HDAC6激活的巨噬细胞、其组合物及用途的制作方法

hdac6激活的巨噬细胞、其组合物及用途
技术领域
1.本文提供了组蛋白去乙酰化酶6(hdac6)激活的巨噬细胞、包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物、制备hdac6激活的巨噬细胞的方法以及通过施用治疗有效量的hdac6激活的巨噬细胞或包含hdac6激活的巨噬细胞的药物组合物来治疗疾病(例如癌症)的方法。


背景技术：

2.巨噬细胞在宿主先天性和适应性免疫反应中发挥重要作用。它们有助于维持组织稳态、修复和抵抗感染。巨噬细胞根据其表型表现出功能异质性。它们分为“m1”或“经典激活的”和“m2”或“替代性激活的”巨噬细胞。m2巨噬细胞分泌抗炎细胞因子，例如tgfβ和il-10，其通常与肿瘤相关并通过促进肿瘤生长、血管生成、肿瘤侵袭和迁移发挥作用。相反，m1巨噬细胞分泌促炎细胞因子，例如il-12和tnfα，并且具有抗肿瘤作用。m1巨噬细胞还主动扫描肿瘤微环境(tme)中的肿瘤相关抗原(taa)，并将它们呈递给cd8 t细胞以引发抗肿瘤免疫。因此，tme中m1/m2巨噬细胞的比值在tme中发挥至关重要的作用。
3.存在在tme中减少m2巨噬细胞或增加m1巨噬细胞以提高抗肿瘤免疫的治疗策略的需要。


技术实现要素：

4.申请人意外地发现，分离的巨噬细胞在体外(离体)被重新编程，并通过经选择性hdac6抑制剂处理而极化为抗肿瘤m1表型。这些hdac6激活的巨噬细胞可以施用于受试者以治疗癌症和其他疾病。
5.一方面，本文提供了hdac6激活的巨噬细胞。
6.另一方面，本文提供了包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物。
7.另一方面，本文提供了制备hdac6激活的巨噬细胞的方法，该方法包括从受试者中分离幼稚巨噬细胞并用选择性hdac6抑制剂离体处理分离的幼稚巨噬细胞。
8.另一方面，本文提供了治疗有需要的受试者的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的hdac6激活的巨噬细胞或包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物，其中受试者患有癌症、肺纤维化、肝纤维化或心脏纤维化。
附图说明
9.图1是显示在来自野生型或hdac6 ko(敲除)小鼠的骨髓来源的巨噬细胞中，通过facs测量的源自ova肽并由mhci-siinfekl特异性抗体检测的siinfekl抗原水平的线形图。巨噬细胞用nexturastat a(nexta)5μm预处理，然后极化24小时。
10.图2是显示来自野生型小鼠的经nexta预处理并与ova肽孵育24小时的极化的巨噬细胞中的mhci-siinfekl水平的图。
11.图3是显示sm1 ova(表达ova肽的sm1细胞)黑色素瘤细胞经5μm nexta处理24小时后的mhci和mhci-siinfekl水平的条形图。mhci和mhci-siinfekl水平通过facs测量。
12.图4是显示未经nexta处理、经nexta预处理和经nexta后处理的m1表型中的极化水平的条形图。
13.图5是显示未经nexta处理、经nexta预处理和经nexta后处理的m2表型中的极化水平的条形图。
14.图6是显示sm1小鼠黑色素瘤模型中肿瘤内转移治疗中的肿瘤大小的线形图，其中幼稚巨噬细胞(m0)经nexta预处理或未经nexta处理。
15.图7是显示sm1小鼠黑色素瘤模型中肿瘤内转移治疗中的肿瘤大小的线形图，其中m1巨噬细胞经nexta预处理或未经nexta处理。
16.图8是显示sm1小鼠黑色素瘤模型中肿瘤内转移治疗中的肿瘤大小的线形图，其中m2巨噬细胞经nexta预处理或未经nexta处理。
17.图9是显示m2表型标记arg1的基因表达水平的条形图，其中m1和m2巨噬细胞未经hdac6抑制剂处理或经hdac6抑制剂预处理。通过定量实时pcr测试基因表达水平。
18.图10是显示m2抗炎细胞因子il-10的基因表达水平的条形图，其中m1和m2巨噬细胞未经hdac6抑制剂处理或经hdac6抑制剂预处理。通过定量实时pcr测试基因表达水平。
19.图11是显示m2抗炎细胞因子tgfβ的基因表达水平的条形图，其中m1和m2巨噬细胞未经hdac6抑制剂处理或经hdac6抑制剂预处理。通过定量实时pcr测试基因表达水平。
20.图12是显示m1促炎细胞因子il-1b的基因表达水平的条形图，其中m1和m2巨噬细胞未经hdac6抑制剂处理或经hdac6抑制剂预处理。通过定量实时pcr测试基因表达水平。
21.图13是显示m1促炎细胞因子tnfα的基因表达水平的条形图，其中m1和m2巨噬细胞未经hdac6抑制剂处理或经hdac6抑制剂预处理。通过定量实时pcr测试基因表达水平。
22.图14是显示20只移植有sm1黑色素瘤的小鼠监测25天的肿瘤生长曲线的线形图。
23.图15是显示肿瘤大小与抗肿瘤m1巨噬细胞负相关的散点图。
24.图16是显示肿瘤大小与促肿瘤m2巨噬细胞正相关的散点图。
25.图17是显示肿瘤大小与m1/m2巨噬细胞比值的散点图。m1/m2巨噬细胞比值是肿瘤微环境(tme)的免疫状态的指标。
26.图18是显示sm1小鼠黑色素瘤模型中的给药方案的示意图。
27.图19是显示在sm1小鼠黑色素瘤模型中用溶媒、m1巨噬细胞、nexta和经nexta预处理的m1巨噬细胞处理后的肿瘤大小的线形图。
28.图20是显示在sm1小鼠黑色素瘤模型中用溶媒、m1巨噬细胞、nexta和经nexta预处理的m1巨噬细胞处理后的存活百分比的kaplan-meier存活图。
29.图21是显示在sm1小鼠黑色素瘤模型中用溶媒和来源于hdac6 ko(敲除)小鼠的m1巨噬细胞处理后的肿瘤大小的线形图。
30.图22是显示m2抗炎细胞因子ccl2、tgf-β和il-10的基因表达水平的条形图，其中幼稚巨噬细胞m0未经hdac6抑制剂(nexta)处理或经hdac6抑制剂(nexta)预处理。
31.图23是显示m1促炎细胞因子il-12、tnf-α和il-1b的基因表达水平的条形图，其中幼稚巨噬细胞m0未经hdac6抑制剂(nexta)处理或经hdac6抑制剂(nexta)预处理。
32.图24是一组四张图，显示抗原呈递和加工基因tap1、tap2、tapbp和erap1，其中幼稚巨噬细胞m0、m1、m2未经nexta处理或经nexta预处理。
33.图25是一组四个条形图，显示当稳定表达ova肽的sm1细胞(sm1-ova细胞)在所示
时间暴露于4gy的放射、nexta或组合时的mhci-siinfekl水平。通过流式细胞术测量mhc-i介导的siinfekl抗原呈递。
34.图26是显示当稳定表达ova肽的sm1细胞(sm1-ova细胞)暴露于溶媒、先后顺序的hdac6抑制剂(nexta)和放疗处理时的mhci-siinfekl水平的条形图。通过流式细胞术测量mhc-i介导的siinfekl抗原呈递。
35.图27是显示巨噬细胞的抗原交叉呈递的工作流程的示意图。
36.图28是显示当骨髓来源的m0(幼稚)巨噬细胞暴露于来自放射暴露的sm1-ova细胞的条件培养基(cm)时，通过facs测量的源自ova肽并由mhci-siinfekl特异性抗体检测的siinfekl抗原水平的图。
37.图29是显示当骨髓来源的m1巨噬细胞暴露于来自放射暴露的sm1-ova细胞的条件培养基(cm)时，通过facs测量的源自ova肽并由mhci-siinfekl特异性抗体检测的siinfekl抗原水平的图。
38.图30是显示当骨髓来源的m2巨噬细胞暴露于来自放射暴露的sm1-ova细胞的条件培养基(cm)时，通过facs测量的源自ova肽并由mhci-siinfekl特异性抗体检测的siinfekl抗原水平的图。
39.图31是显示nexta、acy241、acy1215和acy738的hdac1和hdac6活性的表格。
40.图32是显示经hdac抑制剂处理后pd-l1表达的蛋白质印迹。
41.图33是显示经nexta处理后cd8+t细胞中的ifn水平的条形图，该ifn水平通过elisa测量。
42.图34是一组三个条形图，显示经溶媒或nexta处理后nk细胞中诱导细胞死亡的granyme b、fasl和trail的表达。
43.图35是显示hdac抑制剂在所示浓度下的细胞毒性的线形图。
44.图36是显示hdac抑制剂在所示浓度下的细胞毒性的线形图。
具体实施方式
45.i.本文的组合物
46.一方面，本文提供了hdac6激活的巨噬细胞。
47.另一方面，本文提供了包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物。
48.另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂离体处理的幼稚巨噬细胞产生。另一方面，受试者是哺乳动物。另一方面，受试者是人。另一方面，幼稚巨噬细胞是同种异体巨噬细胞、自体巨噬细胞、或同种异体巨噬细胞和自体巨噬细胞的组合。另一方面，幼稚巨噬细胞是同种异体巨噬细胞。另一方面，幼稚巨噬细胞是自体巨噬细胞。
49.另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂离体处理一次的幼稚巨噬细胞产生。
50.另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂离体处理两次或更多次的幼稚巨噬细胞产生。
51.另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂离体处理6小时或更短(例如5小时或更短、4小时或更短、3小时或更短、2小时或更短、1小时或
更短、或30分钟或更短)的幼稚巨噬细胞产生。
52.另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂和巨噬细胞极化剂离体处理的幼稚巨噬细胞产生。另一方面，巨噬细胞极化剂包括脂多糖(lps)、干扰素-γ、白细胞介素4或白细胞介素13或其组合。另一方面，在经巨噬细胞极化剂处理之前，用选择性hdac6抑制剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，在经巨噬细胞极化剂处理之后，用选择性hdac6抑制剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，同时用选择性hdac6抑制剂和巨噬细胞极化剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，经巨噬细胞极化剂的离体处理持续6小时或更短，例如5小时或更短、4小时或更短、3小时或更短、2小时或更短、1小时或更短、或30分钟或更短。
53.另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由从受试者分离并用选择性hdac6抑制剂和肿瘤抗原离体处理的幼稚巨噬细胞产生。另一方面，抗原包括甲胎蛋白(afp)、癌胚抗原(cea)、ca-125、muc-1、上皮肿瘤抗原(eta)、酪氨酸酶或黑色素瘤相关抗原(mage)、p53或其组合。另一方面，在用肿瘤抗原处理之前，用选择性hdac6抑制剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，在用肿瘤抗原处理之后，用选择性hdac6抑制剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，同时用选择性hdac6抑制剂和肿瘤抗原处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，用肿瘤抗原进行的离体处理持续6小时或更短，例如5小时或更短、4小时或更短、3小时或更短、2小时或更短、1小时或更短、或30分钟或更短。
54.另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂、巨噬细胞极化剂和肿瘤抗原离体处理的幼稚巨噬细胞产生。可以同时或以任何顺序分别用选择性hdac6抑制剂、巨噬细胞极化剂和肿瘤抗原处理幼稚巨噬细胞。例如，可以先用选择性hdac6抑制剂离体处理幼稚巨噬细胞，然后用巨噬细胞极化剂，然后用肿瘤抗原；可以先用巨噬细胞极化剂离体处理幼稚巨噬细胞，然后用选择性hdac6抑制剂，然后用肿瘤抗原；可以先用选择性hdac6抑制剂离体处理幼稚巨噬细胞，然后用肿瘤抗原，然后用巨噬细胞极化剂；等等。另一方面，离体处理是选择性hdac6抑制剂、巨噬细胞极化剂和肿瘤抗原，对于每种试剂独立地持续6小时或更短，例如5小时或更短、4小时或更短、3小时或更短、2小时或更短、1小时或更短、或30分钟或更短。
