技术特征：
1.一种解脲脲原体的微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，其包括：1)用于鉴定解脲脲原体(ureaplasma urealyticum，uu)的引物和探针，所述引物和探针包括正向引物uu-f、反向引物uu-r和探针序列uu-p，其特征在于所述正向引物uu-f的序列为：5’attatcaaaacgtgcaatga 3’(2187nt-2206m)；所述反向引物uu-r的序列为：5’accaactaaaaatgctgctaaa 3’(2250nt-2271nt)；所述探针序列uu-p的序列为：5’accatcaccactttatt 3’(2208nt-2224nt)。2)制备解脲脲原体微滴式数字ddpcr反应液：3)定量检测待测样本中解脲脲原体的含量。2.根据权利要求1所述的绝对定量检测方法，其特征在于，所述的步骤3)中，反应液每份20μl，每份反应液中含组分：ddpcr预混液10μl，引物uu-f、uu-r、gapdh-f、gapdh-r各900nm，探针uu-p，gapdh-p各250nm。3.根据权利要求1所述的用于扩增解脲脲原体的引物、探针，其特征在于，所述探针序列uu-p的一个末端具有第一荧光报告基团，另一个末端具有第一荧光淬灭基团；所述探针序列gapdh-p的一个末端具有第二荧光报告基团，另一个末端具有第二荧光淬灭基团。4.根据权利要求1所述的用于扩增解脲脲原体的引物、探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团和第二荧光报告基团选自fam、hex，joe、rox、vic、texas red、cy3或cy5；所述第一荧光荧光淬灭基团和第二荧光淬灭基团选自tamra、bhq1、bhq2、mgb或nfq。5.根据权利要求1所述的用于扩增解脲脲原体的引物、探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团置于探针序列uu-p的5’端，所述第一荧光淬灭基团置于探针序列uu-p的3’端；所述第二荧光报告基团置于探针序列gapdh-p的5’端，所述第二荧光淬灭基团置于探针序列gapdh-p的3’端。6.根据权利要求1所述的用于扩增解脲脲原体的引物、探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团和第二荧光报告基团是不同的；优选的，第一荧光报告基团为fam，第二荧光报告基团为vic。7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，根据所述试剂盒的如下反应结果判断待测样本的结果：当第一荧光报告基团和第二荧光报告基团均为阳性时，待测样本为解脲脲原体阳性；当第一荧光报告基团为阴性，第二荧光报告基团为阳性时，待测样本为解脲脲原体阴性；当第一荧光报告基团和第二荧光报告基团均为阴性时，待测样本采样不合格或dna提取失败。
技术总结
本发明属于生物技术领域，涉及一种绝对定量检测解脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum，Uu)的方法以及检测试剂盒。根据解脲脲原体10种亚型的ParC基因一致序列设计第一套引物、探针(标记FAM)，根据人类甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)序列设计第二套引物、探针(标记VIC)。本发明能同时检测解脲脲原体10个亚型且与微小脲原体无交叉反应，克服了qPCR核酸检测定量不准确，检测结果存在“灰区”等缺点。本发明的方法及试剂盒具有特异性高、灵敏度高、重复性好、不依赖标准曲线的绝对定量的特点。本发明的方法及试剂盒可用于临床实验室对解脲脲原体感染的辅助诊断和抗菌药物使用后治疗效果的监测，具有潜在的应用价值。具有潜在的应用价值。具有潜在的应用价值。
技术研发人员：黄艳芳 赵缜
受保护的技术使用者：黄艳芳
技术研发日：2021.01.14
技术公布日：2022/7/18