴露于uv/荧光条件的样品观察到从灰白色粉末到浅色粉末的外观变化。

将原料药的稳定性样品包装在双层低密度聚乙烯（ldpe）袋中，并且干燥剂包装在高密度聚乙烯（hdpe）鼓（drum）中。将光稳定性样品储存在带有石英盖的石英陪替氏培养皿中。

表5.pf-06873600游离碱（形式1）的化学稳定性

表6.pf-06873600游离碱（形式1）的光稳定性

实施例6

pf-06873600无水游离碱（形式1）的吸湿

在自动化蒸气吸附分析仪（tainstrumentsq5000sa）上进行水吸附和解吸研究。使用100mg标准重量校准微量天平。使用饱和盐溶液在5.0、11.3、32.8、52.8、75.3和84.3%rh（25℃）下校准相对湿度传感器。将大约30mg粉末样品置于石英样品支架中并在≤3%相对湿度（rh）下在25℃下干燥。当样品的重量变化在5分钟内或到120分钟的最大平衡时间<0.001wt%时，认定达到平衡。然后将rh以10%为增量逐渐增加到90%，接着以10%rh为增量降低到10%的最终rh。仍当样品的重量变化在5分钟内或到120分钟的最大平衡时间<0.001wt%时认定达到平衡。每步%rh的增重基于初始干燥步骤后的重量。使用universalanalysis软件v4.5a分析数据。

pf-06873600游离碱（形式1）不吸湿；直至90%rh都没有观察到显著增重并且在水吸附研究后固体形式没有变化。

表7.在25℃下的水吸附和解吸平衡值

可对上述内容作出修改而不背离本发明的基本方面。尽管已参考一个或多个具体实施方案相当详细地描述了本发明，但本领域普通技术人员会认识到，可对本申请中具体公开的实施方案作出改变，但这些修改和改进仍在本发明的范围和精神内。