55.hdac6激活的巨噬细胞可以被配制成用于临床使用的药物组合物或药物，并且可以包括药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或佐剂。因此，一方面，本文提供了包含hdac6激活的巨噬细胞和药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂的组合物。药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或佐剂是本领域已知的。
56.组合物可以被配制用于肠胃外、全身、腔内、静脉内、动脉内、肌内、鞘内、眼内、结膜内、瘤内、皮下、皮内、鞘内、口服或经皮的施用途径，包括注射或输注。
57.合适的制剂可以包括无菌或等渗介质(例如注射用水(wfi))中的hdac6激活的巨噬细胞。药物和药物组合物可以被配制成流体形式，包括凝胶形式。流体制剂可以被配制用于通过注射或输注(例如经由导管)向人体或动物体的选定区域施用。
58.一方面，包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物被配制用于瘤内或静脉内施用，例如用于巨噬细胞定向的癌症免疫疗法。参见，例如，mills et al.,cancer research 76:513-516(2016)；lee et al.,j control release 240:527-540(2016)。
59.根据本文，提供了用于生产药学上有用的组合物的方法，这种生产方法可以包括
选自以下的一个或多个步骤：分离/纯化根据本文所述的方法生产的hdac6激活的巨噬细胞；和/或将生产的hdac6激活的巨噬细胞与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合。
60.例如，本文的一方面涉及配制或生产药物或药物组合物的方法，该方法包括通过将根据本文所述的方法生产的hdac6激活的巨噬细胞与药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂或稀释剂混合来配制药物组合物或药物。
61.另一方面，选择性hdac6抑制剂是式i的化合物：
[0062][0063]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0064]r6a
、r
6b
、r
6c
、r
6d
和r
6e
各自独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、卤代烷氧基、任选取代的c
3-6
环烷基、任选取代的苯基、任选取代的5-或6-元杂芳基和任选取代的5-元或6-元杂环组成的组；
[0065]
ra和rb独立地选自由氢和c
1-4
烷基组成的组；或者
[0066]
ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成3-至10-元杂环；
[0067]
rc是c
1-4
烷基；和
[0068]
n是1、2或3。
[0069]
另一方面，本文提供了选择性hdac6抑制剂是式i的化合物或其药学上可接受的盐，其中r
6a
、r
6b
、r
6c
、r
6d
和r
6e
各自独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基和c
1-4
卤代烷基组成的组。另一方面，r
6a
、r
6b
、r
6c
、r
6d
和r
6e
各自独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组。
[0070]
另一方面，本文提供了选择性hdac6抑制剂是式i的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0071]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式ii的化合物：
[0072][0073]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0074]r7a
、r
7b
、r
7c
、r
7d
和r
7e
各自独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、卤代烷氧基、任选取代的c
3-6
环烷基、任选取代的苯基、任选取代的五元或六元杂芳基和任选取代的5-或6-元杂环组成的组；
[0075]
ra和rb独立地选自由氢和c
1-4
烷基组成的组；或者
[0076]
ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成3-至10-元杂环；
[0077]
rc是c
1-4
烷基；和
[0078]
n是1、2或3。
[0079]
另一方面，本文提供了选择性hdac6抑制剂是式ii的化合物或其药学上可接受的盐，其中r
7a
、r
7b
、r
7c
、r
7d
和r
7e
各自独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基和c
1-4
卤代烷基组成的组。另一方面，r
7a
、r
7b
、r
7c
、r
7d
和r
7e
各自独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组。
[0080]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式ii的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0081]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式iii的化合物：
[0082][0083]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0084]r4a
和r
4b
独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组；
[0085]r4c
和r
4d
独立地选自由氢和甲基组成的组；
[0086]
m是0或1；
[0087]
n是1、2或3；和
[0088]
代表单键或双键。
[0089]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式iii的化合物或其药学上可接受的盐，其中m是0并且可以代表双键。
[0090]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式iii的化合物或其药学上可接受的盐，其中m是1并且是单键。
[0091]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式iii的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0092]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式iv的化合物：
[0093][0094]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0095]r5a
和r
5c
独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组；和
[0096]
n是1、2或3。
[0097]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式iv的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0098]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是表1(见下文)的化合物，或其药学上可接受的盐。
[0099]
另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性是一种或多种其他hdac同工型(例如
hdac1、hdac2、hdac3、hdac4、hdac5、hdac7、hdac8、hdac9、hdac10或hdac11)的至少20倍。
[0100]
另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性是一种或多种其他hdac同工型的至少100倍。
[0101]
另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性是一种或多种其他hdac同工型的至少600倍。
[0102]
ii.产生hdac6激活的巨噬细胞的方法
[0103]
一方面，本文提供了产生hdac6激活的巨噬细胞的方法，该方法包括从受试者中分离幼稚巨噬细胞并用选择性hdac6抑制剂离体处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，受试者是哺乳动物。另一方面，受试者是人。另一方面，幼稚巨噬细胞是同种异体巨噬细胞、自体巨噬细胞、或同种异体巨噬细胞和自体巨噬细胞的组合。另一方面，幼稚巨噬细胞是同种异体巨噬细胞。另一方面，幼稚巨噬细胞是自体巨噬细胞。
[0104]
另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂离体处理一次的幼稚巨噬细胞产生。
[0105]
另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂离体处理两次或更多次的幼稚巨噬细胞产生。
[0106]
另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂离体处理6小时或更短(例如5小时或更短、4小时或更短、3小时或更短、2小时或更短、1小时或更短、或30分钟或更短)的幼稚巨噬细胞产生。
[0107]
另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂和巨噬细胞极化剂离体处理的幼稚巨噬细胞产生。另一方面，巨噬细胞极化剂包括脂多糖(lps)、干扰素-γ、白细胞介素-4或白细胞介素-13或其组合。另一方面，经巨噬细胞极化剂处理之前，用选择性hdac6抑制剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，经巨噬细胞极化剂处理之后，用选择性hdac6抑制剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，同时用选择性hdac6抑制剂和巨噬细胞极化剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，用巨噬细胞极化剂处理分离的幼稚巨噬细胞6小时或更短，例如5小时或更短、4小时或更短、3小时或更短、2小时或更短、1小时或更短、或30分钟或更短。
[0108]
另一方面，hdac6激活的巨噬细胞由已从受试者中分离并经选择性hdac6抑制剂和肿瘤抗原离体处理的幼稚巨噬细胞产生。另一方面，抗原包括甲胎蛋白(afp)、癌胚抗原(cea)、ca-125、muc-1、上皮肿瘤抗原(eta)、酪氨酸酶或黑色素瘤相关抗原(mage)、p53或其组合。另一方面，经肿瘤抗原处理之前，用选择性hdac6抑制剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，经肿瘤抗原处理之后，用选择性hdac6抑制剂处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，同时用选择性hdac6抑制剂和肿瘤抗原处理分离的幼稚巨噬细胞。另一方面，用肿瘤抗原处理分离的幼稚巨噬细胞6小时或更短，例如5小时或更短、4小时或更短、3小时或更短、2小时或更短、1小时或更短、或30分钟或更短。
