技术特征：
1.构建未知融合基因检测文库的方法，其特征在于：所述构建方法包括如下步骤：a1、将样本的总rna或片段化后的总rna加入逆转录体系中进行反应获得逆转录产物；所述逆转录体系含有逆转录酶、随机引物和tso-n引物；所述tso-n引物从5’到3’依次包含端头序列、通用序列1和3’末端3个鸟苷酸；所述逆转录酶具有模板转换和末端转移酶的活性，会在新合成的cdna的3’末端添加3个c；所述随机引物的序列为6-9个随机碱基；a2、将a1所得逆转录产物加入第一轮扩增体系中进行pcr扩增，获得第一轮pcr扩增产物；所述第一轮扩增体系含有tso-f引物和第一特异性引物；所述tso-f引物从5’到3’依次包括接头序列1和通用序列1；所述第一特异性引物针对融合基因3’端区域设计；a3、将第一轮pcr扩增产物放入第二轮扩增体系中进行扩增，获得未知融合基因检测文库；所述第二轮扩增体系含有所述tso-f引物、第二特异性引物和barcode引物；所述第二特异性引物为ω引物，从5’到3’依次包括5'端特异序列和通用序列2和3'端特异序列，所述5'端特异序列和3'端特异序列针对融合基因3’端区域设计，所述通用序列2不能与所述融合基因结合；所述barcode引物从5’到3’依次含有接头序列2、barcode特异序列和通用序列2；所述barcode特异序列用以区分不同样本，在不同样本之间序列不同。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述tso-n引物的核苷酸序列为序列表中序列1所示，其中，所述通用序列1为序列表中序列1的第13-39位，所述3个鸟苷酸为序列表中序列1的第40-42位。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述第二特异性引物的5'端特异序列和3'端特异序列针对所述第一特异性引物结合位置的上游区域设计。4.根据权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于：所述接头序列1和所述接头序列2为测序接头，根据测序平台进行选择。5.根据权利要求4权利要求所述的方法，其特征在于：所述测序平台为illumina、mgi或iontorrent平台。6.一种未知融合基因的检测方法，包括使用权利要求1-5任一项权利要求所述的构建方法构建未知融合基因检测文库，对所述未知融合基因检测文库进行测序，获得所述未知融合基因的序列。7.用于构建未知融合基因检测文库的产品，所述产品含有权利要求1-5任一项中所述的tso-n引物、所述tso-f引物、所述第一特异性引物和第二特异性引物。8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于：还含有权利要求1-5任一项中所述的随机引物和/或所述的barcode引物。9.根据权利要求7或8所述的产品，其特征在于：所述产品为试剂/试剂盒或系统。10.权利要求1-5中任一项权利要求所述的方法、权利要求6所述的检测方法或权利要求7-9中任一项权利要求所述的产品在未知融合基因检测中的应用。
技术总结
本发明公开了一种未知融合基因的检测方法。本发明所要保护的构建未知融合基因检测文库的方法，包括将样本的总RNA在逆转录体系中进行逆转录或将所述总RNA片段化后在逆转录体系中进行逆转录获得逆转录产物；将所得逆转录产物在第一轮扩增体系中进行PCR扩增，获得第一轮PCR扩增产物，所述第一轮扩增体系含有TSO-F引物和第一特异性引物；将第一轮PCR扩增产物在第二轮扩增体系中进行扩增，获得未知融合基因检测文库，所述第二轮扩增体系含有所述TSO-F引物、第二特异性引物和Barcode引物。通过对使用本发明所提供的构建方法得到的文库进行测序和生物信息分析，可准确得到与已知目标基因相融合基因的信息。标基因相融合基因的信息。
技术研发人员：王沛 陈敏 郑乔松 张幸幸 师晓 王京京
受保护的技术使用者：北京泛生子基因科技有限公司
技术研发日：2021.03.11
技术公布日：2022/9/19