一种骨髓肽的提取制备方法与流程

文档序号:25586531发布日期:2021-06-22 17:01阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种骨髓肽的提取制备方法,其特征在于:包括如下步骤:

步骤1:取新鲜干净的哺乳动物骨头并去其肉及结缔组织,放置在装有75%酒精的培养皿中浸泡3-5小时;

步骤2:通过装有已配好rpmi-1640细胞培养基溶液的注射器插入骨髓腔内,将骨髓腔内的骨髓冲入到离心器皿中;

步骤3:将步骤2处理得到的溶液在36℃-38℃的恒温中水浴通过超声波处理以破碎细胞;

步骤4:将步骤3处理得到的溶液4000-4500rpm离心5min,去上清液;

步骤5:将步骤4处理得到的溶液加入红细胞裂解液,静置8-10小时,加入无菌的pbs缓冲液,该红细胞裂解液与pbs缓冲液的比例为1:9;

步骤6:将步骤5的混合液通过不同规格超滤膜的超滤器从大往小下进行连续分级梯度超滤,然后采用纳滤浓缩技术制得浓缩原料液;

步骤7:根据不同浓度的需要,制出骨髓肽的不同制剂。

2.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法,其特征在于:步骤1中还包括对取出的骨通过有机溶剂萃取分离油脂。

3.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法,其特征在于:步骤2至步骤7的过程与装置都在无菌的环境下操作。

4.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法,其特征在于:将骨髓分散到3-5倍骨髓重量的水中在36℃-38℃的恒温水浴中通过超声处理使骨髓细胞破裂,超声频率为100khz-200khz。

5.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法,其特征在于:红细胞裂解液为取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷(tris)1.3g加水溶解并稀释至500ml,0.22μm滤膜过滤除菌,4℃保存制得。

6.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法,其特征在于:pbs缓冲液为含0.05%吐温-20的ph7.4的磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法,其特征在于:通过不同规格超滤膜的超滤器留分子量6000或10000左右的物质。

8.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法,其特征在于:将制得的浓缩原料液通过真空喷雾干燥得到骨肽,喷雾干燥时,进风温度控制在140-150℃,出风温度控制在70-75℃。


技术总结
本发明公开了一种骨髓肽的提取制备方法,包括以下步骤,取新鲜骨头并去结缔组织,将骨髓冲入到离心器皿中,处理得到的溶液通过超声波处理以破碎细胞,然后离心去上清液,同时加入红细胞裂解液与无菌的PBS缓冲液,将混合液通过连续分级梯度超滤,制得浓缩原料液,根据浓度需要,制出骨髓肽的不同制剂。通过方法可有效对多种材料进行骨髓肽的提取,同时大大提高骨髓肽的提取率,而通过超声破碎可保留其活性,有效避免了蛋白质的变性趋势,同时缩短生产时间;红细胞裂解液与PBS缓冲液的相配合,能进一步提高肽的生成率,而通过在超滤膜的超滤器过滤下可以得到品质最高的骨髓肽,通过喷雾干燥过程与控制进出风的温度,可降低多肽的分子量分布的影响。

技术研发人员:李洪景;刘洋;崔孟龙;仇志烨;宋天喜;朱艳泽;胡艳丽;何志敏;崔云;李良才;朱金亮
受保护的技术使用者:潍坊奥精医学研究有限公司
技术研发日:2021.03.30
技术公布日:2021.06.22
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