[0109]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式i的化合物或其药学上可接受的盐。见上文。另一方面，其中r
6a
、r
6b
、r
6c
、r
6d
和r
6e
独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基和c
1-4
卤代烷基组成的组。另一方面，r
6a
、r
6b
、r
6c
、r
6d
和r
6e
各自独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组。另一方面，n是1。另一方面，n是2。另一方面，n可以是3。
[0110]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式的ii化合物或其药学上可接受的盐。见上文。另一方面，r
7a
、r
7b
、r
7c
、r
7d
和r
7e
各自独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基和c
1-4
卤代烷基组成的组。另一方面，r
7a
、r
7b
、r
7c
、r
7d
和r
7e
各自独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组。另一方面，n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0111]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式iii的化合物或其药学上可接受的盐。见上文。另一方面，m是0并且是双键。另一方面，m是1并且是单键。另一方面，n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0112]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是式的iv化合物或其药学上可接受的盐。见上文。另一方面，n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0113]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是表1的化合物或其药学上可接受的盐。
[0114]
另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性是一种或多种其他hdac同工型(例如hdac1、hdac2、hdac3、hdac4、hdac5、hdac7、hdac8、hdac9、hdac10或hdac11)的至少20倍。
[0115]
另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性是一种或多种其他hdac同工型的至少100倍。
[0116]
另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性是一种或多种其他hdac同工型的至少600倍。
[0117]
iii.通过过继转移治疗疾病
[0118]
hdac6激活的巨噬细胞或包含hdac6激活的巨噬细胞的药物组合物可用于过继细胞治疗。过继细胞治疗涉及将细胞引入需要治疗的受试者。在一些情况下，细胞来源于它们被引入的受试者(自体细胞疗法)。参见例如moroni et al.,nature medicine 25:1560-1565(2019)。也就是说，细胞(例如巨噬细胞)可以从患者获得，根据本文描述的方法被激活，然后返回到同一受试者。本文公开的方法也可用于同种异体细胞疗法，其中将获自不同个体的细胞引入受试者。
[0119]
一方面，本文提供了治疗或预防有需要的受试者的疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的hdac6激活的巨噬细胞或包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物。另一方面，疾病或病症是癌症、肺纤维化、肝纤维化或心脏纤维化。
[0120]
另一方面，本文提供了治疗或预防有需要的受试者的疾病或病症的方法，该方法包括：
[0121]
(a)从受试者中分离幼稚巨噬细胞；
[0122]
(b)用选择性hdac6抑制剂离体处理幼稚巨噬细胞以产生hdac6激活的巨噬细胞；和
[0123]
(c)向受试者施用hdac6激活的巨噬细胞。
[0124]
另一方面，本文提供了治疗或预防有需要的受试者的疾病或病症的方法，该方法包括：
[0125]
(a)从受试者中分离幼稚巨噬细胞；
[0126]
(b)用选择性hdac6抑制剂离体处理幼稚巨噬细胞以产生hdac6激活的巨噬细胞；
[0127]
(c)用巨噬细胞极化剂处理hdac6激活的巨噬细胞；和
[0128]
(d)向受试者施用hdac6激活的巨噬细胞。
[0129]
另一方面，本文提供了治疗或预防有需要的受试者的疾病或病症的方法，该方法包括：
[0130]
(a)从受试者中分离幼稚巨噬细胞；
[0131]
(b)用选择性hdac6抑制剂离体处理幼稚巨噬细胞以产生hdac6激活的巨噬细胞；
[0132]
(c)用肿瘤抗原处理hdac6激活的巨噬细胞；和
[0133]
(d)向受试者施用hdac6激活的巨噬细胞。
[0134]
另一方面，本文提供了治疗或预防有需要的受试者的疾病或病症的方法，该方法包括：
[0135]
(a)从受试者中分离幼稚巨噬细胞；
[0136]
(b)用选择性hdac6抑制剂离体处理幼稚巨噬细胞以产生hdac6激活的巨噬细胞；
[0137]
(c)用巨噬细胞极化剂处理hdac6激活的巨噬细胞；
[0138]
(d)用肿瘤抗原处理hdac6激活的巨噬细胞；和
[0139]
(e)向受试者施用hdac6激活的巨噬细胞。
[0140]
一方面，从中分离幼稚巨噬细胞的受试者是施用hdac6激活的巨噬细胞的受试者，即，过继转移是自体细胞。在一些方面，从中分离幼稚巨噬细胞的受试者是与施用hdac6激活的巨噬细胞的受试者不同的受试者，即，过继转移是同种异体细胞。
[0141]
一方面，治疗或预防受试者的疾病或病症的方法包括以下步骤中的一个或多个：从受试者中获取生物样品；从生物样品中分离幼稚巨噬细胞；用选择性hdac6抑制剂离体处理幼稚巨噬细胞；用巨噬细胞极化剂处理经处理的巨噬细胞；收集hdac6激活的巨噬细胞；将hdac6激活的巨噬细胞与佐剂、稀释剂或载体混合；向受试者施用hdac6激活的巨噬细胞或其组合物。
[0142]
一方面，待治疗/预防的疾病或病症是肺纤维化。
[0143]
另一方面，待治疗/预防的疾病或病症是肝纤维化。
[0144]
另一方面，待治疗/预防的疾病或病症是心脏纤维化。
[0145]
另一方面，待治疗/预防的疾病或病症是癌症。hdac6激活的巨噬细胞和包含hdac6激活的巨噬细胞的药物组合物能够治疗或预防癌症，例如抑制癌症的发展/进展，延迟/预防癌症的发作，减少/延迟/预防肿瘤生长，减少/延迟/预防转移，减轻癌症症状的严重程度，减少癌细胞的数量，减少肿瘤大小/体积，和/或增加生存期(例如无进展生存期))。
[0146]
一方面，癌症是实体瘤。另一方面，癌症是血液癌症。另一方面，癌症是表2的任何一种或多种癌症。
[0147]
表2
[0148]
[0149]
[0150]
[0151][0152]
示例性血液癌症包括但不限于表3中列出的癌症。另一方面，血液癌症是急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(包括b细胞慢性淋巴细胞白血病)或急性髓细胞白血病。
[0153]
表3
[0154]
一方面，以“治疗有效”或“预防有效”量施用hdac6激活的巨噬细胞或包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物，这足以显示对受试者的益处。
[0155]
施用的实际量、施用的速率和时间过程将取决于疾病或病症的性质和严重程度。治疗处方(例如剂量等的决定)是全科医生和其他医生的责任，并且通常会考虑待治疗的疾病/病症、个体受试者的状况、递送部位、施用方法和从业者已知的其他因素。上述技术和方
案的实例可以在remington's pharmaceutical sciences,20th edition,2000,pub.lippincott,williams&wilkins中找到。
[0156]
可以向受试者施用多个剂量的hdac6激活的巨噬细胞或包含hdac6激活的巨噬细胞的药物组合物。一个或多个或每个剂量可以伴随同时或顺序施用另一种治疗剂。
[0157]
多个剂量可以按预定的时间间隔分开，该时间间隔可以选择为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天、或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月中的一个。举例来说，可以每7、14、21或28天(加或减3、2或1天)给予一次剂量。
[0158]
另一方面，本文提供了进一步包括向受试者施用局部放疗、免疫检查点阻断疗法、光热疗法或化疗中的一种或多种的方法。
[0159]
放疗
[0160]
一方面，本文提供的方法包括将hdac6激活的巨噬细胞或包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物与放疗联合施用于受试者。本文提供的方法不受用于向受试者递送治疗剂量的放射的类型、量或递送和施用系统的限制。例如，受试者可以接受光子放疗、粒子束放疗、其他类型的放疗及其组合。在一些方面，使用线性加速器将放射递送至受试者。在其他方面，使用伽马刀递送放射。
[0161]
放射源可以在受试者的外部或内部。外部放疗是最常见的，包括使用例如线性加速器引导高能放射束穿过皮肤至肿瘤部位。虽然放射束定位于肿瘤部位，但几乎不可能避免正常健康组织的暴露。然而，受试者通常可以很好地耐受外部放射。内部放疗包括在体内肿瘤部位处或附近植入放射发射源，例如珠粒、线、丸、胶囊、粒子等，包括使用特异性靶向癌细胞的递送系统(例如，使用附着在癌细胞结合配体上的粒子)。这种植入物可以在治疗后移除，或者以无活性状态留在体内。内部放疗的类型包括但不限于近距离放疗、间质放疗、腔内放疗、放射免疫疗法等。
[0162]
受试者可以任选地接受放射增敏剂(例如，甲硝唑、米索硝唑、动脉内budr、静脉内碘脱氧尿苷(iudr)、硝基咪唑、5-取代的-4-硝基咪唑、2h-异吲哚二酮、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基-1h-咪唑-1-乙醇、硝基苯胺衍生物、dna亲和的低氧选择性细胞毒素、卤代dna配体、1,2,4苯并三嗪氧化物、2-硝基咪唑衍生物、含氟硝基唑衍生物、苯甲酰胺、烟酰胺、吖啶嵌入剂、5-硫代四唑衍生物、3-硝基-1,2,4-三唑、4,5-二硝基咪唑衍生物、羟基化的texaphrin、顺铂、丝裂霉素、替拉扎明(tiripazamine)、亚硝基脲、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、博来霉素、长春新碱、卡铂、表柔比星、多柔比星、环磷酰胺、长春地辛、依托泊苷、紫杉醇、热(热疗)等)、放射防护剂(例如，半胱胺、氨基烷基硫代磷酸二氢盐、氨磷汀(wr2721)、il-1、il-6等)。放射增敏剂增强对肿瘤细胞的杀伤。放射防护剂保护健康组织免受放射的有害影响。
[0163]
可以向受试者施用任何类型的放射，只要放射的剂量被受试者耐受而没有不可接受的负面副作用。合适类型的放疗包括例如电离(电磁)放疗(例如，x射线或伽马射线)或粒子束放疗(例如，高线性能量放射)。电离辐射被定义为包含粒子或光子的放射，这些粒子或光子具有足够的能量以产生电离，即电子的获得或损失(如在例如u.s.5,770,581中所述，其以其全文形式通过引用并入本文)。放射的作用可以至少部分地由临床医生控制。一方面，为了最大限度地暴露靶细胞和降低毒性，放射剂量被分成几部分。
[0164]
