技术特征：
1.一种小鼠耳蜗螺旋器的分离和体外培养方法，其特征在于，包含如下步骤：(1)将断头后的小鼠剪开头部皮肤，用手术刀片沿颅骨矢状线将头部切开，转移至装有无菌pbs的培养皿中，去除脑组织；(2)用精细镊剔除耳蜗与颞骨的链接，切断耳蜗与前庭组织的连接，将耳蜗取出，并转移至装有dmem/f12培养液的培养皿中；(3)从耳蜗底转向顶转剥离骨迷路，得到绕蜗轴的螺旋韧带和螺旋器，用精细镊夹住螺旋韧带和螺旋器的底部，将其从蜗轴上解旋下来，从底部将螺旋韧带和包含耳蜗螺旋器的基底膜分离，获得包含耳蜗螺旋器的基底膜；(4)耳蜗螺旋器的培养：取适量胶原凝胶滴到培养皿中央，将所述基底膜浸入胶原凝胶，将培养皿移入co2培养箱温育20
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30分钟后取出，见胶原凝胶凝固成胶块，基底膜被固定在其中，向培养皿中加入适量无血清培养液以淹没胶块为度，最后放回co2培养箱中培养，培养液隔日更换为补料培养基，培养7
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10天，其中所述胶原凝胶包含鼠尾胶和终浓度为50mm的植酸，所述补料培养基在所述无血清培养液的基础上添加终浓度为20mm的间隙连接蛋白30。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶原凝胶通过如下方法制备：鼠尾胶、10
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bme以及2% na2co3比例为9：1:1，添加终浓度50mm的植酸，混合均匀，置于冰上，防止凝固。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述无血清培养液的各组分体积百分百为，1
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dmem 96.4%，20%葡萄糖 2.4%，青霉素g 0.2%，谷氨酰胺 1%。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述小鼠是出生后3
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5天的c57bl/6j小鼠。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中dmem/f12培养液还进一步包含体积百分比为1%的n2补料，体积百分比为2%的b27补料，以及终浓度为50μg/ml的氨苄青霉素；步骤（3）在解剖显微镜下进行。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）耳蜗螺旋器的培养天数是10天。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中co2培养箱的培养条件是37℃、5% co2。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中所述温育时间是20分钟。9.根据权利要求1
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2、4
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8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法在耳蜗螺旋器的培养阶段，采用免疫染色标记myo7a方法观察耳蜗基底膜螺旋器组织以及毛细胞活性。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述免疫染色标记myo7a方法包括：1）将培养的耳蜗螺旋器移除培养液，加入2ml 4% 的福尔马林固定液，室温放置15分钟后用pbs洗去；2）加入2ml 0.1%的pbs配制的triton x
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100溶液，室温放置15分钟后用pbs洗去；3）加入2ml 2.5%的pbs配制的bsa溶液，室温放置30分钟后用pbs洗去；4）一抗孵育，其为rabbit anti
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myo7a 1:200，2.5% bsa于pbs中，4
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c过夜；5）用pbs洗去一抗，加入二抗，其为alexa fluor 546 goat
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anti rabbit igg 1:1000, 2.5% bsa于pbs中，室温放置2小时；6）用pbs洗去二抗，后用荧光显微镜进行观察、拍照。