一方面，向受试者施用的总放射剂量为约0.01戈瑞(gy)至约100gy。另一方面，在治疗过程中施用约10gy至约65gy(例如，约15gy、20gy、25gy、30gy、35gy、40gy、45gy、50gy、55gy或60gy)。虽然在一些方面可以在一天的过程中施用完整剂量的放射，但理想地总剂量被分成几部分并在若干天内施用。理想地，在至少约3天，例如至少3、4、5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52或56天(约1-8周)的过程中施用放疗。因此，每日放射剂量将包括大约1-5gy(例如，约1gy、1.5gy、1.8gy、2gy、2.5gy、2.8gy、3gy、3.2gy、3.5gy、3.8gy、4gy,4.2gy或4.5gy)或1-2gy(例如,1.5-2gy)。每日放射剂量应足以诱导靶细胞的破坏。如果延长一段时间，一方面，放射不是每天施用，从而允许动物休息并实现治疗的效果。例如，一方面，对于每周的治疗，连续5天施用放射，而2天不施用放射，从而允许每周休息2天。然而，在其他方面，1天/周、2天/周、3天/周、4天/周、5天/周、6天/周或全部7天/周施用放射，这取决于哺乳动物的反应性和任何潜在的副作用。放疗可以在治疗期的任何时间开始。一方面，放射在第1周或第2周开始，并在治疗期的剩余持续时间内施用。例如，在包括6周的治疗期的第1-6周或第2-6周施用放射以治疗例如实体瘤。替代地，在包括5周的治疗期的第1-5周或第2-5周施用放射。然而，这些示例性放疗施用计划并非旨在限制本文提供的方法。
[0165]
免疫检查点阻断疗法
[0166]
一方面，本文提供的方法包括将hdac6激活的巨噬细胞或包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物与免疫检查点阻断疗法联合施用于受试者。免疫检查点抑制剂是阻断免疫系统抑制剂检查点的疗法。免疫检查点可以是刺激性的或抑制性的。阻断抑制性免疫检查点激活免疫系统功能，可用于癌症免疫疗法。pardoll,nature reviews.cancer 12:252-64(2012)。当肿瘤细胞附着于特异性t细胞受体时，它们会关闭激活的t细胞。免疫检查点抑制剂防止肿瘤细胞附着在t细胞上，从而导致t细胞保持激活。实际上，细胞和可溶性成分的协同作用可以对抗病原体和癌症造成的伤害。免疫系统途径的调节可能涉及改变该途径的至少一种成分的表达或功能活性，然后调节免疫系统的反应。u.s.2015/0250853。免疫检查点抑制剂的实例包括pd-1抑制剂、pd-l1抑制剂、ctla-4抑制剂、lag3抑制剂、tim3抑制剂、cd47抑制剂和b7-h1抑制剂。因此，一方面，免疫检查点抑制剂选自由pd-1抑制剂、pd-l1抑制剂、ctla-4抑制剂、lag3抑制剂、tim3抑制剂和cd47抑制剂组成的组。
[0167]
另一方面，免疫检查点抑制剂是程序性细胞死亡蛋白(pd-1)抑制剂。pd-1是t细胞共抑制受体，在肿瘤细胞逃避宿主免疫系统的能力中起关键作用。阻断pd-1与pd-1配体pd-l1之间的相互作用可增强免疫功能并介导抗肿瘤活性。pd-1抑制剂的实例包括与pd-1特异性结合的抗体。具体的抗pd-1抗体包括但不限于纳武单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、sti-a1014和吡地利单抗(pidilzumab)。有关抗pd-1抗体的可用性、生产方法、作用机制和临床研究的一般性讨论，参见u.s.2013/0309250、u.s.6,808,710、u.s.7,595,048、u.s.8,008,449、u.s.8,728,474、u.s.8,779,105、u.s.8,952,136、u.s.8,900,587、u.s.9,073,994、u.s.9,084,776和naido et al.,british journal of cancer 111:2214-19(2014)。
[0168]
另一方面，免疫检查点抑制剂是pd-l1(也称为b7-h1或cd274)抑制剂。pd-l1抑制剂的实例包括与pd-l1特异性结合的抗体。具体的抗pd-l1抗体包括但不限于阿维鲁单抗(avelumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)和bms-936559。有关可用性、生产方法、作用机制和临床研究的一般性讨论，参见u.s.8,217,149、u.s.2014/
immunother 58:153-57(2009)。具体的ido阻断剂包括但不限于左旋-1-甲基色氨酸(l-1mt)和1-甲基-色氨酸(1mt)。qian et al.,cancer res 69:5498-504(2009)；和et al.,cancer immunol immunother 58:153-7(2009)。
[0177]
一方面，免疫检查点抑制剂是纳武单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)、吡地利单抗(pidilizumab)、sti-a1110、阿维鲁单抗(avelumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab、sti-a1014、伊匹单抗(ipilimumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、gsk2831781、bms-936559或med14736。
[0178]
化疗
[0179]
一方面，本文提供的方法包括将包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物或包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物与化疗联合施用于受试者。一方面，化疗包括表4中列出的抗癌药物或抗癌药物组合中的一种。
[0180]
表4
[0181]
[0182]
[0183]
[0184]
[0185]
[0186]
[0187]
[0188]
[0189]
[0190]
[0191][0192]
光热疗法
[0193]
一方面，本文提供的方法包括将hdac6激活的巨噬细胞或包含hdac6激活的巨噬细胞的组合物与光热疗法联合施用于受试者。光热疗法是指使用电磁辐射(最常见的是红外波长)来治疗各种医疗状况(包括癌症)的努力。这种方法是光动力疗法的延伸，其中光敏剂被特定的波段光激发。这种激活使敏化剂进入激发状态，然后释放振动能量(热量)，从而杀伤靶细胞。与光动力疗法不同，光热疗法不需要氧气与靶细胞或组织相互作用。目前的研究还表明，光热疗法能够使用更长波长的光，这种光能量较低，因此对其他细胞和组织的危害较小。
[0194]
目前正在研究用于光热疗法的大多数感兴趣的材料都是纳米级的。这背后的一个关键原因是在一定尺寸范围内(通常为20-300nm)的粒子观察到的增强的渗透性和保留效果。maeda et.al.,journal of controlled release,65(1-2),271-284(2000)。已观察到该范围内的分子优先积聚在肿瘤组织中。当肿瘤形成时，它需要新血管来刺激其生长；与常规血管相比，肿瘤内/附近的这些新血管具有不同的特性，例如不良的淋巴引流和杂乱无章、渗漏的脉管系统。与身体其他部位相比，这些因素导致肿瘤中某些粒子的浓度显著更
高。研究人员最近研究了将这种现象与主动靶向方式(例如抗体)结合起来。
[0195]
iv.定义
[0196]
术语“hdac6激活的巨噬细胞”是指已经用选择性hdac6抑制剂离体处理的幼稚巨噬细胞。另一方面，hdac6激活的巨噬细胞首先经选择性hdac6抑制剂离体处理，然后经巨噬细胞极化剂和/或肿瘤抗原离体处理。另一方面，hdac6激活的巨噬细胞首先经巨噬细胞极化剂和/或肿瘤抗原离体处理，然后经选择性hdac6抑制剂离体处理。
[0197]
如本文所使用的，术语“选择性hdac6抑制剂”、“hdac6选择性抑制剂”等是指在基于细胞的体外测定中优先抑制组蛋白去乙酰化酶6而不是一种或多种其他组蛋白去乙酰化酶同工型(例如hdac1、hdac2、hdac3、hdac4、hdac5、hdac7、hdac8、hdac9、hdac10和/或hdac11)的化合物。例如，hdac6 ic
50
＝5nm和hdac1 ic
50
为500nm的化合物是选择性hdac6抑制剂，其选择性比hdac1高100倍；hdac6 ic
50
＝5nm、hdac1 ic
50
＝500nm和hdac3 ic
50
＝50nm的化合物是选择性hdac6抑制剂，其选择性比hdac1高100倍，比hdac3高10倍；等等。一方面，选择性hdac6抑制剂优先抑制hdac6而不是hdac1。另一方面，选择性hdac6抑制剂优先抑制hdac6而不是hdac1和一种或多种其他hdac同工型。
[0198]
一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约5倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约10倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约15倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约20倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约30倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约40倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约50倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约100倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约150倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约200倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约250倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约500倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约750倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约1000倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约2000倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高至少约3000倍。在基于细胞的测定中，hdac6相对于其他hdac同工型的选择性可以使用本领域已知的方法来确定。
[0199]
另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高约10倍至约3000倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高约20倍至约3000倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高约50倍至约3000倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高约100倍至约3000倍。另一方面，选择性hdac6抑制剂的选择性比一种或多种其他hdac同工型高约500倍至约3000倍。
[0200]
一方面，使用来自sf9细胞中的杆状病毒表达系统的分离的人重组全长hdac来确定hdac6选择性。取决于正在测试的hdac同工型，乙酰化荧光肽用作底物，例如，衍生自p53
的残基379-382的一种。参见http://www.reactionbiology.com/webapps/site/hdacassay.aspx？page＝hdacs&id＝-％203。反应缓冲液由50mm tris-hcl ph 8.0、127mm nacl、2.7mm kcl、1mm mgcl2、1mg/ml bsa和终浓度为1％的dmso组成。将测试化合物在dmso中输送到酶混合物中，预孵育5-10分钟，然后加入底物并在30℃下孵育2小时。添加曲古抑菌素a和显影剂以分别淬灭反应并产生荧光。生成剂量反应曲线，并从产生的图中确定ic
50
值。参见bergman et al.,j med chem.55:9891
–
9899(2012)。选择性hdac6抑制剂意在包括母体化合物及其任何药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0201]
一方面，选择性hdac6抑制剂是shen and kozikowski,expert opinion on therapeutic patents 30:121-136(2020)中公开的化合物。
[0202]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是bergman et al.,j med chem.55:9891
–
9899(2012)中公开的化合物。
[0203]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2014072714中公开的化合物。
[0204]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2016067040中公开的化合物。
[0205]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2016190630中公开的化合物。
[0206]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2019139921中公开的化合物。
[0207]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是us 20150239869中公开的化合物。
[0208]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2015054474中公开的化合物。
[0209]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017075192中公开的化合物。
[0210]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2018089651中公开的化合物。
[0211]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2014181137中公开的化合物。
[0212]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2016067038中公开的化合物。
[0213]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017208032中公开的化合物。
[0214]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2016168598中公开的化合物。
[0215]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2016168660中公开的化合物。
[0216]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017218950中公开的化合物。
[0217]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是us 20160221973中公开的化合物。
[0218]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是us 20160222022中公开的化合物。
[0219]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是us 20160221997中公开的化合物。
[0220]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2014178606中公开的化合物。
[0221]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2015087151中公开的化合物。
[0222]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2015102426中公开的化合物。
[0223]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2015137750中公开的化合物。
[0224]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2018189340中公开的化合物。
[0225]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2018130155中公开的化合物。
[0226]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017222950中公开的化合物。
[0227]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017222951中公开的化合物。
[0228]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017222952中公开的化合物。
[0229]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2016031815中公开的化合物。
[0230]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017014170中公开的化合物。
[0231]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017014321中公开的化合物。
[0232]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017033946中公开的化合物。
[0233]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2019027054中公开的化合物。
[0234]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2019166824中公开的化合物。
[0235]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2019110663中公开的化合物。
[0236]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017018803中公开的化合物。
[0237]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017018805中公开的化合物。
[0238]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017023133中公开的化合物。
[0239]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2017065473中公开的化合物。
[0240]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是wo 2018183701中公开的化合物。
[0241]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式v的化合物：
[0242][0243]
其中：
[0244]
x选自由以下组成的组：
[0245][0246]
r1选自由氢和c
1-4
烷基组成的组；
[0247]
r2选自由任选取代的c
6-c
14
芳基和芳烷基组成的组；
[0248]
r3选自由任选取代的c
6-c
14
芳基、任选取代的5-至14-元杂芳基和-c(＝o)nrdre组成的组；
[0249]r4a
、r
4b
、r
4e
和r
4f
独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基和卤代烷氧基组成的组；
[0250]r4c
和r
4d
独立地选自由氢和c
1-4
烷基组成的组；或者
[0251]r4c
和r
4d
与它们所连接的碳原子一起形成-c(＝o)-；
[0252]r5a
、r
5b
、r
5c
和r
5d
独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c2-6炔基、c1-6烷氧基、c
1-6
卤代烷基和卤代烷氧基组成的组；
[0253]
z选自由-o-、-n(r8)-和-c(＝o)-组成的组；或者
[0254]
z不存在；
[0255]
r8选自由氢、c
1-4
烷基、任选取代的c
3-6
环烷基、任选取代的c
6-c
14
芳基、芳烷基、任选取代的5-至14-元杂芳基和杂芳烷基组成的组；
[0256]
m是0、1或2；
[0257]
n是1、2、3、4、5或6；
[0258]
代表单键或双键；
[0259]
ra、rb、rd和re独立地选自由氢、c
1-6
烷基、任选取代的c
3-6
环烷基、任选取代的c
6-c
14
芳基、任选取代的5-至14-元杂芳基组成的组；或者
[0260]
ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成任选取代的3-至12-元杂环；
[0261]
rd和re与它们所连接的氮原子一起形成任选取代的3-至12-元杂环；和
[0262]
rc是c
1-4
烷基。
[0263]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式v的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，条件是当z不存在时，r3是双环或三环c
10-14
芳基、双环或三环9-至14-元杂芳基、或-c(＝o)nrdre。
[0264]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式v的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，其中x是x-1、x-2、x-3或x-4；
[0265]
z是-o-；
[0266]
r1选自由氢和c
1-4
烷基组成的组；
[0267]
r2是任选取代的c
6-c
14
芳基；
[0268]
r3选自由任选取代的c
6-c
14
芳基和任选取代的5-至14-元杂芳基组成的组；
[0269]r4a
和r
4b
独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基和卤代烷氧基组成的组；
[0270]r4c
和r
4d
独立地选自由氢和c
1-4
烷基组成的组；
[0271]r5a
、r
5b
、r
5c
和r
5d
独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基和卤代烷氧基组成的组；
[0272]
ra和rb独立地选自由氢和c
1-6
烷基组成的组；或者
[0273]
ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成3-至7-元杂环；和
[0274]
rc是c
1-4
烷基。
[0275]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式v的化合物，其中x是x-1。另一方面，r1是氢。另一方面，r2是任选取代的苯基。另一方面，r2是任选取代的1-萘基。另一方面，r2是任选取代的2-萘基。另一方面，r2是芳烷基。
[0276]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式v的化合物，其中x是x-2。另一方面，z是-o-。另一方面，z是-n(r8)-。另一方面，z是-c(＝o)-。另一方面，r3是任选取代的c
6-c
14
芳基。另一方面，r3是任选取代的5-至14-元杂芳基。另一方面，r3是c(＝o)nrdre。另一方面，z不存在并且r3是双环或三环c
10-14
芳基、双环或三环9-至14-元杂芳基、或-c(＝o)nrdre。
[0277]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式v的化合物，其中x是x-3。
[0278]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式v的化合物，其中x是x-4。
[0279]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式v的化合物，其中x是x-5。
[0280]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式i的化合物：
[0281][0282]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0283]r6a
、r
6b
、r
6c
、r
6d
和r
6e
各自独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、卤代烷氧基、任选取代的c
3-6
环烷基、任选取代的苯基、任选取代的5-或6-元杂芳基和任选取代的5-或6-元杂环组成的组；
[0284]
ra和rb独立地选自由氢和c
1-4
烷基组成的组；或者
[0285]
ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成3-至7-元杂环；
[0286]
rc是c
1-4
烷基；和
[0287]
n是1、2或3。
[0288]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式i的化合物，其中r
6a
、r
6b
、r
6c
、r
6d
和r
6e
各自独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基和c
1-4
卤代烷基组成的组。另一方面，r
6a
、r
6b
、r
6c
、r
6d
和r
6e
各自独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组。
[0289]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式i的化合物，其中n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0290]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式ii的化合物：
[0291][0292]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0293]r7a
、r
7b
、r
7c
、r
7d
和r
7e
各自独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb，-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、卤代烷氧基、任选取代的c
3-6
环烷基、任选取代的苯基、任选取代的5-或6-元杂芳基和任选取代的5-或6-元杂环组成的组；
[0294]
ra和rb独立地选自由氢和c
1-4
烷基组成的组；或者
[0295]
ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成3-至7-元杂环；
[0296]
rc是c
1-4
烷基；和
[0297]
n是1、2或3。
[0298]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式ii的化合物，其中r
7a
、r
7b
、r
7c
、r
7d
和r
7e
各自独立地选自由氢、卤素、羟基、硝基、氰基、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基和c
1-4
卤代烷基组成的组。另一方面，r
7a
、r
7b
、r
7c
、r
7d
和r
7e
各自独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组。
[0299]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式ii的化合物，其中n是1。另一方面，n是2。
另一方面，n是3。
[0300]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式iii的化合物：
[0301][0302]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0303]r4a
和r
4b
独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组；
[0304]r4c
和r
4d
独立地选自由氢和甲基组成的组；
[0305]
m是0或1；
[0306]
n是1、2或3；和
[0307]
代表单键或双键。
[0308]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式iii的化合物，其中m是0并且代表双键。
[0309]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式iii的化合物，其中m是1并且代表单键。
[0310]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式iii的化合物，其中n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0311]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式iv的化合物：
[0312][0313]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0314]r5a
和r
5c
独立地选自由氢、卤素、氰基、c
1-4
烷基和c
1-4
烷氧基组成的组；和
[0315]
n是1、2或3。
[0316]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是具有式iv的化合物，其中n是1。另一方面，n是2。另一方面，n是3。
[0317]
另一方面，选择性hdac6抑制剂是表1的化合物或其药学上可接受的盐。
[0318]
表1
[0319]
[0320]
[0321]
[0322]
[0323]
[0324]
[0325]
[0326]
[0327]
[0328]
[0329]
[0330]
[0331]
[0332]
[0333]
[0334]
[0335]
[0336]
[0337]
[0338]
[0339][0340]
在本文中，如本文所使用的术语“巨噬细胞极化剂”是指极化巨噬细胞的试剂。巨噬细胞极化是巨噬细胞响应来自其微环境的信号而采用不同的功能程序的过程。巨噬细胞的极化可以产生不同的异源功能和表型，这取决于它们在刺激持续时间和空间定位方面的激活。非限制性示例性巨噬细胞极化剂包括但不限于脂多糖(lps)、干扰素-γ(ifn-γ)、白细胞介素-2、白细胞介素-3、白细胞介素-4、白细胞介素-5、白细胞介素-6、白细胞介素-10、白细胞介素-12、白细胞介素-13、白细胞介素-18、白细胞介素-23、转化生长因子β(tgf-β)、糖皮质激素、脂磷壁酸(lta)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、肿瘤坏死因子(tnf)、免疫复合物(ic)、白细胞介素-1β、腺苷或其组合。参见例如rubio et al.,clinical and translational oncology 21:391-403(2019)。
[0341]
在本文中，如本文所使用的术语“肿瘤抗原”是指可以在肿瘤细胞中产生并在宿主中引发免疫反应的抗原物质。肿瘤抗原可以分为两类。一类是突变的致癌基因和肿瘤抑制基因的产物，另一类是其他突变基因的产物，包括过表达或异常表达的细胞蛋白、致癌病毒产生的肿瘤抗原、癌胚抗原(oncofetal antigen)、改变的细胞表面糖脂和糖蛋白以及细胞类型特异性的分化抗原。非限制性示例性肿瘤抗原包括但不限于甲胎蛋白(afp)、癌胚抗原(cea)、ca-125、muc-1、上皮肿瘤抗原(eta)、酪氨酸酶、黑色素瘤相关抗原(mage)和p53。
[0342]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“卤代”或“卤素”是指-cl、-f、-br或-i。一方面，卤代是-cl或-f。一方面，卤代是-cl。
[0343]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“硝基”是指-no2。
[0344]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“氰基”是指-cn。
[0345]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“羟基”是指-oh。
[0346]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“烷基”是指含有一至十二个碳原子的未取代的直链或支链脂肪烃，即c
1-12
烷基，或指定的碳原子数，例如，c1烷基如甲基、c2烷基如乙基、c3烷基如丙基或异丙基、c
1-3
烷基如甲基、乙基、丙基或异丙基等。一方面，烷基是c
1-10
烷基。另一方面，烷基是c
1-6
烷基。另一方面，烷基是c
1-4
烷基。另一方面，烷基是直链c
1-10
烷基。另一方面，烷基是支链c
3-10
烷基。另一方面，烷基是直链c
1-6
烷基。另一方面，烷基是支链c
3-6
烷基。另一方面，烷基是直链c
1-4
烷基。另一方面，烷基是支链c
3-4
烷基。另一方面，烷基是直链或支链c
3-4
烷基。非限制性示例性c
1-10
烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、3-戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。非限制性示例性c
1-4
烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基和异丁基。
[0347]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“环烷基”是指饱和和部分不饱和(含有一个或两个双键)的环状脂肪烃，其含有一至三个具有三至十二个碳原子的环，即c
3-12
环烷基，或指定的碳数。一方面，环烷基具有两个环。一方面，环烷基具有一个环。另一方面，环烷基选自c
3-8
环烷基。另一方面，环烷基选自c
3-6
环烷基。非限制性示例性环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片基(norbornyl)、萘烷、金刚烷基、环己烯基、环戊烯基和环己烯基。
[0348]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“任选取代的环烷基”是指如上定义的环烷基未被取代或被一个、两个或三个独立地选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、羟基、硝基、氰基、-sch3、-scf3、-nrarb、-c(o)nrarb、-c(＝o)ch3、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、任选取代的c
3-8
环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基和任选取代的杂环。一方面，任选取代的环烷基被两个取代基取代。另一方面，任选取代的环烷基被一个取代基取代。
[0349]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“烯基”是指如上定义的包含一个、两个或三个碳-碳双键的烷基。一方面，烯基选自c
2-6
烯基。另一方面，烯基选自c
2-4
烯基。非限制性示例性烯基包括乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、仲丁烯基、戊烯基和己烯基。
[0350]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“炔基”是指如上定义的包含一个至三个碳-碳三键的烷基。一方面，炔基具有一个碳-碳三键。一方面，炔基选自c
2-6
炔基。另一方面，炔基选自c
2-4
炔基。非限制性示例性炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、戊炔基和己炔基。
[0351]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“卤代烷基”是指被一个或多个氟、氯、溴和/或碘原子取代的烷基。一方面，烷基被一个、两个或三个氟和/或氯原子取代。另一方面，卤代烷基是c
1-6
卤代烷基。另一方面，卤代烷基是c
1-4
卤代烷基。非限制性示例性卤代烷基包括氟甲基、2-氟乙基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟丙基、4,4,4三氟丁基和三氯甲基。
[0352]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“烷氧基”是指连接到末端氧原子的任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的烯基或任选取代的炔基。一方
3-基)、呋喃基(例如，2-呋喃基和3-呋喃基)、吡咯基(例如，1h-吡咯-2-基)和1h-吡咯-3-基)、咪唑基(例如，2h-咪唑-2-基和2h-咪唑-4-基)、吡唑基(例如，1h吡唑-3-基、1h-吡唑-4-基和1h-吡唑-5-基)、吡啶基(例如，吡啶-2-基、吡啶-3-基和吡啶-4-基)、嘧啶基(例如，嘧啶-2-基、嘧啶-4-基和嘧啶-5-基)、噻唑基(例如噻唑-2-基、噻唑-4-基和噻唑-5-基)、异噻唑基(例如异噻唑-3-基、异噻唑-4-基和异噻唑-5-基)、恶唑基(例如，恶唑-2-基、恶唑-4-基和恶唑-5-基)、异恶唑基(例如，异恶唑-3-基、异恶唑-4-基和异恶唑-5-基)和吲唑基(例如，1h-吲唑-3-基)。术语“杂芳基”也意在包括可能的n氧化物。非限制性示例性n氧化物是吡啶基n氧化物。
[0359]
一方面，杂芳基是5-或6-元杂芳基。一方面，杂芳基是5-元杂芳基，即杂芳基是具有5个环原子的单环芳环系统，其中环的至少一个碳原子被独立地选自氮、氧和硫的杂原子取代。非限制性示例性5-元杂芳基包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、恶唑基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基和异恶唑基。
[0360]
另一方面，杂芳基是6-元杂芳基，例如杂芳基是具有6个环原子的单环芳环系统，其中环的至少一个碳原子被氮原子取代。非限制性示例性6-元杂芳基包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基。
[0361]
另一方面，杂芳基是9-至14-元双环芳环系统，其中一个环的至少一个碳原子被独立地选自由氧、氮和硫组成的组的杂原子取代。非限制性示例性9-至14-元双环芳环系统包括：
[0362][0363]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“任选取代的杂芳基”是指如上定义的杂芳基未被取代或被一至四个独立地选自由卤素、羟基、硝基、氰基、-sch3、-scf3、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、卤代烷氧基、任选取代的c
3-12
环烷基、任选取代的c
6-c
14
芳基、任选取代的5-至14-元杂芳基和任选取代的3-至14-元杂环组成的组的取代基取代，其中ra和rb独立地选自由氢和c
1-6
烷基组成的组；或者ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成3-至12-元杂环；并且rc是c
1-4
烷基。一方面，任选取代的杂芳基具有一个取代基。任何可用的碳或氮原子都可以被取代。
[0364]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“杂环”是指含有一个、两个、或三个环的饱和和部分不饱和(例如，含有一个或两个双键)的环状基团，具有三至十四个环成员，即3-至14-元杂环，其中一个环的至少一个碳原子被杂原子取代。每个杂原子独立地选自由氧、硫(包括亚砜和砜)和/或氮原子组成的组，它们可以被氧化或季铵化。术语“杂环”意在包括其中环-ch
2-被-c(＝o)-取代的基团，例如环状脲基(如2-咪唑啉酮)和环状酰胺基(如β-内酰胺、γ-内酰胺、δ-内酰胺、ε-内酰胺和哌嗪-2-酮)。术语“杂环”还意在包括具有稠合的任选取代的芳基的基团，例如吲哚啉基。一方面，杂环基选自含有一个环和一个或两个氧原子和/或氮原子的5-或6-元环状基团。杂环可以任选地通过任何可用的碳或氮原子连接到分子的其余部分。非限制性示例性杂环基包括二恶烷基、四氢吡喃基、2-氧代吡咯烷-3-基、哌嗪-2-酮、哌嗪-2,6-二酮、2-咪唑啉酮、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯
烷基和吲哚啉基。
[0365]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“任选取代的杂环”是指如上定义的杂环未被取代或被一至四个独立地选自由卤素、羟基、硝基、氰基、-sch3、-scf3、-nrarb、-c(＝o)nrarb、-c(＝o)rc、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、卤代烷氧基、任选取代的c
3-12
环烷基、任选取代的c
6-c
14
芳基、任选取代的5-至14-元杂芳基和任选取代的3-至14-元杂环组成的组的取代基取代，其中ra和rb独立地选自由氢和c
1-6
烷基组成的组；或者ra和rb与它们所连接的氮原子一起形成3-至12-元杂环；并且rc是c
1-4
烷基。
[0366]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“芳烷基”是指被一个、两个或三个任选取代的芳基取代的烷基。一方面，任选取代的芳烷基是被一个任选取代的芳基取代的c
1-4
烷基。一方面，芳烷基是被一个任选取代的芳基取代的c1或c2烷基。一方面，芳烷基是被一个任选取代的苯基取代的c1或c2烷基。非限制性示例性芳烷基包括苄基、苯乙基、-chph2、-ch2(4-f-ph)、-ch2(4-me-ph)、-ch2(4-cf
3-ph)和ch(4-f-ph)2。
[0367]
在本文中，单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“杂芳烷基”是指被一个、两个或三个任选取代的杂芳基取代的烷基。一方面，杂芳烷基是被一个任选取代的杂芳基取代的c
1-4
烷基。一方面，芳烷基是被一个任选取代的杂芳基取代的c1或c2烷基。一方面，杂芳烷基是被一个任选取代的杂芳基取代的c1或c2烷基。非限制性示例性杂芳烷基包括：
[0368][0369]
术语“hdac”是指从蛋白质中去除乙酰基(例如组蛋白n末端的赖氨酸残基的ε-氨基)的酶家族。hdac可以是任何人类hdac同工型，包括hdac1、hdac2、hdac3、hdac4、hdac5、hdac6、hdac7、hdac8、hdac9、hdac10和hdac11。hdac也可以来源于原生动物或真菌来源。
[0370]
术语“治疗”等是指消除、减少、缓解、逆转和/或改善疾病或病况和/或与之相关的症状。尽管不排除，治疗疾病或病况并不要求完全消除疾病、病况或与之相关的症状，包括治疗急性或慢性体征、症状和/或功能障碍。如本文所使用的，术语“治疗”等可以包括“预防性治疗”，其是指在没有疾病或病况但有风险或易于再发展疾病或病况或复发疾病或病况的受试者中，降低再发展疾病或病况的可能性，或降低先前控制的疾病或病况复发的可能性，“治疗”因此还包括复发预防或阶段预防。术语“治疗”和同义词考虑将治疗有效量的本文的化合物施用于需要这种治疗的个体，例如哺乳动物患者，包括但不限于人类和兽医动物。治疗可以针对症状，例如，以抑制症状。它可以在短期内起作用，可以在中期进行，或者可以是长期治疗，例如在维持治疗的背景下。
[0371]
如本文所使用的，术语“治疗有效量”或“治疗剂量”是指活性成分的量，当施用时，足以有效地递送活性成分以治疗有需要的个体(例如人类患者)的感兴趣的病况或疾病。在癌症或其他增殖性病症的情况下，治疗有效量的药剂可以减少(即，在一定程度上延缓并优选停止)不需要的细胞增殖；减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制(即，在一定程度上延缓并优选停止)癌细胞浸润到外周器官；抑制(即，在一定程度上延缓并优选停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；减少靶细胞中的hdac信号传导；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在一定程度上所施用的化合物或组合物可以阻止生长和/或杀死现有的癌细胞，它可能具有细胞抑制和/或细胞毒性。
[0372]
在描述本文的上下文中(尤其是在权利要求的上下文中)使用的术语“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”、“该/所述(the)”和类似的指称应被解释为涵盖单数和复数，除非另有说明。本文中数值范围的记载仅用作单独引用落入该范围内的每个单独的值的速记方法，除非本文另有说明，并且每个单独的值和子范围被并入说明书中，就好像其在本文中单独记载一样。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“诸如”和“类似”)的使用旨在更好地说明本文并且不是对本文范围的限制，除非另有声明。说明书中的任何语言都不应被解释为指示任何未要求保护的要素对于本文的实践是必不可少的。
[0373]
如本文所使用的，术语“约/大约”包括记载的数字
±
10％。因此，“约10”意味着9到11。
[0374]
如本文所使用的，术语“受试者”是指需要或可能受益于用hdac6激活的巨噬细胞进行治疗的任何人或哺乳动物。这些受试者中最重要的是人，尽管本文提供的方法和组合物并不旨在受此限制。其他受试者包括兽医动物，例如牛、羊、猪、马、狗、猫等。在一个实施方案中，受试者是人。在一个实施方案中，受试者是哺乳动物。
[0375]
选择性hdac6抑制剂可以以盐存在。如本文所使用的，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐或两性离子形式。本发明化合物的盐可以在化合物的最终分离和纯化过程中制备，或者通过使化合物与具有合适阳离子的酸反应来分别制备。本发明化合物的药学上可接受的盐可以是与药学上可接受的酸形成的酸加成盐。可用于形成药学上可接受的盐的酸的实例包括无机酸例如硝酸、硼酸、盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸例如草酸、马来酸、琥珀酸、酒石酸和柠檬酸。选择性hdac6抑制剂的盐的非限制性实例包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、2-羟乙基磺酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、抗坏血酸盐、羟乙基磺酸盐、水杨酸盐、甲磺酸盐、均三甲苯磺酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡萄糖酸盐、甲磺酸盐、乙二磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。此外，选择性hdac6抑制剂中存在的可用氨基可以用以下进行季铵化：甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸盐；癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；以及苄基溴和苯乙基溴。本文中出现的对本文化合物的任何提及旨在包括选择性hdac6抑制剂及其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
[0376]
实施例
[0377]
一般方法
[0378]
细胞培养：sm1小鼠黑色素瘤细胞从加利福尼亚大学洛杉矶分校的a.ribas博士处获得，并在rpmi 1640、1％青霉素-链霉素和10％胎牛血清中在培养箱中在37℃和5％co2下培养。
[0379]
基因表达的定量分析。按照qiazol裂解试剂(qiagen,79306)的制造商说明书从细胞中分离总rna。使用nanodrop one分光光度计(nanodrop technologies)进行rna定量。使用iscript cdna合成试剂盒(bio-rad,1708891)将260/280nm的吸光度比值超过1.9的样品
用于cdna合成。从1μg总rna合成的cdna用无核酸酶水按1:10稀释。在cfx96实时系统(bio-rad)上使用iq sybr green supermix(bio-rad,1708882)进行定量pcr分析。使用2-δδct
方法进行基因表达分析，并将靶标mrna水平标准化为gapdh表达。根据制造商的说明书使用循环条件。在进行的所有实验中，通过熔解曲线分析证实了单个pcr产物的扩增。
[0380]
小鼠。涉及小鼠的动物实验是按照乔治华盛顿大学机构护理和使用委员会(iacuc)批准的方案(#a354)进行的。c57bl/6雌性小鼠购自charles river laboratories(wilmington,massachusetts,usa)。使用sm1肿瘤细胞进行体内研究，这些细胞在肿瘤植入前在体内从小鼠传代到小鼠至少5次。将悬浮在100μl磷酸盐缓冲盐水(pbs)(corning,21-040-cv)中的1.0
×
106个体内传代的sm1黑色素瘤细胞皮下注射小鼠。一旦肿瘤可触及，即在肿瘤植入后约5天，开始预处理阶段。将笼子随机分配到不同的治疗组，并用测试物品或溶媒对照对小鼠进行处理。根据我们的iacuc方案，对小鼠进行处理，直到对照组中的肿瘤达到最大尺寸。每隔一天使用卡尺测量进行肿瘤体积测量，并使用公式l
×
w2/2计算。进行所有动物研究时都考虑了毒性，并且我们定期监测毒性的早期迹象。重点是死亡率、体重和食物消耗。在终点，对每种情况进行了尸检评估，包括对肝脏等器官的肝毒性、脾肿大和肺转移性结节进行总的外观检查。shen et al.,j med chem.62:8557-8577(2019)。
[0381]
骨髓来源的巨噬细胞：对于巨噬细胞分离，按照iacuc批准的方案使用来自6-12周龄的c57bl/6小鼠的骨髓。简而言之，在去除骨骼肌后分离股骨和胫骨。用补充有非必需氨基酸的rpmi完全培养基冲洗骨髓。骨髓的单细胞悬液通过反复移液来制备，并与20ng/ml的小鼠重组m-csf(biolegend)在37℃下孵育4天以分化成巨噬细胞。
[0382]
流式细胞术：流式细胞术是按照前面描述的方案进行的。knox et al.,sci rep.2019oct 10；9(1):14824.doi:10.1038/s41598-019-51403-6。简而言之，按照iacuc方案对小鼠实施安乐死，并将肿瘤细胞加工成单细胞悬液，通过流式细胞术和肿瘤消化缓冲液进行分析。以下抗体用于对不同免疫细胞表达的细胞表面标记进行染色。除非另有说明，否则所有抗体均购自biolegend(san diego,ca)。骨髓细胞表面标记如下：apc抗小鼠cd80(克隆16-10a1)、pe/cy7抗小鼠cd206(mmr)(克隆c068c2)、apc/fire
tm
750抗小鼠cd45.2(克隆104)、fitc抗小鼠h-2(克隆m1/42)、brilliant violet 785
tm
抗小鼠f4/80(克隆bm8)和alexa700抗小鼠cd3(克隆17a2)。为了区分mhci和与siinfekl结合的mhci，我们使用了与siinfekl抗体结合的apc抗小鼠h-2kb(克隆25-d1.16)。在bd celesta上进行多色流式数据采集，并使用flowjo软件(10.3版)进行数据分析。使用graphpad prism软件(7.03版)进行统计分析。
[0383]
实施例1
[0384]
siinfekl肽呈递和xpt的效率
[0385]
内源性肽通常通过mhc-i呈递给cd8 t细胞，外源性(来自其他细胞，例如肿瘤)肽通过mhc-ii呈递给cd4 t细胞。然而，当外源性肽通过mhc-i呈递时，它通过cd8 t细胞的激活而导致抗肿瘤免疫。这种机制称为交叉呈递(xpt)。交叉呈递与放疗高度相关，在放疗中产生过多的新抗原。为了了解hdac6抑制对抗原xpt的作用，使用了siinfekl(seq id no.1)肽模型。siinfekl是通过卵白蛋白的蛋白水解切割而产生的8个氨基酸的肽，它负载在内质网中的mhc-i上并转运到细胞表面以呈递给t细胞受体(tcr)。利用识别负载siinfekl肽的mhc-i的高度特异性抗体，确定抗原xpt的效率。
[0386]
当极化的巨噬细胞暴露于增加浓度的ova肽时，与m0和m2巨噬细胞相比，m1巨噬细胞在通过mhc-i交叉呈递siinfekl肽方面表现更好。来源于hdac6敲除小鼠的巨噬细胞在siinfekl xpt中表现出类似的增加，尽管效率更高。图1。预处理nexta增加了m1 xpt。图2。同样，在用nexta处理的sm1 ova小鼠黑色素瘤细胞中，mhc i和负载siinfekl的mhc-i的存在增加。图3。
[0387]
实施例2
[0388]
hdac抑制剂降低巨噬细胞向m2表型的极化
[0389]
从c57bl/6小鼠的股骨和胫骨分离的骨髓衍生的巨噬细胞(bmdm)用m-csf分化为巨噬细胞。这些幼稚巨噬细胞经nexta预处理，并用lps/ifnγ极化为m1巨噬细胞或用il4/il13极化为m2巨噬细胞。如流式细胞术所示，nexta预处理降低了m2巨噬细胞的极化，但不影响m1巨噬细胞。参见图5和图4。
[0390]
通过定量实时pcr进一步验证m2极化标记在基因表达水平的表达，表明精氨酸酶i、il-10和tgfβ这些肿瘤促进因子的表达降低。图9、图10和图11。m1极化标记和抗肿瘤、促炎细胞因子(如tnfα和il-1b)的表达增加。图12和图13。这些数据表明，经nexta预处理会影响细胞信号传导和幼稚巨噬细胞的编程，以响应肿瘤微环境(tme)中的极化因子。
[0391]
实施例3
[0392]
同系sm1小鼠黑色素瘤模型中的过继转移治疗
[0393]
在有或没有hdac6抑制剂预处理的情况下，从小鼠骨髓中分离出的幼稚巨噬细胞向m1表型进行离体极化。三个治疗组，包括肿瘤内植入磷酸盐缓冲盐水(对照组)、经hdac6抑制剂预处理的1x10
6 m1巨噬细胞和未经hdac6抑制剂预处理的1x10
6 m1巨噬细胞。为幼稚和m2巨噬细胞建立了类似的治疗组。这些研究使用了同系sm1小鼠黑色素瘤模型，该模型保留了肿瘤免疫系统。此外，就突变负荷而言，sm1小鼠黑色素瘤细胞类似于人类黑色素瘤。当肿瘤大小为5x5mm时，对小鼠幼稚、m1和m2巨噬细胞进行过继转移治疗，并允许肿瘤生长至终点，即肿瘤大小为2cm直径。参见图6、图7、图8和图14。
[0394]
在m1巨噬细胞治疗组中，与未经nexta预处理的m1巨噬细胞和对照组相比，经nexta预处理抑制了肿瘤生长。图7。在m2巨噬细胞治疗组中，肿瘤的生长对小鼠有害，并且由于肿瘤尺寸大而不得不处死。图8。此外，图15和图16显示了m1/m2巨噬细胞比值指示tme的免疫状态。抗肿瘤m1巨噬细胞与肿瘤大小呈负相关，并且肿瘤大小与促肿瘤m2巨噬细胞呈正相关。图17显示了m1/m2比值与肿瘤大小的相关性。这些研究表明，在肿瘤内过继治疗之前对巨噬细胞进行hdac6抑制剂预处理会引起抗肿瘤免疫。
[0395]
图18了显示在单独的sm1小鼠黑色素瘤实验中显示治疗方案的示意图。与溶媒组相比，m1+nexta显示肿瘤大小减小。图19。生存分析表明与其他治疗组相比，m1+nexta组具有更好的生存率。图20。来源于hdac6 ko的m1巨噬细胞也显示出肿瘤生长减慢，这表明hdac6在巨噬细胞功能中的主要作用。图21。
[0396]
实施例4
[0397]
用选择性hdac6抑制剂处理的m0巨噬细胞与m1巨噬细胞相似
[0398]
用选择性hdac6抑制剂处理的m0巨噬细胞在其细胞因子谱方面与m1巨噬细胞相似。图22了显示在经选择性hdac6抑制剂处理的m0巨噬细胞中，m2抗炎细胞因子tgfβ和il10的表达降低。图23显示了经nexta处理后，m1促炎细胞因子(如il12、tnfα和il1β)表达增加。
[0399]
实施例5
[0400]
抗原呈递和加工基因的上调
[0401]
图24显示了与m0相比，经nexta处理后的m1巨噬细胞中的抗原呈递和加工基因(如tap1、tap2、tapbp和erap1)增加。
[0402]
实施例6
[0403]
hdac6抑制与放射相结合
[0404]
放射和hdac6抑制的组合以时间依赖性方式增加抗原呈递。稳定表达ova肽的sm1细胞暴露于4gy放射、nexta或两者的组合时，显示出通过流式细胞术测量的mhc-i介导的siinfekl抗原呈递呈时间依赖性增加。放射和hdac6抑制增加了肿瘤细胞中的抗原呈递。图25。nexta和放疗的顺序在肿瘤细胞中的有效抗原呈递显示在图26中。
[0405]
实施例7
[0406]
巨噬细胞中的抗原交叉呈递
[0407]
示意图显示了通过巨噬细胞的抗原交叉呈递的工作流程，其中sm1-ova细胞暴露于9-11gy放射，将ova肽释放到培养基中。hdac6抑制增加了巨噬细胞中的抗原交叉呈递，这显示在图27中。
[0408]
暴露于来自放射暴露的sm1-ova细胞的条件培养基的m0、m1和m2 bmdm(骨髓衍生的巨噬细胞)的交叉呈递和通过流式细胞术由apc-mhc-i siinfekl抗体测量的抗原呈递显示于图28、图29和图30。用hdac6抑制剂治疗可增加巨噬细胞中的抗原交叉呈递。
[0409]
实施例8
[0410]
选择性hdac6抑制剂诱导巨噬细胞的功能改变
[0411]
与对hdac6具有高选择性的hdac抑制剂相比，对hdac6具有低选择性的hdac抑制剂不会在肿瘤或免疫细胞中诱导尽可能多的免疫学改变。例如，acy1215和acy241，分别具有12倍和13倍的hdac6选择性(图31；参见bergman et al.,j med chem.55:9891-9899(2012)；santo et al.,blood 119:2579-2589(2012)；huang et al.,oncotarget 8:2694-2707(2017)；jochems et al.,neuropsychopharmacology 39:389-400(2014))，不会降低pd-l1的表达(图32)。选择性hdac6抑制剂nexta降低了巨噬细胞的促肿瘤m2表型，但部分选择性hdac6抑制剂acy241没有降低m2(数据未显示)。与hdac6抑制剂对巨噬细胞的强烈作用相反，它们在树突状细胞、t细胞和自然杀伤细胞中的作用似乎很小，因为在体外治疗后缺乏激活标记的产生。图33和图34。
[0412]
与泛-hdac抑制剂(例如lbh589)相比，选择性hdac6抑制剂具有较低的细胞毒性，后者可在非转化细胞中诱导不希望的毒性。图35。巨噬细胞对hdac抑制特别敏感。然而，nexta诱导超过5μm的高细胞毒性。图36。
[0413]
本文描述的所有特征(包括任何所附权利要求、摘要和附图)和/或如此公开的任何方法的所有步骤可以以任何组合与上述方面中的任何一个组合，除非在组合中至少一些这样的特征和/或步骤是相互排斥的。
[0414]
应当理解，前述方面和例证不旨在在任何方面限制本文的范围，并且本文提供的权利要求旨在涵盖所有方面、实施方案和例证，无论是否在此明确提供。
[0415]
本文引用的所有专利、专利申请和出版物均通过引用全部并入。